用血液涂片法诊断羊水栓塞症

<正> 羊水栓塞症的法医学鉴定,一般采用的方法是通过病理组织切片检验器官中的羊水成份。但对于严重自溶、腐贩的尸体或进入体内的羊水量少的案例,组织学检验是不易发现或很难辩认羊水成份,并且需要较长时间才能做出鉴定。为了寻求一种快速简单易行的检验方法,作者采集下腔静脉血液进行涂片检验羊水成份,获得了较理想的结果。现报告如下:     

单细胞分离荧光原位杂交法用于男女混合血DNA分型

目的采用单细胞分离荧光原位杂交法精确分离混合血样中男性和女性细胞并进行分型检验。方法收集男、女性血,按照男∶女为1∶5、1∶10、1∶20制备混合血样,加入0.075mol/L KCl 600μL,轻混、放置30min后加入150μL固定液离心留沉淀涂片,利用Vysis 30-161050试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光显微捕获系统分离出男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒复合扩增并进行检测。结果捕获8个血细胞即可得到完整的DNA分型,且随着细胞数目的增多,检出率逐渐提高而等位基因丢失率逐渐降低。10个血细胞的检出率最高,为93.75%。5μL男性血液与本实验各比例女性血混合用本文方法检验均可获得男性分型。案例混合血斑经检验获得单一男性和女性分型。结论单细胞分离荧光原位杂交法可用于男女混合血样本中DNA分型检验。     

APM染色法在羊水栓塞诊断中的应用价值

目的　探讨APM染色法在羊水栓塞 (AFE)病理学诊断中的应用价值。方法　采用APM染色法对 1988年至 2 0 0 1年确诊为AFE的 19例病例 (AFE组 )和羊水吸入性肺炎的胎儿 3例 (阳性对照组 )、其它死因的 10例产妇 (阴性对照组 )重新进行染色和组织学检查 ,对其检验结果进行比较分析。结果　阳性组全部检出羊水成分 ,阴性组部分病例检出羊水成分 ,发现漏诊、误诊各 1例。与HE染色相比较 ,APM染色能提高角化上皮和粘液的检出率。结论　APM染色能提高羊水成分的检出率 ,有助于提高AFE诊断的准确性 ,可用于AFE病理学诊断。     

3种骨骼DNA提取方法的应用效果比较

目的对3种方法提取骨骼DNA的效果进行比较,为实际应用中选择方法提供参考。方法应用骨骼孵化液法、DNA Investigator试剂盒法和CTAB法对同一骨骼样本进行脱钙、消化、提取DNA,用紫外分光光度计检测DNA的浓度值;使用Identifilerplus试剂盒进行PCR扩增,3130xl型遗传分析仪检测分型,并用SPSS 19.0软件对各项实验结果进行统计分析。结果 1g骨粉样本经上述3种方法提取,得到的DNA浓度分别为26.53ng/μL±5.47ng/μL、23.63ng/μL±4.56ng/μL、14.93ng/μL±3.88ng/μL;单因素方差分析表明3组数据之间差异性具有统计学意义。PCR扩增后电泳检测结果显示,骨骼孵化液法和DNA Investigator试剂盒法基因座检出率和峰值大致相同,均优于CTAB法。结论本文比较的3种方法均可用于骨骼样本的实际检案,检出率较高的两种方法可作为优选方案。     

液基细胞学技术对减少临床医疗纠纷的应用价值

目的探讨液基细胞学技术对于减少临床医疗纠纷的价值。方法对1531例样本分别用液基细胞学方法和传统巴氏涂片技术进行宫颈细胞学涂片制作,其中液基细胞学方法分别用新柏氏耗材和昂佰氏耗材;涂片根据TBS 2001标准进行诊断;细胞学诊断为LSIL以上病变(包括LSIL、HSIL、SCC和AC)者组织活检进行组织学诊断;应用SPSS11.0软件进行数据分析。结果液基细胞学方法同传统巴氏方法相比,在标本满意度、敏感度、特异度和准确性、假阴性率和误诊率等方面有显著统计学差异(P<0.05),新柏氏和昂佰氏获得结果之间无明显差异。结论液基细胞学技术可以有效提高宫颈癌普查的诊断水平,从而有效防止和减少医疗纠纷的发生;昂佰氏耗材可以替代新柏氏耗材进行液基细胞学检查。     

