三种磁珠法提取脱落细胞DNA的比较

正法医DNA鉴定中的脱落细胞检材是指含有人体皮肤黏膜脱落上皮细胞的检材,是当前刑事案件现场最有可能提取到的生物物证。目前关于脱落细胞提取纯化方法对比的报道~([1-3])较多,但相同提取方法效果横向比较的研究较少。本研究对IQ磁珠、M48磁珠、Prep Filer磁珠三种常见的磁珠法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为法庭科学实践提供参考依据,现报道如下。     

QIAshredderTM柱结合M48纯化试剂盒提取微量DNA

法医检材中DNA含量少、质量差是DNA检验失败的重要原因之一，在提取时．裂解液能否实现全部转移。是减少DNA损失的重要环节。法医DNA检材载体大多为纱线、脱脂棉类，吸附力强，本研究利用QIAshredderTM柱结合使用M48纯化试剂盒．提取、纯化此类检材中的DNA．在多起脱落细胞类检材DNA检验中取得了成功，发挥了较好的作用。现报道如下。     

改良EVO150-8方法在DNA自动化检案中的应用

目的探讨改良EVO150-8方法在批量生物检材DNA检验中的应用价值,建立一种自动化、简单、快速的DNA提取方法。方法采用改良EVO150-8自动化核酸提取纯化仪器与DNA IQ磁珠法纯化试剂盒,对各现场提取的880份血迹、烟蒂、口香糖、精斑（混合斑）、组织、骨骼、脱落细胞等常见生物检材进行DNA提取与纯化,采用Identifiler试剂盒进行扩增检验,用3130XL电泳,GeneMapper ID V3.2分析软件进行分析比对。结果在880份生物检材中,有836份检材成功获得STR分型;检验92份检材仅需时128min。结论改良EVO150-8适合批量生物检材的自动化提取。     

Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究

目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子（头套）中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。     

3种方法联合运用提取人体脱落上皮细胞DNA

目的寻求提高法医物证检验中附有人体脱落细胞载体检材的DNA检出率的方法。方法根据案件检材的具体条件．选择3种提取方法即Chelex-100法、Chelex-100联合有机法和Chelex-100联合磁珠法。结果采用了分步提取DNA法,可充分、有效地提取微量DNA,提高了人体脱落上皮细胞有效DNA的检出率。结论根据第一步提取方法的检测结果,来调整下一步的提取策略,如是否加以纯化浓缩,可增加人体脱落上皮细胞有效DNA的检出率。     

67例皮肤接触样本的采集及DNA提取方法的比较分析

<正>DNA分型检验已广泛应用于法医学实践检案,尤其皮肤脱落细胞DNA分型检验,对侦查破案有重要意义[1]。而对于此类检材,选择检材预处理及DNA提取方法至关重要。本文针对常见的皮肤接     

刑事现场188份接触DNA检材法医学检验分析

目的分析188份接触DNA检材的提取、送检和检验结果,探讨接触DNA检出率及可能影响接触DNA检验的因素。方法收集本辖区2016年1月至2016年10月提取并送检的188份接触DNA检材,按照检材载体性质、提取方法、送检时间、检出率等进行分类,采用SPSS13.0软件对数据进行统计分析和χ2检验。结果188份接触DNA检材成功进行STR分型的有38份,检出率为20.21%;其中表面质软、粗糙的载体接触DNA检出率58.82%,高于其它载体接触DNA检出率组的差异具有统计学意义;直接原物提取的接触DNA检材检出率42.11%,高于脱落细胞粘取器提取、棉签拭子转移提取的检出率组的差异具有统计学意义;送检时间早的检材检出率高于送检时间晚的检材组且具有统计学意义。结论接触DNA检材的检出率受载体性质、提取方法、送检时间等因素影响,日常现场勘查时要注重发现检出率高的载体上的接触DNA选择适当的方法提取,并及时送检。     

衣帽上脱落细胞微量DNA检测方案初探

由于个案中微量DNA检材的成功提取及STR检测技术的不断提高,强化了现场勘察人员提取衣帽上脱落细胞微量DNA检材的意识。针对本实验室受理的此类检材逐渐增多及衣帽上微量DNA检材的特点,本文作者在检案中摸索出通过多重提取、纯化并选择最佳扩增体系的检测方案,明显提高了检测成     

