差异提取试剂盒在混合斑DNA提取中的应用

目的评估差异提取试剂盒对混合斑样本中的精子和上皮细胞DNA分离提取的有效性。方法采用差异提取试剂盒,选择性裂解精细胞和上皮细胞,结合磁珠法分别对人为控制条件下制备的模拟混合样本和案件中的混合斑检材进行精细胞DNA和上皮细胞DNA的分离提取。对所提取的DNA进行定量分析和STR分型。结果该试剂盒能从精子和上皮细胞不同比例的混合斑中提取出高纯度的精细胞和上皮细胞DNA。结论该差异提取试剂盒适用于性侵害案件中混合斑检材的DNA提取。     

双差异分离法对混合斑快速检验的初探

目的建立强奸案中混合斑的分离检验新方法,并评估其应用价值。方法采用双差异分离法对人工制备的3个不同浓度的模拟混合斑样本及相应滤膜进行分离提取,对所得DNA进行定量分析和STR分型检验。结果不同浓度的3个样本经孔径为10μm尼龙网格膜两次离心过膜后精子细胞损耗率均小于3%,同时3个样本沉淀均检出完整单一的男性STR分型。结论该双差异分离法所用滤膜对精子细胞DNA的损耗极少并且具有稳定性;该方法用于精阴混合斑的分离检验,具有高分离效率,装置简单,操作便捷,成本低廉等优势,为性侵案中混合斑的分离检验提供了一种新思路。     

尼龙膜套管分离技术对混合斑中精子细胞DNA的提取

目的建立新型的混合斑中精子细胞分离的方法,并评价其应用价值。方法收集性侵案件中的40份混合斑检材,分别采用常规差异裂解法和尼龙膜套管分离技术进行精子细胞分离,使用硅膜试剂盒(Forensic DNA Extraction Kit for Soft Tissues)提取精子细胞DNA,Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus PCR扩增试剂盒进行PCR扩增,3500x L基因分析仪进行电泳检测,并对两种分离方法的结果进行对比。结果 40份混合斑检材中,采用尼龙膜套管分离技术的检材仅3份有女性成分微弱残留,余均获得了完整的单一男性分型。而采用常规差异裂解法分离的检材中,有25份完全未检出男性精子细胞STR分型,15份检出男性精子细胞STR分型(7份不完整男性精子细胞STR分型,6份有女性成分残留,2份单一的男性精子细胞STR分型)。结论本研究建立的尼龙膜套管分离技术适用于混合斑中精子细胞的分离,特别是对含有大量女性细胞而精子细胞较少的检材提取效果明显,整个提取实验成本低廉、快速简便。     

激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞

目的 评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection.LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值.方法 配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液.分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用IdentifilerTM试剂盒进行STR基因型检测.结果 LC...     

显微操作法提取混合斑中精子细胞方法的探讨

目的尝试建立一种提取混合斑中精子细胞的检测方法。方法在人为控制条件下,制备精液—阴道液混合斑,分别使用显微操作法与差异裂解法分离精子细胞,提取DNA,进行STR基因型检测。结果采用显微操作法检测成功率11/12,差异裂解法成功率1/12,两者有显著性差异。结论显微操作法可有效获取精子细胞,排除女性物质和其它杂质的干扰,STR分型成功率优于差异裂解法。     

3种分离提取混合斑精子DNA的方法比较

性犯罪案件中最常见的生物学检材为精液与阴道分泌液混合斑,其精子DNA的提取通常情况下采用常规的差异裂解细胞法结合酚、氯仿抽提[1],但由于检材条件各不相同,有些混合斑中精子细胞极少,核酸得率和纯度较低,有检测失败的可能或致使精子STR分型困难[2]。文献曾报道过多种改良方法[3,4],但其成功与否很大程度上受到检验人员的经验、水平等主观因素以及检材的具体条件影响。本文作者应用差异裂解法、Phase lock GelTM法[5]和D ifferexTM法[6]对三组不同条件的混合斑样品分离提取精子DNA,使用Powerplex16TM试剂盒分型,对3种方法进行比…     

应用EZ-tape胶带分离提取混合斑精细胞

在强奸案件中的DNA检验往往需要将混合斑中男性精子与女性阴道上皮细胞彻底分离.常规方法是剪取载体及其上面附着的混合斑迹一起进行差异裂解分离出精子细胞与女性阴道上皮细胞.在实践中,由于载体的介入可能会带来不利因素,加大了混合斑分离的难度,往往得不到男性精斑的DNA分型或者得到的是混合DNA分型.本研究根据混合斑的形成特点,利用EZ-tape胶带既不破坏载体又可多次粘取载体表面混合斑迹的特性,巧妙地克服了载体带来的诸多不利因素,提高了男性精子的检出率.     

