用引物Y_3,Y_4和DNA扩增技术作血液(痕)和毛根性别鉴定的研究

作者用引物Y_3、Y_4和DNA聚合酶链式反应(PCR)作微量人类血液(痕)和毛根的性别鉴定。扩增的靶序列位于Y染色体DNA特异3.4kb重复序列中,扩增产物为460bp。检材用量为:新鲜血液0.5μl、血痕纱纤维1mm、毛根单个。20例保存4个月的血痕与2例保存6年半的血痕性别判定结果均正确,无性别记载的保存9～11年的3例血痕显现了清晰的460bpY特异DNA扩增带。15例保存20天的自然脱落毛根性别判定结果均正确。本法省略了检材处理中的酚-氯仿抽提DNA等纯化步骤,既简化了实验操作,又减少了检验过程中外源DNA的污染机会和样品DNA的损耗,使这一性别鉴定方法更符合法医学实践的需要。     

体外DNA扩增技术鉴定血痕性别三例报告

本文报道用体外DNA扩增技术对3例刑事案中的人血痕标本进行性别鉴定。其方法是从血痕标本中微量抽提DNA,用蛋白酶K进行消化。然后用两组引物Y1.1与Y1.2和Alu9.1与Alu9.2及国产FD耐热DNA聚合酶进行聚合酶链反(PCR)扩增DNA,电泳分析Y及Alu重复序列,从而判断血痕的性别。     

PCR扩增ZFY/ZFX基因鉴定人类干血痕性别

应用 PCR 技术同时扩增人 ZFY 和 ZFX 基因特异的 DNA 序列,在男性血痕中可检测到两种扩增产物,即340bp 长的 ZFY 基因及488bp 长的 ZFX 基因特异 DNA 片段;在女性血痕中仅可检测到488bp 长的 ZFX 基因特异 DNA 片段,据此判定干血痕性别。干血痕的最小检出需要量为0.125μl 血液量的血痕。室温保存10年的血痕可以准确判定性别。ZFY 基因位于 Y 染色体短臂。本方法同时检测两条性染色体,可以避免由于扩增失败或 Y 染色体长臂变异出现的假阴性或假阳性。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳即可区分。     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的 建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。方法 采用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置5－15年的男、女血痕标本各50例、毛发各20例、骨骼各20例以及现场提取5－－20天的男、女腐败肌肉各10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PGA（9％T,3％C）电泳、银染显带检测扩增产物。结果 所有样本均得到正确结果,男性检材表现为83bp的Y特异性及80bp的X特异性2条谱带,而女性检材仅有1条80bp的X特异性谱带。结论 用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的　建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。　方法　采用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置 5～ 15年的男、女血痕标本各 5 0例、毛发各 2 0例、骨骼各 2 0例以及现场提取 5 - - 2 0天的男、女腐败肌肉各 10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PAG( 9%T ,3 %C)电泳、银染显带检测扩增产物。　结果　所有样本均得到正确结果 ,男性检材表现为 83bp的Y特异性及 80bp的X特异性 2条谱带 ,而女性检材仅有 1条 80bp的X特异性谱带。　结论　用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便 ,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

用PCR扩增X-Y-特异片段性别鉴定的研究

采用5%Chelex-100处理方法提取 DNA,用 PCR 扩增 Amelogenin 基因片段检测血痕和毛根的性别。扩增一个样品只需1/10体积3mm~2血痕 Chelex-100处理液或1/10体积一根毛发 Chelex-100处理液(含模板 DNA)。100例血液样品结果显示,在男性可同时显现977bpX 特异片段和788bpY 特异片段,而在女性只观察到977bp X 特异片段,该方法用于性别鉴定可靠、灵敏、方便。     

扩增X—Y同源Amelogenin基因内含子在性别鉴定中的应用研究

本文用一对针对X－Y同源的Amelogenin基因第一内含子的引物，于同一试管中分别扩增出针对于x和Y染色体的特异性DNA片段：106bp及112bp的PCR产物，经聚丙烯酰胺凝胶电泳后用银染法观察扩增结果，取得了满意的效果．对50pgDNA模板室温放置16年的血痕及单根毛发、烟头等检材均可得到明确的性别鉴定结果．本实验证明该方法简便、灵敏、可靠、特别适用于腐败降解检材的法医学性别鉴定．     

对420例血痕性别测定的研究

<正> 本文收集420例干血痕,男性364例,女性56例,经制片、国产盐酸阿的平染色,用奥林巴斯研究显微镜,对血痕Y荧光小体进行了观测,结果364例男性血痕的Y小体检出率平均为29.69％,其变动范围在9～63％;56例女性血痕的类Y小体平均检出率为0.75％,其变动范围0～4％;实验的同时,对150例男性血痕和25例女性血痕涂片,运用透     

27例Amelogenin基因等位基因Y丢失分析

牙釉质蛋白基因(Amelogenin,以下简称Amel)DNA技术是目前普遍采用的性别鉴定技术手段。在X-Y染色体同源引物扩增检测Amel基因图谱上,男性显示为双峰,获得X和Y染色体扩增产物;女性显示为单峰,获得X染色体扩增产物[1]。但Amel-Y缺失或异常都可导致无法获得Y染色体扩增产物,从而导致性别的错判,使侦查走向歧途[2]。     

