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Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子(头套)中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。 相似文献
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目的对M48磁珠法和Chelex-100法提取脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考。方法选取案件受理检材50例烟蒂、50例纺织物品、50例作案工具,根据不同条件分别用吸附法、沾附法获得DNA,采用磁珠法(M48)和Chelex-100法提取后,常规STR检测。结果烟蒂类检材采用2种方法提取DNA,所得结果没有明显差异;纺织物品和作案工具上脱落细胞DNA的提取采用M48磁珠法提取的效果明显优于Chelex-100法。结论相对而言,M48磁珠法更具优势。 相似文献
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PCR技术应用到生物物证的检验,尤其是应用荧光复合STR基因座进行分析,使微量生物检材的检测成为可能[1]。在刑事案件中,与人体表接触过的衣服、手套等常粘附有体表脱落上皮细胞,如能对此进行检验并成功获得DNA分型数据,将为案件的侦破提供重要的线索和证据。通常情况下,因脱落上皮细胞量非常少,在检验过程中又缺乏稳定的方法,常常导致检验结果不理想。本文作者通过对一例棉线手套腕部上的脱落上皮细胞成功进行STR分型,为极微量体表脱落上皮细胞的检验提供了一种切实可行的方法。1案例2005年12月,某商店内发生入室抢劫案,两名妇女被杀害… 相似文献
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目的寻求提高微量口腔脱落细胞检材的DNA检验成功率的简便有效的提取方法。方法对不同载体上的100份微量口腔脱落细胞检材采用小体积Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用IdentifilerTM复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从25根饮料吸管上提取的DNA量在0.72~116.7.8ng,16个水杯杯缘提取的DNA量在2.15-142.5ng,31个饮料瓶(罐)口提取的DNA量在1~34.65ng,10根筷子上提取的DNA量在3.35~26.6ng,12个果核中提取的DNA量在0.294~21.4ng,6份吃剩的骨头中提取的DNA量在0.88~5.88ng。100份检材性别及9个以上STR位点分型成功率平均为59.38%。除了使用者的个人原因外,检材的提取送检方式、检材的质地、饮料的性质对提取的DNA量有显著影响,是否加蛋白酶K对提取的DNA量无显著影响。结论采用小体积Chelex-100法可对60%左右的微量口腔脱落细胞检材提取DNA进行STR分型。 相似文献
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目的探讨尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型检验的效果。方法取抗凝全血用去离子水倍量稀释2、4、8、16、32、64、128倍,各取1μL分别滴加于尼龙植绒拭子与棉拭子头部,干燥制成血痕,应用Chelex-100提取每个浓度两种材质拭子的血痕样本DNA,采用Identifiler Plus试剂盒进行复合扩增,3500XL型遗传分析仪进行检测,对比各组DNA分型检验成功率。结果 1检验成功率:稀释16~64倍尼龙植绒拭子血痕均明显高于相同稀释倍数的棉拭子血痕(P0.001);其余浓度血痕两种材质拭子的检验成功率无明显差异;2分型图谱峰高和均衡性:不同浓度尼龙植绒拭子血痕峰高多为棉拭子血痕的2倍以上,16~64倍稀释血痕尼龙植绒拭子均衡性更好。结论尼龙植绒血痕拭子的检验效果优于棉拭子血痕,在微量血痕检验时优势更明显。 相似文献
