组织切片DNA提取的探讨

在医患关系纠纷中,病理组织切片经常被作为至关重要的证据,但对它的检验是目前法医DNA检验的难点。因样本制作固定的时间、保存环境等不同因素的影响,病理组织切片DNA检出率并不高。本文从实际检案角度出发,详细介绍了病理组织切片DNA提取的过程,并分析了其可能影响因素。     

福尔马林固定组织血型检验1例

目前，国内外有关福尔马林固定或石蜡包埋组织ABO血型及酶型检验方法的报道不多，尚无成熟的经验，笔者在办案工作中遇到这样一个案例，经检验获得了理想的结果，并以此结果为依据一举破案，现报道如下。1案情与检验情况某女，14岁（残疾人）被奸致孕，同年引产一胎儿，其上、下肢组织用福尔马林固定一周后被检。最初分别用清水冲洗福尔马林固定的组织24h、36h、48h，匀浆，取上清经粘片法检测ABO血型。A侧端曾出现程度不同的弱凝集，B侧端一直为较明显的凝集，该结果不太稳定。为排除因福尔马林引起的假阳性干扰，又对匀浆后的检材进行…     

法医DNA实验室的DNA污染和防范

DNA污染是产生DNA鉴定结论错误的重要因素,法医DNA实验室要努力去解决这一问题。DNA污染有自身污染、交叉污染、PCR污染3种。法医DNA实验室要采取实验室分区、严格检验操作步骤、对试剂及消耗材料进行质量控制等方法防止发生DNA污染,采取设置对照样本、核查DNA结果、建立DNA排查数据库等方法监测和发现DNA污染。     

人体组织在非缓冲福尔马林固定剂中的STR检测时限

目的评估经非缓冲福尔马林固定不同时间后的人体组织STR分型有效性,了解各种人体组织在非缓冲福尔马林固定剂中可获得完全STR分型位点的时限。方法市售40%福尔马林溶液经1∶9稀释后在室温(15～20℃)下固定人体组织,不同时间后取样。以QIAamp DNA法和IQTMDNA System法提取DNA,用quantifiler humanTaqman探针法进行DNA定量,用常规16 STR位点的AmpFSTR identifiler kit和短小片段9 STR位点的AmpFSTR Min-iFiler kit进行PCR扩增,在3100遗传分析仪进行扩增DNA片段长度检测,用GeneMapper ID v3.2对STR位点检出率进行分析。结果福尔马林固定时间、组织类型以及DNA提取方法、PCR的DNA模板终浓度均影响非缓冲福尔马林固定后人体组织STR分型效能。DNA提取用QIAgen法为优,DNA模板终浓度的最佳范围在1～3ng/μL。各类型组织在非缓冲福尔马林固定剂中的降解速率有差异,肺组织的降解速率最慢,肝、肠组织最快。固定时间在4d内的组织可以获得常规STR的完整位点数;固定时间在15d内的组织可以获得miniSTR的完整位点数。结论非缓冲福尔马林固定人体组织时间是影响STR分型的最主要因素,其次组织类型、提取方法、DNA模板浓度及STR基因座的选择也是此类降解样品成功检测的关键因素。     

福尔马林对中毒检材化验影响的探讨

对中毒鉴定，应该收集新鲜组织和体液，冷藏保存，不宜使用防腐剂，以免化验时发生错误。因有的防腐剂本身即为毒物或其中含有毒物，如乙醇或甲醇中毒的检材，不能加酒精或福尔马林作防腐剂，且若干防腐剂如福尔马林还原性强，与许多物质易发生反应，使化验发生困难；防腐剂的存在还干扰有些毒物的提取，固定过程本身也能改变、掩盖及破坏许多物质，所以法医工作者一直认为福尔马林固定过的检材是最难分析的检材之一。在实际工作中，常遇到解剖时没有特殊中毒迹象，未留取新鲜检材，尔后怀疑中毒，这时福尔马林固定过的组织成为唯一可提供化…     

石腊块组织中DNA纹印的可测性

<正> 试图在福尔马林固定和石腊色埋的组织中检测DNA纹印图谱,没有获得清晰的图象,提示高分子量的DNA已照常降解了。为了探讨在石腊块制备中DNA破坏的进程,以取自尸体解剖的新鲜标本进行了实验,得出下列结果:①福尔马林固定的组织(肺、心、肾等标     