HLA—A基因座分步PCR—SSP分型研究

目的使HLA基因分型能应用于法医常见检材的个人识别。方法 建立检测HLA—A基因座的分步PCR—SSP方法。先用一对HLA—A基因座特异的引物作第一次扩增,以所得产物为模板,分别用对HLA—A30、A31、A33特异的3对引物作第二次扩增,二次扩增的产物经电泳判型。结果 1130例血清分型为HLA—A30、A31、A33的血痕,其PCR—SSP分型和血清分型的不符合率为29％;室温保存2年的精斑、唾液斑,保存18年的血痕第一次扩增均获得满意的结果。结论法医亲子鉴定和个人识别宜用基因分型替代血清分型。HLA—A基因座分步PCR—SSP基因分型适用于法医检材。     

ABO基因型检验及其法医学应用研究

目的采用ＰＣＲ技术对ＡＢＯ血型系统进行基因型检验。方法选择最佳扩增条件进行四引物复合扩增,用限制性内切酶ＫｐｎＩ和ＡｌｕＩ分别酶解扩增产物,电泳分离、银染显色法检验ＡＢＯ基因型。结果对２７０例血斑、２０例混合斑、２０根毛发（有毛囊）、１２份唾液斑等不同的生物检材进行了分型,与血清学方法检验结果相符。结论该方法能够应用于法医学的检验     

Sex determination of blood stains with a recombinant DNA probe: comparison with radioactive and non-radioactive labeling methods

A recombinant DNA probe hybridizing specifically to human repeat DNA sequence (pHY10) of which about 3000 copies are present on the Y chromosome was used for sex determination of degraded DNA samples of blood stains. Human blood stains of male and female origin were readily differentiated with the pHY10 DNA probe. This radioactive technique enabled reliable and sensitive sex determination from blood or dried blood stains greater than 20 years old. Less than 1 microliter of blood or 1 piece of 0.5 cm length thread of blood stain from cotton fabric was sufficient for the test using dot blot hybridization. Compared with the radioactive labeling method, the photobiotin labeling method showed one thirtieth to one fiftieth lower sensitivity and presented some problems which are expected to be resolvable.     

An improved method for the determination of Y chromosomes in blood stains (author's transl)]

A new filter combination for fluorescence microscopy using SWP 440 interfernece filter for excitation and GG 455 as the barrier filter is described. In blind trials examining blood smears of 5 male persons and by examination of 3 weeks old blood stains a better Y chromosome demonstration has been obtained using this new technique in comparison with the "usual" filter combination: BG 12-530. In blind trials of up to 6 weeks old blood stains of one male and one female a reliable sex determination was made using the new technique.     

Human identification and sex determination of dental pulp, bone marrow and blood stains with a recombinant DNA probe

Recombinant DNA hybridizing specifically to a 300 nucleotide repeat DNA sequence (BLUR8) of human specificity and to human repeat DNA sequence (pHY10) on the Y chromosome was used for human identification and sex determination of degraded DNA samples of blood stains, dental pulp, and bone marrow. This radioactive technique enabled reliable and sensitive human and sex determination from blood stains that were more than 80 years old. Less than 1 piece of 0.5 cm length thread of blood stain was enough for both tests. DNA from relatively fresh dental pulp and bone marrow was clearly identified. The human identification test, which could recognize up to 0.3 ng DNA correctly, was 3 to 5 times more sensitive than the sex determination test.     

ABO genotyping by polymerase chain reaction.

ABO blood group system's genotyping by polymerase chain reaction in genomic DNA level is developed. The positions of nucleotide 258 and 700 of cDNA from A transferase were used to distinguish A, B, and O alleles by restriction enzyme digestion. To identify the 258th nucleotide, a 199- or 200-bp DNA fragment was amplified by PCR and digested with Kpn I. For the 700th nucleotide, a 128-bp PCR amplified fragment was designed and digested with Alu I. By examining the DNA fragment digested patterns, ABO genotypes were easily determined. Results obtained using this method on 20 ABO-known peripheral blood samples showed that this new technique could provide accurate ABO genotype. Biologic forensic samples, such as, blood stains, saliva stains, semen stains, hair, bone tissue, and semen contaminated with vaginal secretion were also successfully typed. This rapid, sensitive and reliable method should be applicable not only in forensic identification but also in medical examination.     

考古样品中Amelogenin同源基因的提取和检测

目的利用人类性染色体Amelogenin同源基因在X、Y染色体上序列长度的差异,选择设计引物,对考古样本进行古DNA性别信息研究。方法采用苯酚/氯仿-二氧化硅-超滤离心方法提取东岭墓葬群殉人骨骼、牙齿古DNA,PCR扩增,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离和检测古DNA扩增片段。结果8个墓葬16个样品中有7个样品出现阳性扩增检测,目标基因片段清楚,男性为二条带(X、Y),女性为一条带(X),牙齿样品检测成功率优于骨骼样品。结论改进的苯酚/氯仿—二氧化硅—超滤分离法是较好的古DNA提取方法,具有降低PCR抑制剂、消耗成本低和提取成功率高等特点。基于人类X、Y染色体Amelogenin同源基因的古DNA性别分析方法可成为分子考古重要的技术方法。