免疫磁珠法与差异裂解法检验混合样本的效果观察

目的分析应用免疫磁珠分离技术和差异裂解法对混合样本的DNA检验效果,评价其在法医学应用中的价值。方法制备含有不同数量精细胞与阴道上皮细胞混合悬液和植绒混合斑拭子,分别采用MOSPD3抗体、SPAG8抗体免疫磁珠法及差异裂解法对样本进行检验,观察分析不同比例的混合细胞悬液,以及不同保存时间植绒混合斑拭子DNA分型的正确率。结果当混合细胞悬液内精细胞与阴道上皮细胞比例约1∶10时,免疫磁珠法的正确率明显高于差异裂解法(P0.01);当比例等于或高于1∶1时,两种方法正确率的差异无显著性意义(P0.05)。植绒拭子混合斑的免疫磁珠法正确率明显低于差异裂解法(P0.01);随混合斑保存时间的延长,差异裂解法正确率无明显下降(P0.05)。结论免疫磁珠法适用于新鲜混合样本中精细胞的分离检验,且在精细胞含量较低时优势更明显,差异裂解法较适合陈旧混合斑的分离检验。     

精-血混合斑检出单一STR分型3例

两人或两人以上个体的体液、分泌液混合形成的斑痕称为混合斑。包括精-阴混合斑、精-血混合斑、精-精混合斑及血-血混合斑等。精-血混合斑因与血斑在肉眼观察上无明显差别,有时会被办案单位作为血斑送检,检验人员如果不予注意,可能漏检。笔者在日常检案中遇到3例精-血混合斑,均被办案单位作为血迹要求检验,实验室检出单一STR分型,因与案件情况不符,     

微流控芯片技术在刑事科学中的应用

目的　阐述微流控芯片技术在法庭科学上的应用。方法　研究国内外已报道的微流控芯片快速、灵敏、高通量技术的有关资料。结果　提出在法医DNA检验、毒剂和毒物检测、麻醉剂或毒品检测、爆炸残留物检测等刑事技术上的应用前景。结论　从刑事侦查的角度看出该技术的巨大发展潜力     

混合斑的研究进展

混合斑组成复杂,长期以来是法医物证研究的难题之一。混合斑主要分为两类:一是性侵害案件中大量女性阴道上皮细胞混合少量精子;二是普通来源的生物检材之间的混合,如血-血、唾液-血液混合等。近些年来,对混合斑的研究日渐深入,技术层面或理论分析都更加客观和多元化。针对第一类混合斑,出现了荧光/磁性激活、显微操纵、声波差异分离法等分离精子的新技术;第二类混合斑是研究的难点,近年来大规模平行测序、液滴微流控技术、乳液PCR(e PCR)、全基因组扩增等技术的出现,提高了次要成分的检出机率。此外,遗传标记也有相应的发展,传统遗传标记常染色体STR、Y-STR、SNP等检测位点越来越丰富,新兴遗传标记DIP、DIP-STR、SNPSTR、mt DNA-SNP、微单倍型等在混合斑研究中发挥的作用初步显露出来。文章最后涉及混合斑分析理论和计算软件的最新发展。     

改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑精子DNA

目的采用改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑中精子DNA,并评价其应用价值。方法收集52例经常规差异裂解法检验含有女性分型的混合斑检材,采用改良差异裂解法结合硅珠法提取精子细胞DNA,IdentifilerTM试剂盒进行PCR扩增检验。并将常规差异裂解法结果作为对照。结果52例混合斑检材中,采用改良差异裂解法结合硅珠法检出单一男性精子成分有38例,男性分型检出率达到98．08％。结论改良差异裂解法结合硅珠法适合提取混合斑中精子DNA。     

混合血样品检测的克隆测序法研究

<正> 在法医生物物证检验的DNA分析中,经常会遇到多个个体的混合血样的检测,如受害人与犯罪嫌疑人的混合血,受害人阴道上皮细胞与犯罪嫌疑人精子细胞或男性上皮细胞的混合斑等。对这类检材     

