Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA，应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量，同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为：37份滤纸、纱布血痕0．042～5．28ng／μl，16份口腔拭子1．15—4．21ng／μl，18份烟头0．016～1．46ng／μl，10份肋软骨0．531—14．40ng／μl，8份肌肉5．75—24．80ng／μl，7份指甲0．788—11．50ng／μl，17份精斑0．79～99．50ng／μl。在建立的8μl扩增体系中，根据上述结果，调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0．5—3ng之间，大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0．5—3ng之间可得到有效STR扩增，浓度为0．5ng／μl以上的DNA样品，用小体积模板（1μl）比大体积（3μl）模板扩增效果好。     

闽南地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性调查

本文通过对中国闽南地区汉族15个STR基因座遗传多态性的研究,旨在获得该地区人群的基因频率等遗传学数据,为完善我国STR基因数据库,广泛开展人类群体遗传学及法医个体识别等研究提供基础资料。1材料和方法1.1样本122份无关个体EDTA抗凝血样本采自调查证实三代以上居住于福建省安溪县与南安市的汉族群体,其中男性90例、女性32例。血样本用EP管分装,-30℃冰冻保存。1.2DNA提取及定量取血样3.5μl,常规Chelex-100法[1]提取DNA,溴化乙锭荧光法[2]测DNA含量。1.3PCR复合扩增采用AmpFLSTRIdentifilerPCR扩增试剂盒(美国ABI公司),…     

指甲垢中异体DNA的检验

在人体伤害案件中,受害人与案犯有近距离的接触或搏斗时,有可能抓刮到案犯皮肤,并在指甲垢里留下肉眼看不到的皮屑组织等微量生物检材,本文对11例指甲垢中异体DNA检验做了分析,以期为同类案件的鉴定提供借鉴。1材料与方法1.1样本来自本实验室日常案件中24名死者(女性20人,男性4人)的240枚指甲,直接剪取指甲板突出皮肤的边缘部分。其中机械性窒息死亡17人,失血性休克死亡4人,颅脑损伤死亡3人;死亡时间最短1h,最长7d。1.2方法试剂5%Chelex-100,蛋白酶K,AmpFISTR(Profiler Plus试剂盒(AB I公司),AmpFLSTR ProfilerIdentifilerTM试剂…     

一种快速批量DNA检测方法

本文在硅珠法提取DNA的基础上,研究建立了一种快速高效批量提取、扩增、检测DNA的方法。现介绍如下。1材料与方法1.1样本所有嫌疑人员的血样均用滤纸采集。1.2主要仪器设备及试剂9700扩增仪(ABI公司)、3100遗传分析仪(ABI公司)。裂解液(12g硫氰酸胍、10ml0.1M Tris-HCL,pH6.4、0.8ml0.5MEDTA,pH8.0、0.5ml TritonX-100),硅珠悬液(6g SiO2加水到100ml),10%十二烷基肌氨酸钠(SLS),Profiler Plus试剂盒(ABI公司),去离子甲酰胺、Rox500内标(ABI公司)。1.3方法DNA提取分别剪取2mm×3mm大小的血痕放入96孔板相应的孔中。用排枪…     

微量口腔脱落细胞检材的DNA检验

目的寻求提高微量口腔脱落细胞检材的DNA检验成功率的简便有效的提取方法。方法对不同载体上的100份微量口腔脱落细胞检材采用小体积Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用IdentifilerTM复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从25根饮料吸管上提取的DNA量在0.72～116.7.8ng,16个水杯杯缘提取的DNA量在2.15-142.5ng,31个饮料瓶(罐)口提取的DNA量在1～34.65ng,10根筷子上提取的DNA量在3.35～26.6ng,12个果核中提取的DNA量在0.294～21.4ng,6份吃剩的骨头中提取的DNA量在0.88～5.88ng。100份检材性别及9个以上STR位点分型成功率平均为59.38%。除了使用者的个人原因外,检材的提取送检方式、检材的质地、饮料的性质对提取的DNA量有显著影响,是否加蛋白酶K对提取的DNA量无显著影响。结论采用小体积Chelex-100法可对60%左右的微量口腔脱落细胞检材提取DNA进行STR分型。     

河南地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性

应用Ampflstr Identifiler荧光标记复合扩增系统对220例河南地区汉族无关个体进行15个STR基因座的多态性调查,获得了河南汉族群体遗传学调查数据,现报道如下:1材料和方法1·1实验材料220例河南地区汉族无关个体血样取自郑州市公安局日常建库人员,男性195名,女性25名。1·2方法[1、2]1·2·1 DNA提取Chelex-100法提取样本DNA1·2·2 PCR反应按Ampflstr Identifiler Kit说明书用ABI9700型扩增仪进行复合扩增,检测D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、THO1、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S…     