火柴棍上汗斑DNA检验3例

留在刑事案件现场物品上的汗斑,因其含脱落上皮细胞少,DNA含量低,使用常规酚-氯仿法或chelex法提取DNA进行STR分型成功率较低。本文作者应用QIAamp DNA Micro Kit(QIAGEN公司)提取3起案件汗斑DNA并进行了STR检验及mtDNA测序,现报道如下。1检材检材1某县1起纵火案现场提取到的点     

微量口腔脱落细胞检材的DNA检验

目的寻求提高微量口腔脱落细胞检材的DNA检验成功率的简便有效的提取方法。方法对不同载体上的100份微量口腔脱落细胞检材采用小体积Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用IdentifilerTM复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从25根饮料吸管上提取的DNA量在0.72～116.7.8ng,16个水杯杯缘提取的DNA量在2.15-142.5ng,31个饮料瓶(罐)口提取的DNA量在1～34.65ng,10根筷子上提取的DNA量在3.35～26.6ng,12个果核中提取的DNA量在0.294～21.4ng,6份吃剩的骨头中提取的DNA量在0.88～5.88ng。100份检材性别及9个以上STR位点分型成功率平均为59.38%。除了使用者的个人原因外,检材的提取送检方式、检材的质地、饮料的性质对提取的DNA量有显著影响,是否加蛋白酶K对提取的DNA量无显著影响。结论采用小体积Chelex-100法可对60%左右的微量口腔脱落细胞检材提取DNA进行STR分型。     

接触DNA在侦查实践中的应用

随着DNA提取和检验技术的进步与不断发展,犯罪现场遗留的DNA对于刑事犯罪侦查中犯罪嫌疑人的确定有着举足轻重的作用,但同时犯罪嫌疑人的反侦察意识越来越强,在作案过程中以及实施犯罪行为后遗留在现场的物证微乎其微。因此在对现场物证进行采集的过程中,接触性生物物证的发现、提取和DNA检出越来越重要。目前在犯罪现场中接触性检材所占的比例越来越大,对于案件的侦破也发挥着越来越大的作用。然而这些接触性检材一般极其微量、体积小、较为隐蔽、肉眼不易观察,且现场的各种污染大大加快了这种微量检材的降解速率,因此对于这类检材的检验和分析就成了法医物证检验工作的重点和难点。本文综述了接触DNA的种类、采集和提取方法,影响其检出的因素以及检验中遇到的问题,以期能更好地将其运用到法医学鉴定实践中。     

微量生物检材提取2例

微量生物检材的提取是DNA检验技术中经常碰到而又较难处理的问题。作者通过对在实际检案中遇到的两种特殊生物检材上微量DNA的提取,成功进行DNA分型,报道如下。1案例案例1:某日,我市一女子被杀,现场提取到有价值的物证仅为6个果冻壳。通过擦拭果冻壳“撕口处”脱落细胞,采用推柱去载体,离心浓缩细胞,Chelex-100法提取,均成功检见包括Amel在内的10个位点。结果显示有4个与死者血的DNA分型一致,另两个为同一男性的DNA,经过调查确认为犯罪嫌疑人所留。案例2:某日,某盗窃案现场提取到犯罪嫌疑人喝过的“娃哈哈鲜橙汁”饮料瓶1只。通过擦…     

果核微量生物物证DNA检材提取方法的考量

正近年来,犯罪现场物证呈现多样化、微量化的发展趋势。微量物证具有体积小、隐蔽性强、不易察觉、不易毁灭等特点~([1])。目前微量物证DNA检验工作的瓶颈主要在接触性DNA检材的发现和提取上,接触性DNA类生物检材因其DNA含量少、PCR抑制物多、DNA检验成功率低而成为法医DNA检验的重点和难点~([2])。本文结合实际工作中的3起案例,对果核上微量生物物证DNA的提取方法     

一种收集衣服上脱落细胞的新方法

目的建立一种生物脱落细胞的微量提取新方法。方法利用一套自制的“生物细胞提取仪”无损提取衣物等载体上的人体脱落细胞,采用Chelex-100法提取DNA,用不同的试剂盒进行STR复合扩增检验。结果10例检材都得到16个基因座成功分型。结论用该方法提取微量细胞DNA,可获得满意的DNA分型。     