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目的 基于免疫磁珠法分离脱落上皮细胞中的白细胞,消除或减弱混合检材中血液来源STR分型对结果分析的干扰。方法 分别取两名不同个体的血液和口腔脱落上皮细胞,按不同比例制备成混合样本作为实验组,并同时制备细胞量相等的对照组。应用免疫磁珠法分离实验组样本中白细胞,并与对照组以相同条件进行DNA提取、扩增、分型,对比两组STR分型结果。结果 当血液量较少时,对照组为混合STR分型,经免疫磁珠法分离混合检材中白细胞后,实验组为单一来源STR分型;当血液量较多时,此时对照组为混合STR分型,但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带峰高较低甚至丢失,经免疫磁珠法后,实验组仍为STR混合分型,但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带成为主峰;当混合样本中口腔脱落上皮细胞微量,血液占比极大时,此时对照组为血液来源的单一STR分型结果,经免疫磁珠法后,实验组为STR混合分型,包含口腔脱落上皮细胞来源的所有等位基因分型。结论 该方法可用于分离脱落上皮细胞中血液成分,降低血液来源的DNA比例,能够改善此类混合检材中目的细胞的STR分型结果,为刑事案件中含有血迹浸染的混合生物检材的检验提供了一种新思路。 相似文献
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荧光标记STR分型技术在法医物证检验中已经得到广泛应用 ,但在实际工作中 ,含有微量人体脱落上皮细胞的特殊载体在很多情况下被忽略 ,关于皮肤脱落上皮细胞的DNA检验比较少。本文作者结合案例 ,对一些特殊载体上的脱落上皮细胞成功地进行了STR检验分型 ,并就检验中的相关问题进行讨论 ,旨在进一步提高办案人员对此类检材应用价值的注意。案例资料【案例 1】 2 0 0 3年 1月在某旅社内 ,犯罪嫌疑人王某将徐某(女 ,2 7岁 )掐颈致死 ,后用打火机烧灼电视机电线再用手拉成多节 ,欲用于捆绑。鉴定人员在现场采用纱线两步擦拭法转移电视机电… 相似文献
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DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用 总被引:6,自引:4,他引:2
目的研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用。方法打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较。结果血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%。结论血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果,该方法省时省力,可用于DNA数据库建设。 相似文献
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目的比较两种DNA提取法对不同色泽肋软骨的DNASTR分型结果的影响。方法利用Chelex-100法和酚-氯仿法,分别对30例不同色泽的腐败尸体肋软骨进行DNA提取,STR复合扩增,ABI3100型基因分析仪对扩增产物进行检测。结果用酚-氯仿法提取的30例腐败尸体肋软骨,均检测到全部STR基因座的等位基因型。用Chelex-100法提取的肋软骨中,22例(11例白色、8例淡黄色、3例黄色)检测出全部STR基因座的等位基因型;7例(3例黄色、4例黄褐色)检测出部分STR基因座的等位基因型;1例黑灰色的腐败尸体肋软骨,未检测出STR基因座的等位基因型。结论根据肋软骨的色泽,选择适宜的DNA提取方法。对于颜色较深的肋软骨,用酚-氯仿法进行DNA提取有助于提高其STR基因座的检出率。 相似文献
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接触DNA是指通过皮肤接触而遗留在客体表面人体皮肤脱落上皮细胞的DNA[1].通常遗留在光滑载体(如刀柄、手枪等)表面接触DNA较少,检验难度较大.对于这类检材,较常采用硅珠法、磁珠法或Chelex-100法进行DNA提取,但成功率不高.本文尝试采用直接扩增法(简称直扩法)进行检验,收到了很好的效果,报道如下. 相似文献
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1案例资料1·1案情包某,男,47岁,农民。2003年9月20日被人发现死于村东路边,因近期该处发生多起拦路抢劫案件,且死者头部有伤,怀疑抢劫杀人。包妻称,包某头天下午外出,一直未归。1·2现场尸体位于村东一土路路沟内,因雨后,地面潮湿且泥泞。另一处土路上有自行车一辆,自行车车把朝南、向西倾倒,轮胎上有泥。自行车北28m路中央有塑料拖鞋一只(左脚),鞋尖向北;该拖鞋北6m另有一塑料拖鞋(右脚),鞋尖向北;两拖鞋鞋底无下陷、鞋帮无泥浆粘附。经辨认,自行车、拖鞋均为包某之物。1·3尸体检验尸体头南足北仰卧于路沟内,面向右转。衣着完整、无破损,… 相似文献