D2S1338基因座等位基因丢失1例

<正>1案例资料1.1样本与检测某区县公安局送检的未知名尸体心血(滤纸)。采用Chelex-100法提取样本基因组DNA,分别用Identifiler-Plus和MiniFiler复合扩增系统进行复合扩增,扩增产物用ABI 3130XL型DNA测序仪检测,数据收集及分析采用GeneMapper 3.2软件。     

洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA

目的考察洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA的应用价值。方法收集200枚刑事案件中受害人指甲,采用洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA;用Identifiler试剂盒进行PCR扩增,3030xl遗传分析仪进行分型检测。结果应用洗涤法结合硅珠法在200枚指甲中有64枚(32%)检出异体DNA,其中52枚为混合型,12枚为单一异体DNA;另有104枚检出受害人单一DNA。结论洗涤法结合硅珠法可应用于指甲垢DNA的提取。     

指甲擦拭物Y-STR检验在女性被杀案件中的应用

1案例 本市发生一起女性被害案件。现场遭到很大程度的破坏．通过混合斑等常规生物检材检测．均未得到有效证据。技术人员遂提取了死者指甲进行DNA检验。用双蒸水浸润的纱线擦拭被害人指甲内侧尖部．放入1．5mL离心管中．采用Chelex法提取检材基因组DNA，ldentifilerTM试剂盒（美国AB公司）复合扩增检测，结果在被害人的指甲擦拭物中检出含有微量     

利用犬STR基因座检验认定犬精斑1例

1　案情简介2 0 0 3年 7月 2 3日 ,某地发生一起恶性强奸案 ,犯罪嫌疑人万某将其前女友骗至其家中 ,将该女灌醉后强奸 ,随后万某将其所饲养的雄性大丹犬的生殖器插入该女的阴道 ,并推犬的臀部 ,直至该犬射精。2　检验情况收检的检材包括受害人、犯罪嫌疑人、血痕、大丹犬的血痕 ,受害人的阴道擦拭物。阴道擦拭物酸性磷酸酶试验阳性 ,镜检可见精子。采用二步消化法提取阴道擦拭物中的精子DNA ,用chelex - 10 0树脂法提取受害人、犯罪嫌疑人及犬的血痕DNA ,分别用ProfilerPlus(ABI)、CanineI ,Version 3.0 (ABI)两个试剂盒对上述检材进…     

DNA IQ^TM SYSTEM在疑难指甲DNA检验中的应用

目的探索DNA IQTMSYSTEM在疑难指甲DNA提取中的应用。方法 15份疑难指甲采用Chelex方法检验没有成功获得STR分型图谱,采用DNA IQTMSYSTEM提取法并纯化,采用Identifiler PLUS试剂盒进行复合扩增,产物经ABI3130XL型DNA基因分析仪检测。结果成功获得15例疑难指甲的STR基因座DNA分型。结论 DNA IQTMSYSTEM方法能快速、有效提取疑难指甲DNA进行STR分型。     

线粒体DNA cytb和HVI的分析用于种属鉴定

目的以线粒体DNA为目标序列,探讨生物检材的种属来源问题。方法复合扩增线粒体DNA细胞色素b基因(Cb)片段和D-环HVI上人源特异性DNA片段,2%琼脂糖凝胶电泳检测复合扩增产物谱带;用常规测序技术获得种属来源不明的检材Cytb基因序列,登陆美国国家生物信息中心网站主页(http://www.ncbi.nlm.nih.gov),将Cytb序列的测序结果用BLAST2.2.9[2004.5.1]进行匹配查询,查询数据库中存在的与其相匹配的物种条目。结果检材经复合扩增后电泳检测可区分人源性检材和非人源性检材;用生物信息法可确定检材种属来源结论检测线粒体DNA细胞色素b基因和D-环HVI的有关序列可在DNA分子水平上鉴别人源性检材和非人源性检材,结合测序的分子生物信息学方法,可对检材进行种属鉴定。     

PuriTyper~(TM)法医学纯化试剂盒的性能验证

目的验证PuriTyperTM纯化试剂盒各项性能指标和法医学应用价值。方法收集及制备抗凝血液、常见案件检材(唾液、烟头、精液、毛发、指甲、骨骼及组织块)、斑痕样本(血斑、唾液斑、精斑)以及模拟添加抑制剂和模仿自然环境中放置的血斑。采用PuriTyperTM纯化试剂盒提取纯化并进行DNA定量,IdentifilerTM复合扩增试剂盒扩增,产物经ABI 3130遗传分析仪进行检测,Genemapper软件分析结果,对该试剂盒灵敏度、稳定性、重复性、检材适应性进行测试。结果采用该试剂盒提取0.1～40μL血液分别获得0.042～26.45ng/μL的DNA。3种斑痕样本DNA产量平行试验结果稳定。不同类型检材重复检验所获IPC的CT平均值在27.60至28.03之间。常见案件检材所得分型与已知结果均一致。结论 PuriTyperTM纯化试剂盒能够满足法医DNA检验的要求,对法医学实践具有重要的应用价值。     