杯口边缘附着微量口唇脱落细胞的检验

目的　探讨对遗留在杯口边缘的微量口唇黏膜脱落细胞进行DNA分型的可行性及影响因素 ,为案件的侦查提供指导作用。方法　分类提取饮水后容器边缘口唇黏膜脱落细胞中的DNA ,应用荧光标记PCR STR分型技术进行DNA分析。根据每个样本DNA基因座的检出个数 ,分别计算出基因座检出率。结果　不同容器、不同饮料对口唇黏膜脱落细胞DNA检验的影响不同。结论　杯口遗留的口唇黏膜脱落细胞 ,可作为一种法庭生物检材进行DNA分析 ,在实际办案中占有一席之地     

大体积液体检材过滤装置研发及提取技术

目的研究一种新型的"液体检材过滤提取仪",用于过滤、富集大体积液体检材中的脱落细胞。方法在液体检材过滤提取仪中分别安装8种不同孔径的滤膜(0.45μm、10μm、20μm、30μm、60μm、80μm、120μm的尼龙膜、无纺布),依次过滤、富集64份200 mL洗手水样本;采用M48磁珠法提取滤膜上富集的细胞DNA;再分别对提取到的DNA用7500荧光定量PCR仪进行定量;根据定量结果进行DNA-STR检验。结果 10μm和20μm孔径的尼龙网格膜成为该过滤提取仪首选,无纺布次之。结论 "液体检材过滤提取仪"可用于法庭科学实际案例中大体积液体检材中脱落细胞的过滤、富集。     

脱落上皮细胞类生物检材的自动化提取

目的建立一种自动化提取脱落上皮细胞类生物检材DNA的方法。方法附着于不同载体上的脱落上皮细胞类生物检材共278份,应用Eppendorf epMotion 5075LH工作站结合DNA IQTM系统提取模板DNA,并用Identifiler试剂盒进行STR检验。结果在278份被检的生物检材,其中126份检材获得13个基因座以上的STR分型,不同类型的检材其检出率不相同,最高达73.44%,最低为10.89%。结论脱落上皮细胞类检材应用自动化工作站提取DNA模板可在法医日常检案中广泛应用。     

衣物载体上人体脱落细胞的负压吸附采集法

目的建立脱落细胞负压吸附方法,用于DNA检验中衣物等载体上人体脱落细胞的采集。方法检材包括由志愿者佩带1、5、10、20m in纱线手套,穿着5、10、20m in的内衣以及外套、鞋、帽子、头套、袜子、水杯、矿泉水瓶等。在吸尘器的进风口处连接特制的吸筒,一端覆盖具有拦截和静电吸附细胞能力的特制吸附膜,选择适当负压对各检材相应部位进行吸扫。收集吸附膜上的脱落细胞,采用Chelex-100法提取DNA,AmpFLSTR Identifiler复合扩增试剂盒扩增检测。结果上述检材用本文负压吸附法采集人体脱落细胞,经检验均获得清晰、完整的STR分型图谱,并与检材提供者的基因型一致。结论本文建立的脱落细胞负压吸附技术可有效吸附载体上的脱落细胞,适用于DNA检案实践。     

M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的初步比较

目的对M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考。方法选取案件受理检材50例烟蒂、50例纺织物品、50例作案工具,根据不同条件分别用吸附法、沾附法获得DNA,采用磁珠法（M48）和Chelex-100法提取后,常规STR检测。结果烟蒂类检材采用2种方法提取DNA,所得结果没有明显差异;纺织物品和作案工具上脱落细胞DNA的提取采用M48磁珠法提取的效果明显优于Chelex-100法。结论相对而言,M48磁珠法更具优势。     

指纹脱落细胞的STR检验

正现场遗留的帽子、口罩、衣服、手套等生物学检材,一般含有较多脱落细胞,DNA检验比较容易,然而对于指、掌纹短时间接触部位,由于所含脱落细胞少,且部分细胞核DNA容易降解,STR分型成功率较低。本研究对指纹脱落细胞分别应用Chelex-100、QIAamp DNA Investigator Kit、Mag Attract M48 DNA Manual Kit磁珠及直接扩增法进行STR检验,并比较分析。