免疫组织化学检测MMP-11鉴定月经血

目的建立用自制兔抗人基质金属蛋白酶-11（matrix metalloproteinase-11,MMP-11）多克隆抗体鉴定月经血的免疫组化方法,探讨MMP-11蛋白酶的细胞定位。方法运用链霉卵白素-碱性磷酸酶（SAP）免疫组化法检测人月经血及外周静脉血涂片、阴道液涂片、子宫内膜石蜡切片和陈旧月经血痕涂片中的MMP-11。结果MMP-11存在于子宫内膜上皮细胞和间质细胞内;外周静脉血和阴道液涂片未见有MMP-11染色;陈旧月经血痕涂片罕见完整子宫内膜细胞,但能检测到微弱特异信号。结论用自制抗MMP-11多克隆抗体采用免疫组化技术能有效地检测MMP-11,区分月经血和静脉血。     

毛干蛋白单氨基酸多态性鉴定研究

本文建立了毛干蛋白单氨基酸多态性（single amino acid polymorphism,SAP）的质谱检测方法，以DNA测序验证方法的准确性，并设计多组样本检验SAP鉴定的重现性。对来自6个人的25份毛干样本的SAP鉴定结果进行分析，并与毛干来源人的血液外显子测序结果相比较，对于不一致位点进一步使用Sanger法测序确定SAP对应的SNP分型。共设计四组重复性实验测试，对不同直径/生长部位毛干的分型结果进行了一致性验证。通过设计的376对引物进行PCR扩增，成功检测了522个SNP分型，其中32个（6.1%）与前期外显子测序分型不一致，152个（29.1%）为外显子测序中未检测的分型，338个（64.8%）与外显子分型结果一致。四组重复性实验中，组内SAP鉴定准确率平均值为93.6%(95%CI:92.8%～94.5%)，鉴定重现率平均值为96.0%(95%CI:94.3%～97.6%)。在所有25份样本中，有283个SAP位点在至少两个样本中检出，其中23个位点在全部样本中都被检出。因此，毛干蛋白SAP鉴定方法具有较高的准确性和重现性，得到的23个高检出率SAP位点可作为候选...     

磁珠直接吸附法对体态检材游离DNA的提取

目的采用磁珠直接吸附法对人体尿液、唾液、血液3种体态生物检材中的游离DNA进行提取检验,为法医物证中游离DNA的研究及检验工作提供参考。方法对3种生物检材采取离心吸取上清液的方法分离游离DNA,然后采用磁珠直接吸附法进行提取纯化,Identifiler-Plus试剂盒进行复合扩增后常规STR检测。结果在3种检材中均检出了游离DNA,其中血液中游离DNA检出率为100%,唾液为90%,尿液为70%。结论人体体态生物检材中存在游离DNA,同时磁珠直接吸附法可高效、快捷的提取生物检材中的游离DNA。     

角蛋白、粘液、弹力纤维和DIC微栓的染色法

为较好地快速检测羊水栓塞和羊水吸入的组织中多种灵敏度高的有形物质，我们选用酸、碱性染料和混合性试＃似I成人和新生儿尸检组织进行实验性对照研究，建立了一种同时显示角蛋白、粘液、弹力纤维和微栓的新染色方法。材料和方法一、材料选用选自产妇和新生儿的尸检组织进行15％中性甲醛固定，常规脱水、透明和浸蜡的石蜡切片4～6urn。二、试剂配制和染色方法1．试剂配制（l）Victorisblue染色液：Victorisblue（维多利亚蓝）Zg，糊精0．sg，间苯二酚4g，蒸馏水200ml、将上述物质混合煮沸smin，再另将煮沸的30％三氯化铁25ml加入上液中，…     

羊水栓塞死亡医疗纠纷案件的法医学分析

目的分析引发医疗纠纷的羊水栓塞死亡病例的相关因素,以帮助提高对羊水栓塞诊治能力,减少医疗纠纷。方法对我中心2006～2009年间鉴定的8例医疗纠纷相关羊水栓塞死亡病例的临床资料及过失认定进行回顾性分析。结果（1）医疗因素分析：7例具有使用催产素史;3例发生于产前破膜后,5例发生于产后;具有典型临床症状5例,不典型临床症状3例;早期诊断7例;3例实施子宫次全切除术;发生在二级医院以下6例。（2）法医学鉴定分析：催产素使用不当及观察记录缺陷占87.5%（7/8）;7例早期诊断羊水栓塞,但在供氧、解痉和子宫切除方面存在治疗缺陷。结论提高对产前、产后羊水栓塞症状特点的认识和处置能力,强化病历记录规范、完整及充分告知说明,是减少医疗纠纷案件的关键,也是法医学鉴定判断的重要依据。     

直接扩增法用于重大灾难事故中软骨的个体识别

目的探讨直接扩增法对软骨STR检验的有效性,以提高灾难受害者身源鉴定工作效率。方法采用Power Plex~21试剂盒对88份软骨进行直接扩增法检验,同步进行磁珠法比较分型结果。结果 88份软骨检材中,直接扩增法与磁珠法均成功检出84份检材的STR基因型,两者分型结果完全一致。结论Power Plex~21试剂盒直接扩增法可以应用于软骨STR分型检验,且操作简便、快速,在重大灾难事故身源鉴定中具有很好的应用前景。     