微量PCR反应体系在两种试剂盒中的应用

美国AB I公司的Profiler PlusTM试剂盒和Identifi-lerTM试剂盒在当前法医DNA检案中应用广泛,但价格昂贵。本实验利用5μl体系进行PCR扩增取得满意效果,降低了检验成本。1材料与方法1.1材料法医DNA检案中常规检材,血痕、精斑、烟蒂和毛发(带毛囊)各20份。Profiler PlusTM试剂盒和IdentifilerTM试剂盒(AB I,USA)。1.2方法1.2.1 DNA提取上述检材采用Chelex-100法[1]提取模板DNA。取9mm2血痕加入5%Chelex-100150μl,56℃2h;精斑经两步法视镜检精子量多少酌情加入5%Chelex-100 150~250μl,PK 10μl(2mg/m l),DTT 10μl(1mol/L…     

Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究

目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子（头套）中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。     

3种提取高度腐败检材DNA的方法比较

本文对3种DNA提取方法在高度腐败检材DNA提取中的应用进行了比较,供法医学实践参考。1材料与方法1.1材料3份检材均为尸体肋软骨,其中1号为死后在水里浸泡18天解剖,酒精固定2年的检材,2号检材为死后15天解剖,酒精固定1年的检材,3号检材为死后10天解剖,后酒精固定1月的检材。1.2 DNA提取Chelex-100法[1]3份检材各500mg剪粹,分别加入200μl 5%Chelex-100,10μl PK(10mg/m l),10μlDTT(39mmol/m l二硫苏糖醇),37℃水浴过夜,100℃加热10m in,剧烈震荡,10 000 r/m in离心10m in,上清备用。有机法[2]3份检材各500mg剪粹,分别加入400μl TES…     

荧光标记短片段STR复合扩增系统的法医学应用研究

目的解决严重降解(低于300bp)DNA检验问题,提高降解DNA的检出率。方法重新设计引物,减小扩增产物片段长度,用荧光标记短片段STR复合扩增体系进行DNA检验,扩增结果与用Identifiler试剂盒扩增出的结果进行比较。结果用荧光标记短片段STR复合扩增系统对实际案件中的高度降解DNA检材进行检验,可以获得满意分型。结论该系统可用于严重降解DNA检材的检验工作。     

衣物类生物检材DNA检验的研究

目的建立对衣物类生物检材STR检验的有效自动提取纯化方法。方法对100例衣物类生物检材用EZ1DNA Investigator试剂盒、EZ1Advanced XL工作站的Large-Volume程序(大体积法)进行提取纯化,AmpFLSTR~Identifiler~Plus荧光STR复合扩增,3500x L型遗传分析仪分析结果。结果 69份检材中检出了单一DNA分型结果,9份检出了混合基因型,22份未检出基因型。结论该方法对衣物类生物检材DNA提取纯化后进行荧光STR检测,可应用于法庭科学实践。     

河南汉族人群12个X-STR基因座遗传多态性

正采用AGCU X-12荧光标记复合扩增系统,对河南汉族群体12个X-STR基因座的遗传多态性进行调查,旨在为法医学应用及群体遗传学研究提供基础数据。1材料与方法1.1样本538例河南汉族无关个体纸质血样取自作者实验室日常建库积累,男性269名,女性269名。1.2 X-STR扩增及分型检测采用AGCU X-12免提系统(无锡中德美联生物技术有限公司)进行复合扩增,反应体系为10μL,内含反应混合物4μL,引物2μL,C-Taq(2.5U/μL)DNA聚合酶0.25μL。热循环参数为:95℃2min;94℃1min,58℃1min,72℃1min,30个循环;60℃60min;4℃保温。取1μL扩增产物与0.5μL内标Siz-500和10μL去离子甲酰胺混合,95℃变性3min后,冰浴     

混合精斑DNA三种提取方法的比较

在法医物证学上,对于混合斑检材,一般采用Chelex法[1,2]抽提DNA,由于得率和纯度较低,检测存在失败的可能。为了提高成功率,作者对检案过程中抽提DNA的步骤进行了优化,现报道如下。1材料与方法1.1检验材料1号检材为卫生巾,2号检材为卫生纸,3、4号检材均为蓝色内裤,其中3号检材较脏且混有血痕。分别剪取1～4号检材微量,涂片经伊红美兰染色,镜检,1、2、4号检材均检见人精子,3号检材检见大量上皮细胞及少量人精子。1.2仪器与试剂梯度PCR仪(德国,Eppendorf);DYY-Ⅲ-4型稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂);人STR六个双基因座复合扩增银染试剂…