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抗丁丙诺啡单克隆抗体的制备 总被引:2,自引:2,他引:0
目的建立抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备高特异性的丁丙诺啡单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法在丁丙诺啡的分子上连接活性羧基基团,通过缩合反应将丁丙诺啡半抗原连接于血蓝蛋白(KLH)和小牛血清白蛋白(BSA),形成完全抗原。以完全抗原免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,筛选等杂交瘤技术,建立稳定的分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过腹腔注射杂交瘤细胞,诱导小鼠产生含有单抗的腹水。用辛酸-硫酸铵加亲和层析法纯化抗丁丙诺啡单克隆抗体。采用酶联免疫反应和胶体金膜层析实验测定丁丙诺啡单抗的特异性以及免疫反应动力学参数。结果共获得3株分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为7E6,6G4和3C2。7E6,6G4抗体灵敏度为10.0ng/ml,3C2抗体灵敏度为20.0ng/ml。7E6,6CA和3C2抗体的亲和常数分别为3.6×10^-9 mol/L,4.3×10^-9 mol/L和6.3×10^-9 mol/L。特异性测试结果表明7E6和6G4抗体与40种药物、毒品无任何交叉反应,而3C2抗体与吗啡有交叉反应。结论杂交瘤细胞株7E6和6G4产生的抗丁丙诺啡单克隆抗体具有很高的特异性和灵敏度。 相似文献
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目的建立分泌抗三唑仑代谢物α-羟基三唑仑单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备高特异性的三唑仑代谢物单克隆抗体,为三唑仑及其代谢物免疫分析方法的开发奠定基础。方法在三唑仑分子的6位苯环对位上引入活性氨基基团,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)相偶联形成完全抗原。以三唑仑-KLH免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,筛选等杂交瘤技术建立稳定的分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。纯化后的单克隆抗体,分别用SDS-PAGE电泳法、间接ELISA法和胶体金免疫层析法对其纯度、效价及灵敏度和特异性进行测定。结果获得3株能稳定分泌三唑仑代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2G4,4B2和5H6。2G4和4B2抗体只与三唑仑代谢物α-羟基三唑仑有反应,灵敏度分别为500ng/mL和750ng/mL。与其他参试物无交叉反应。因5H6抗体为IgM,考虑到纯化难度和实际应用的限制,暂未做深入研究。结论本研究制备的2G4和4B2单克隆抗体仅识别三唑仑代谢物α-羟基三唑仑,具有高度特异性和灵敏度。 相似文献
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分泌抗人精液特异蛋白P_(30)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
作者通过杂交瘤技术建立了9株产生抗精浆特异蛋白 P_(30) 单克隆抗体的杂交瘤细胞系。它们是由 SP2/0骨髓瘤与经 P_(30) 免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞按常规方法进行细胞融合、并经克隆化筛选得出.这些细胞株均经体外培养3个月以上能够稳定分泌抗 P_(30) 单克隆抗体。该抗体只能识别纯化的 P_(30) 和精液中的 P_(30) ;与人精液以外的其他体液和多种人体组织无交叉反应;与几种常见动物的精液和血液无交叉反应。这些 P_(30) 单克隆抗体均属 IgG 类和 IgG_1亚类。其培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达到320和128,000。以 ELISA 法应用这些单克隆抗体能很好地鉴定精液和精斑。 相似文献
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检验人精浆特异蛋白P30免疫胶体金试剂条的研制 总被引:2,自引:0,他引:2
目的制备用于检验人精浆特异蛋白P30-主要是来自法医学案件的免疫胶体金层析试剂条.方法选取针对不同抗原决定簇的抗P30单克隆抗体细胞株,并制备其小鼠腹水,分离纯化单克隆抗体.制备胶体金并以纯化抗体包被,制成免疫胶体金,以免疫胶体金浸泡玻璃纤维.选取适宜的硝酸纤维素膜并于其上不同位置以未金标的另一株P30单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被.搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性.结果所制成的试剂条灵敏度至少可达4ng/ml;对6人份混合的人精液物质在稀释20万倍后仍出阳性结果,且无非特异性反应.结论检验人精浆特异蛋白P30的免疫胶体金试剂条可对嫌疑人精物质做出排查,有利于法医物证检验. 相似文献
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分泌抗人精子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
建立两株分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株G_8与E_(10),采用洗涤人精子免疫Balb/c小鼠,取免疫脾与Balb/c小鼠的Sp2/0骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞诱生腹水的方法。Elisa,IIF或酶标抗体免疫组化法结果发现,G_8与E_(10)单抗与人精子(射出精子、睾丸、副睾管及输精管中的精子)及睾丸各级生殖细胞均发生反应;与人甲状腺上皮细胞、肾小管上皮细胞、胰腺导管上皮细胞以及胰岛均发生不同程度的交叉反应,与其他33种人体正常组织、9种人体液与分泌液、8种不同种族的动物精子均不发生交叉反应,说明在一般情况下这两种抗体可用于鉴定人类的精液斑以及精液与阴道分泌液的混合斑。两种单抗与人精子的顶体部、赤道部、后核帽、颈部及中段结合,证明精子特异性表面抗原分布于这几个区域。两种抗体均属IgG_1,G_8与E_(10)抗体的效价分别为1:512与1:1024。 相似文献
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Ailiang Chen M.Sc. Guoqing Wang M.Sc. Qin Cao B.Sc. Yan Wang M.Sc. Zhaohui Zhang Ph.D. Yimin Sun M.Sc. Hui Wang M.Sc. Chaoyi Xu B.Sc. Qi Zhou B.Sc. Pei Han B.Sc. Miao Liu B.Sc. Yang Yang B.Sc. Wanli Xing Ph.D. Keith R. Mitchelson Ph.D. Jing Cheng Ph.D. 《Journal of forensic sciences》2009,54(4):953-960
Abstract: The abuse of antibiotic drugs during animal production remains a worldwide problem and the subsequent detection of the residues of various drugs present at low concentrations in complex biological matrices poses significant analytical challenges. The present study outlines a practical biochip assay system to identify antibiotic residues in different animal tissue extracts. The system uses a simple but efficient multiresidue sample extraction procedure to isolate the antibiotic residues which were then identified directly using high‐affinity monoclonal antibodies presented in a competitive immunoassay with conjugated antibiotic hapten‐chips. The hapten‐chip can analyze six samples each for eight antibiotics on a single chip within 3 h. The analytical results with both artificial positive standard samples and the incurred samples show that the antibody hapten‐chip system has a comparable accuracy and a similar sensitivity to a standard ultra performance liquid chromatography–mass spectrometry (MS)/MS assay. In conclusion, an effective analytical screening system based on antibody hapten‐chip was developed for detecting multiple antibiotic residues from multiple samples. 相似文献