中国朝鲜族H19基因上游差异甲基化区SNP分布

目的调查中国朝鲜族群体中H19基因上游差异甲基化区(differentially methylated region,DMR)SNP及单倍型分布,为法医学应用及群体遗传学研究提供基础数据。方法收集中国朝鲜族101份无关个体血样和14份来自5个亲缘关系已知的两代家系血样,用PCR-循环测序、McrBC消化DNA后PCR方法检测H19基因上游DMR的SNP,并用亲源印记等位基因(parentally imprinted allele,PIA)分型法进行单倍型检测,再计算相关遗传学参数。结果在H19基因上游DMR 1174bp的目的基因扩增产物中,共检出13个SNP(rs10840167、rs2525883、rs12417375、rs4930101、rs2525882、rs2735970、rs2735971、rs11042170、rs2735972、rs10732516、rs2071094、rs2107425、rs4930098)和5种单倍型,有9个SNP属于高鉴别能力的遗传标记,其单倍型具有较高的个人识别率,单倍型平均基因多样性(GD)为0.714。应用McrBC酶消化基因组DNA的PIA分型法确定了家系子代样本的母源单倍型。结论 H19基因上游DMR在中国朝鲜族群体中具有很高的遗传多态性,母源单倍型的确定进一步提高了印记基因的法医学鉴定效能。     

六色荧光标记快速PCR扩增体系的建立及验证

目的建立PCR快速扩增程序和体系,并对其技术指标进行验证。方法采用六色荧光标记技术,对24个常染色体STR基因座、1个Y-STR基因座和Amelogenin、Y-In Del基因座进行复合扩增及毛细管电泳检测,同时考察体系的灵敏度、特异性、同一性、稳定性、混合样本及批量样本测试,并观察各种常见检材及降解、脱落细胞检材的分型情况。结果所建立的体系灵敏度达0.062 5 ng,快速扩增仅耗时65 min就可获得准确分型;种属特异性高;各种纸质血样本和混合、降解、脱落细胞检材的分型正确。结论本研究建立的快速扩增体系可显著提升检验速率,分型准确、稳定,对建立STR数据库、研究群体遗传学和进行法医学鉴定有重要意义。     

硅藻硝酸消化法与浮游生物16S rDNA PCR法在溺死鉴定中的比较

目的比较和探讨硅藻硝酸消化法与浮游生物16S rDNA PCR法在溺死鉴定中的应用价值。方法收集40例温州医科大学法医学系2010—2011年受理并证实溺死的鉴定案件,每例案件标本包括肺、肾、肝及现场水样4份样本,分别运用硅藻硝酸消化法与浮游生物16S rDNA PCR法对标本进行检验,硅藻硝酸消化法和浮游生物16S rDNA PCR法所需各器官检材量分别为约20g和2g,现场水样分别为15mL和1.5mL,从所需检验时间以及检出率等方面进行比较分析。结果硅藻硝酸消化法检出硅藻主要为中心硅藻纲和羽纹硅藻纲,浮游生物16S rDNA PCR法可扩增出一条162 bp的条带。平均检验每例案件所需的检验时间,硅藻硝酸消化法为(95.30±2.78)min,少于浮游生物16S rDNA PCR法(325.33±14.18)min(P0.05)。两种方法对现场水样及肺样本的检出率均为100%,而对肝及肾样本的检出率,浮游生物16S rDNA PCR法均为80%,高于硅藻硝酸消化法40%和30%(P0.05)。结论在溺死的法医学鉴定中,应根据具体情况来挑选合适的实验室检验方法。与硅藻硝酸消化法相比,浮游生物16S rDNA PCR法具有检材用量少、信息量大、特异性高等特点,有一定的推广和实践价值。     

采血管中添加剂对血样中乙醇含量的影响

目的：探讨不同种类采血管对血样中乙醇含量检测结果的影响。方法分别用7种一次性真空采血管[无抗凝剂管、促凝剂管、分离胶-促凝剂管、枸橼酸钠（1∶4）管、枸橼酸钠（1∶9）管、柠檬酸钠（9∶1）管、EDTA-K2管]采集10名志愿者饮酒后2 h血液,用顶空气相色谱法检测血样中乙醇含量。结果相同血样用不同的采血管,其乙醇含量检测结果不同,依次为分离胶-促凝剂管〉促凝剂管〉无抗凝剂管〉EDTA-K2管〉枸橼酸钠（1∶9）管〉枸橼酸钠（1∶4）管,柠檬酸钠（9∶1）管与枸橼酸钠（1∶9）管检测结果基本一致。结论采集涉嫌酒后驾驶的驾驶员血样,应选用一次性真空采血管,首选EDTA-K2管。     