不同染色组织切片及不同组织固定方法对检测STR基因座的影响

目的探讨不同染色组织切片及不同组织固定方法对DNA检验的影响。方法采用Chelex100法及浓缩纯化方法提取DNA,PCR扩增后310型遗传分析仪检测。结果福尔马林固定4天以内或70%乙醇、无水乙醇分别固定1年及15年的HE染色切片可以检见Amel及9个STR基因座。PTAH等5种特殊染色未能检出相应基因座DNA谱带。结论70%乙醇或无水乙醇固定组织,石腊包埋组织及HE染色切片可以作为DNA?STR检验鉴定的样本材料。     

甲醛固定组织的DNA提取

在法医物证检验中，分子量大于23kb的DNA分子可以直接作出指纹图谱，部分降解的DNA分子可以通过PCR扩增进行检验。但对甲醛处理的组织，用上述提取方法，只能得到已严重降解的小分子DNA，并由于甲醛溶液的影响，无法进行VNTR－PCR检验。因此，如何从甲醛处理的各种组织中提取大分子DNA是一个迫切需要解决的问题。本文摸索出从甲醛处理的组织中提取大分子DNA的方法。同时研究了固定时间对提取DNA质量的影响，找到了适合DNA释放的最佳PK酶解条件，包括离子强度、反应体系、酶解时间、温度等。材料与方法1．组织的处理取自同一个…     

探讨EOS染色剂对血迹DNA检验的影响

目的探讨被EOS染色剂处理后的血迹进行DNA检验的初步方法。方法制备EOS染色剂处理的血迹样本，分别采取纯水擦拭、75％酒精擦拭，或手术刀刮取血痕浸泡于纯水中、759／5酒精中，然后提取DNA进行下一步检测。结果采用刀刮取血痕浸泡于759／6酒精中，提取的DNA检测结果较好。结论初步实验显示，经EOS染色剂处理过的血迹，可参考刀刮取血迹置于75％酒精浸泡后提取DNA做下一步检测。     

定量PCR技术在法医学中应用的研究

目的研究荧光定量PCR技术在法医学中的应用。方法应用Taqman技术对法医各种生物检材进行DNA定量。结果该定量PCR技术对各种法医生物检材进行了准确定量,并判断检材中是否存在抑制物,从而指导了后续STR的检验。结论定量PCR技术是法医DNA检验中一项不可缺少的辅助技术。     

石蜡包埋人体组织DNA分型的研究

目的研究石蜡包埋人体组织的DNA提取方法对其STR分型的影响,并建立石蜡包埋组织的DNA提取方法。方法经不同预处理条件后采用Chelex-100法提取石蜡包埋人体组织中的DNA,用不同的反应体系进行STR复合扩增检验。结果经福尔马林固定、石蜡包埋的人体组织直接采用Celex-100法提取DNA与65℃水浴除蜡后采用Celex-100法提取DNA均可获得满意的DNA分型。结论该方法简便易行,实验效果好,适合检案。     

全基因组扩增技术应用于法医学的进展

全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)技术是一种对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术。对微量模板DNA的检验,一直是法医物证学特别关注和急需解决的难题之一。近年来,对WGA技术的的研究发展日渐深入,研究成果有望应用于法医DNA检验中各类微量检材的检验。本文综述了WGA技术在法医物证学中的研究进展和应用前景,为法医物证工作者提供参考。     

法医DNA实践中的伦理问题

法医DNA始终在国际法医物证检验领域中占据核心地位,技术应用早已广泛成熟。近年来,诸多学者开始关注法医DNA伦理学方面的研究,目前该研究还处于初步探索阶段。本文是在伦理学已有学术基础上,从DNA数据库建设和亲子鉴定两个方面对法医DNA伦理学思想应用现状进行了初步探讨,并且参考国内外文献资料对伦理学思想在法医DNA实践中的应用原则进行了阐述,目的在于衡量法医DNA工作是否达到伦理方面的要求,其实践意义将在DNA数据库建设和亲子鉴定中起到重要作用。     