手纸中混合斑的精子DNA提取方法探讨

混合斑的精子DNA提取是法医物证DNA分析中的一种重要技术,能否从中成功地提取有效的模板DNA,将最终决定能否将罪犯绳之以法。在实际检案中,当遇到手纸中的混合斑时,由于手纸遇水后纤维分解,形成糊状物质,导致混合斑与载体难以分离去除;有些手纸中含有漂染剂,对PCR扩增有抑制作用。为此,手纸中混合斑的精子DNA提取是一个广泛性的难题。笔者对通用的混合斑二步提取法进行改良,有效地解决了上述难题,并在实际检案应用中取得了满意的结果。1检材与方法1.1检材日常检案中涉及的含有混合斑的手纸30份。1.2方法1.2.1DNA提取1.2.1.1常规法(1…     

基于过滤技术的强奸案精阴混合斑快速检验初探

<正>目前,强奸案中精阴混合斑的分离检验,基本采用差异裂解法,为确保最终获得精子来源的单一STR分型,则阴道上皮细胞需充分消化裂解(通常56℃不少于6h,而37℃不少于12h),且两种细胞的先后裂解,使得整个检验过程需耗费1-2天[1],不利于快速提供指向犯罪嫌疑人的DNA信息。迄今为止,针对精阴混合斑快速检验的研究,多为差     

限制性组合分析法推定男女混合斑中个体分型初探

正混合斑是指包含两名或两名以上个体的混合生物检材,在多数情况下,此类检材的DNA分型往往表现为两人或多人的混合分型,使结果分析较为复杂[1]。本文尝试采用2005年国际法医遗传学会(ISFG)推荐的关于混合斑结果分析中的计算方法对混合斑案件中单一个体DNA分型结果进行分析。1材料与方法1.1样本及检验样本由公安部物证鉴定中心提供强奸案件中床单上混合斑检材1份,为日常检案积累,根据案情调查证实该检材系混合斑。DNA检验采用Chelex法提取上述检材DNA,经DNATyperTM15 plus试剂盒扩增后在ABI 3130遗     

限制性组合分析法推定男女混合斑中个体分型初探

混合斑是指包含两私或两名以上个体的混合生物检材，红多数情况下，此类检材的DNA分型往往表现为两人或多人的混合分型，使结果分析较为复杂[1]．本义尝试采川2005年国际法医遗传学会（ISFG）推荐的关于混合斑结果分析中的计算方法对混合斑案件中单一个体DNA分型结果进行分析。     

混合斑中精子细胞分离及其DNA制备方法

目的尝试建立一种检测混合斑中精子细胞的方法。方法使用显微操作法捕获精子细胞,全基因组扩增(多重置换扩增)精子细胞DNA。结果对10管精斑检材的全基因组扩增,获得了高产、保真的产物。使用50μL体系对20个精子细胞直接进行全基因组扩增,省去了对起始模板的纯化过程,DNA扩增倍数达30000倍以上,片段长度大多在15 kb以上,其STRs复合扩增分型结果有可参照性。结论显微操作法可以有效捕获精子细胞,排除干扰,多重置换扩增可以提供足够量的产物用于法医DNA分析,该方法具有可行性。     

精子富集柱分离技术的研究

目的在传统差异裂解法基础上,研究建立新的混合斑检材中精子分离技术。方法根据精细胞的结构特点,研制精子富集柱。取混合斑检材经第一步消化后的混合液,加入精子富集柱中离心,使DNA等小分子物质透过,而精细胞被特异性黏附和拦截在富集层中。采用本文技术和常规裂解方法对12份混合斑检材中精子进行分离,分离后精子DNA采用Identifiler试剂盒进行PCR扩增和电泳检测。结果混合斑检材经精子富集柱分离后均获得单一男性精子的STR分型结果,而12份检材用常规裂解方法分离,其中有6份检材女性成分去除不完全或未能检出精子STR基因型。结论本研究建立的精子富集柱分离技术适用于常见混合斑检材中精子的分离,特别适合对含有大量女性混合物而精子量较少检材的分离提取。     

磁珠法回收纯化DNA样本

DNA回收纯化技术是法医DNA检验的关键技术之一。目前,国际上采用的方法主要有基于吸附解离原理的磁珠法[1,2]、硅珠法[3~6]和基于分子量差异的柱法[7]、滤膜法[8]。相比之下,磁珠法由于将磁场作用引入生物分离过程,简化了手工操作步骤,节省了时间,对DNA样本的回收和纯化具有特殊的优势。本文采用吉林大学化学学院赠送的磁珠,在DNA回收纯化方面进行了一些探索。1材料与方法1.1样本DNA标准品9947A购自Promega公司;其他样本取自本实验室的案件检材。1.2主要仪器设备及试剂3100型基因分析仪(AB I公司);9700型PCR扩增仪(AB I公司);Pow…