基于支持向量机实现骨骺发育分级的自动化评估

目的：运用支持向量机（support vector machine，SVM）实现尺、桡骨远端骨骺发育分级的自动化评估。方法收集我国140例11～19周岁青少年左侧腕关节X线正位片作为训练样本。将尺、桡骨远端骨骺分为五个发育分级，每个分级均包含28例样本。另选35例作为独立校验样本。建立尺、桡骨远端骨骺五个发育分级的SVM分类模型，用留一交叉验证法（leave one out cross validation，LOOCV）进行模型内部交叉验证以及梯度方向直方图（histogram of oriented gradient，HOG）进行模型外部验证，分别计算其准确率（PA）。结果桡骨远端骨骺分级SVM建模、LOOCV和HOG的PA分别为100.0%、78.6%和82.8%。尺骨远端骨骺分级SVM建模、LOOCV和HOG的PA分别为100.0%、80.0%和88.6%。结论运用SVM建立的尺、桡骨远端骨骺发育分级的自动化模型具有一定的可行性，为法医学骨龄评估软件的开发奠定基础。     

血液中乙醇检验全自动体系的建立

目的建立血液中乙醇含量检验的自动化体系。方法采用自动化工作站提取-顶空气相色谱检验。在自动化工作站提取中,对负压采血、顶空瓶密封时间、取样针进行考察优化,并对自动取样和手工取样进行比较。结果乙醇的自动化工作站提取-顶空气相色谱检验的定量分析数据稳定,两份平行样品相对相差小于5%,优于手工提取。乙醇含量在0.1~3.0 mg/m L范围内线性关系良好(r≥0.999),重现性好。结论该方法具有操作简单快捷、实验流程更加规范、实验数据更加准确、消除人工操作误差、重现性好等特点,可广泛应用于血液中乙醇定性定量的检验鉴定。     

GPD1-L基因检测及其与青壮年猝死综合征的相关性

目的探寻甘油-3-磷酸脱氢酶样基因(glycerol-3-phosphate dehydrogenase 1 like gene,GPD1-L)的变异位点,讨论其与青壮年猝死综合征(sudden manhood death syndrome,SMDS)的关系。方法提取SMDS组及健康对照组血样的基因组DNA,采用PCR法扩增GPD1-L基因编码区外显子、外显子-内含子交界区以及3′侧翼区序列,直接进行DNA测序以明确遗传变异类型,并进行基因型频率和等位基因频率的统计学分析。结果在SMDS组中共检测到2个变异位点,c.465CT和c.*18GT,后者在SMDS组和对照组中基因型分布和等位基因频率存在一定差异,但无统计学意义(P0.05)。结论 GPD1-L基因变异与中国人SMDS发生的相关性尚有待进一步研究。     

脂肪栓塞中苏丹Ⅲ染色的定量分析

目的探讨苏丹Ⅲ染色如何定量应用于脂肪栓塞的法医学鉴定。方法应用苏丹Ⅲ对11例肺脂肪栓塞猝死的案例和11例其他原因致死的案例进行染色,并结合统计学方法对脂肪栓塞的阳性面积百分率及脂肪栓子数进行定量分析。结果脂肪栓塞致死者肺内苏丹Ⅲ染色阳性面积百分率为（5±1．7）％、脂肪栓子数为（9±2．4）％,均远大于其他原因致死的案例（P〈0．01）。结论苏丹Ⅲ染色法定量分析在脂肪栓塞中的法医学鉴定上结果可靠。     

内蒙古鄂温克族人群30个InDel位点遗传多态性

目的研究30个插入/缺失(insertion/deletion,InDel)位点在内蒙古地区鄂温克族人群中的遗传多态性,并评估其在法医学中的应用价值。方法采集87名鄂温克族健康无关个体的外周血样,提取基因组DNA,对样本的30个InDel位点进行复合扩增并分型,运用优化的Power Stats v1.2软件对各位点进行HardyWeinberg平衡检验及遗传学参数的计算,并采用SNPAnalyzer v2.0软件检验各位点间是否存在连锁不平衡。基于30个InDel位点的等位基因频率进行分子方差分析、主成分分析、系统发育树的构建,探讨鄂温克族与其他群体的关系。结果 30个InDel位点经校正检验后符合Hardy-Weinberg平衡定律。经Bonferroni法校正后,两两配对的InDel位点之间处于连锁平衡状态。群体遗传学研究结果表明,鄂温克族与河南汉族和北京汉族的遗传关系较近,与欧洲和墨西哥地区的族群较远。结论 30个InDel位点在内蒙古鄂温克族人群中具有相对较好的遗传多态性,可作为STR检测体系的有益补充。