国外DNA测试简介

在我国刑事案件侦破和审理的过程中，法医DNA检验技术发挥了显著作用。由于我国刑事司法系统对DNA鉴定的依赖性较大， DNA鉴定结论常常作为法庭判决的关键证据，但是，在实际应用中几乎不对其证据能力进行评估。因此，对鉴定机构而言，提高DNA鉴定的质量和可信度，对法医DNA检验的实验室进行测试就显得十分必要。 目前，在DNA检验方面国内还没有专门的测试机构，但在国外则有如美国的实验室测试服务公司（Collaborative Testing Services Inc，以下简称CTS）、英国的塞尔马克公司（Cel lmark Diagnostics）等比较大的DNA测试机构。美国CTS测试在规模上最大，已被美国、英国、法国、荷兰、加拿大、日本等许多国家的质量认证组织所认可。下面就对CTS的DNA检验测试作一介绍。     

法医病理学大体标本的制作及管理

法医病理学大体标本主要用于教学、科研,由于尸体和标本来源日益减少,尤其是具有典型病变及典型损伤的标本越来越珍贵。为了保护这些有限的教学资源的充分利用,提高法医病理学教学质量,笔者对多年来我系法医病理检验的案例检材进行了选择、整理,制作法医病理学大体标本310余个,取得了良好的效果。1大体标本的制作1.1搜集与选择大体标本选自我系法医病理学尸检或送检的案例,所有脏器均采用新鲜无沉淀的10%福尔马林溶液固定。首先对照案例档案对所有标本进行分类整理,并由经验丰富的法医病理学教师进行选择,确定该标本是否可用于教学,且分清病…     

法医物证污染的原因分析及对策

随着物证检验技术的发展,方法检测灵敏度大幅度提高,而微量的污染对检验结果干扰也明显增加,这是法医物证学鉴定必须高度关注的问题。物证污染有多种形式和来源,其中在尸体解剖过程中对物证检材造成的污染较为常见。本文仅针对近年来作者单位因尸体解剖室环境污染导致DNA交叉污染案例进行分析,并探讨相关对策。     

福尔马林固定石蜡包埋组织的PCR-STR分型

<正> 分析福尔马林固定石蜡包埋组织的DNA多态性,对某些医疗纠纷或陈年旧案的解决或侦破具有重要作用。本文作者用Promega公司提供的GeneprintSTR system复合扩增试剂盒,检测了1～20年的福尔马林固定石蜡包埋的同一个体不同组织块的DNA,取得满意的效果,现报道如下。1 材料与方法1.1 材料 保存20年、14年、11年、6年、1年的福尔马林固定石蜡包埋的同一个体的脑、肺、肝、肾组织块。     

交流DNA检验心得体会,共享检验成功经验——分享DNA检验成功经验,赢QIAGEN大奖活动!

<正>目前,法医DNA检验过程中,遇到痕量样本、污染样本、长时间保存样本等等都会影响到分析检测的准确性和可靠性。针对此类问题,《中国法医学杂志》社与QIAGEN公司联手举办"疑难检材成功经验的征集和分享活动",并借助《中国法医学杂志》社的网络/纸质媒体,给广大法医DNA检验工作者提供一个相     

肋软骨和趾甲在碎尸案中的STR位点检验2例

在碎尸案件中,由于尸块不全及经常高度腐败,使STR位点检验存在一定难度。肋软骨和趾(指)甲并不是目前DNA鉴定的常规检材,为了提高高度腐败尸块DNA鉴定的成功率,对高度腐败尸块的肋软骨和指趾甲的STR位点检验方法进行了研究,总结出了一套成功率高同时比较简便的检验方法,并且在实际检案中得到了可行性结果。1案例例1:在某小河中发现一用塑料布包裹的尸块,经法医检验,为腰以上躯干段尸块,表面皮肤肌肉被凶手用刀割除,高度腐败,推断死亡时间近一个月。例2:在一只旅行包中发现双下肢,经法医检验,股骨自上三分之一处横断,高度腐败,法医推断…     

雪地中尿液的DNA检验

尿液样本因为提取难度较大，很少有作为物证检材进行法医鉴定的案例，国内亦未见报道。现报告对雪地中遗留尿液进行法医 DNA鉴定的检案 1例，希望在此基础上建立一套尿液 DNA检验的较成熟的方法。