尼龙膜套管分离技术对混合斑中精子细胞DNA的提取

目的建立新型的混合斑中精子细胞分离的方法,并评价其应用价值。方法收集性侵案件中的40份混合斑检材,分别采用常规差异裂解法和尼龙膜套管分离技术进行精子细胞分离,使用硅膜试剂盒(Forensic DNA Extraction Kit for Soft Tissues)提取精子细胞DNA,Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus PCR扩增试剂盒进行PCR扩增,3500x L基因分析仪进行电泳检测,并对两种分离方法的结果进行对比。结果 40份混合斑检材中,采用尼龙膜套管分离技术的检材仅3份有女性成分微弱残留,余均获得了完整的单一男性分型。而采用常规差异裂解法分离的检材中,有25份完全未检出男性精子细胞STR分型,15份检出男性精子细胞STR分型(7份不完整男性精子细胞STR分型,6份有女性成分残留,2份单一的男性精子细胞STR分型)。结论本研究建立的尼龙膜套管分离技术适用于混合斑中精子细胞的分离,特别是对含有大量女性细胞而精子细胞较少的检材提取效果明显,整个提取实验成本低廉、快速简便。     

DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

差异提取试剂盒在混合斑DNA提取中的应用

目的评估差异提取试剂盒对混合斑样本中的精子和上皮细胞DNA分离提取的有效性。方法采用差异提取试剂盒,选择性裂解精细胞和上皮细胞,结合磁珠法分别对人为控制条件下制备的模拟混合样本和案件中的混合斑检材进行精细胞DNA和上皮细胞DNA的分离提取。对所提取的DNA进行定量分析和STR分型。结果该试剂盒能从精子和上皮细胞不同比例的混合斑中提取出高纯度的精细胞和上皮细胞DNA。结论该差异提取试剂盒适用于性侵害案件中混合斑检材的DNA提取。     

改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑精子DNA

目的采用改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑中精子DNA,并评价其应用价值。方法收集52例经常规差异裂解法检验含有女性分型的混合斑检材,采用改良差异裂解法结合硅珠法提取精子细胞DNA,IdentifilerTM试剂盒进行PCR扩增检验。并将常规差异裂解法结果作为对照。结果52例混合斑检材中,采用改良差异裂解法结合硅珠法检出单一男性精子成分有38例,男性分型检出率达到98．08％。结论改良差异裂解法结合硅珠法适合提取混合斑中精子DNA。     

3种分离提取混合斑精子DNA的方法比较

性犯罪案件中最常见的生物学检材为精液与阴道分泌液混合斑,其精子DNA的提取通常情况下采用常规的差异裂解细胞法结合酚、氯仿抽提[1],但由于检材条件各不相同,有些混合斑中精子细胞极少,核酸得率和纯度较低,有检测失败的可能或致使精子STR分型困难[2]。文献曾报道过多种改良方法[3,4],但其成功与否很大程度上受到检验人员的经验、水平等主观因素以及检材的具体条件影响。本文作者应用差异裂解法、Phase lock GelTM法[5]和D ifferexTM法[6]对三组不同条件的混合斑样品分离提取精子DNA,使用Powerplex16TM试剂盒分型,对3种方法进行比…     

FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验

目的建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法。方法收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEPX SpectrumOrangeTMY SpectrumGreenTM试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光捕获显微分离系统分离男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒结合低体积扩增技术分别对男女成分进行STR扩增。结果荧光原位杂交后,可清晰分辨混合斑中的男女细胞。捕获20个精子细胞可以得到完整的STR分型,检出率为80%。随着精子数目增多,检出率提高而等位基因丢失率降低。30个精子检出率最高,为95%。结论激光捕获显微分离联用FISH技术可用于混合斑中男女细胞DNA的分离检验。     

Maxwell 16裂解纯化法提取陈旧精子DNA的应用

目的利用Maxwell 16裂解纯化法从保存8年以上陈旧精斑检材中获取精子DNA。方法 8份陈旧精斑检材采用Maxwell 16裂解纯化法提取精子DNA,并采用Powerplex○R21试剂盒进行复合扩增,产物用AB3130型遗传分析仪检测,结果与常规方法进行对比。结果成功获得8份陈旧精斑检材精子STR分型。结论差异裂解配合Maxwell 16裂解在陈旧精斑检材精子DNA检验中效果明显。     

应用免疫磁珠分离混合斑中精子

目的探讨应用免疫磁珠法分离精子-上皮细胞混合液中精子的可行性。方法制备不同比例的精子-上皮细胞混合液各15例,分别应用免疫磁珠法及差异裂解法提取精子,经PCR扩增进行DNA-STR分型,比较两者的差异。结果免疫磁珠可以特异性捕获精子,对精子个数为500～2 000/mL的混合斑STR分型成功率(正确分型13个以上,RFU200)为93.33%,差异裂解法为46.67%,两种方法存在明显差异(P0.05)。结论免疫磁珠可有效分离精子和混合斑中其他成分,在精子个数低于2 000个/mL检材中优于差异裂解法。     

混合斑中精子细胞分离实验条件探讨

在性犯罪案DNA检验中,含有精液和女性成分的混合斑检材,一般先采用两步裂解法分离精子与女性成分,然后再分别进行DNA检验。但在实践中发现,含有大量女性成分而精子较少的混合斑进行首次裂解需较长时间或需进行多次裂解,因不能得到足够的精子量使分型失败。为此本文通过调整试验条件,以期提高实验成功率。     

用ELISA检测精液及精斑中精子抗原的研究

本实验应用单克隆抗人精子抗体和酶标记羊抗人精子抗体,采用ELISA方法确定精子抗原成份的存在。对10份新鲜精液,15份精斑进行了验测,其结果阳性率为100%。新鲜精液(精子数约10,000万个/ml)稀释100万倍,精斑浸出液稀释50万倍,均可出现阳性。对唾液斑、尿斑、乳汁斑、阴道斑、汗斑及输精管结扎的精液均为阴性。实验结果表明,本法检验精子抗原具有灵敏度高,特异性好的优点。     

DNA指纹图在法医学鉴定中应用的研究(Ⅲ)——应用“Myo”DNA探针进行混合斑中精液的个体认定

本文利用蛋白酶K、SDS对精液和阴道液、精液和血液的混合斑进行前处理,除去女性阴道脱落上皮细胞和血液细胞成份获得精子。提取精子DNA,用“Myo”小卫星DNA探针杂交进行DNA指纹检验,获得了高度多态性的精子DNA指纹图谱,与同一个体血液DNA指纹图谱比较完全一致,实现了混合斑中精液来源的个体认定。在对20多起强奸案例混合斑的实际应用中,成功地认定了强奸罪犯。     

PCR法对HLA-DQ_α基因的分型及其在性犯罪鉴定中的应用

本文应用 PCR 法及 ASO 探针斑点杂交技术,对100例无关个体血液 DNA 及10例性犯罪案件混合斑中精子 DNA 进行了 HLA-DQα基因的扩增及其 DNA 分型。结果正常人0.1～0.3μgDNA 就能满足 DQα基因扩增的需要。在100例个体中可以观察到由4种等位基因组成的10种 DQα基因型。10例不同条件的混合斑中精子 DNA 经30～60次扩增后与 ASO 探针杂交均能准确地判定 DQα基因型。HLA-DQα是个体识别能力较强的遗传标志。本文为性犯罪中精子来源的个体识别提供了一个新方法,具有一定的实用价值。     

PALM结合低体积扩增技术在混合斑检验中的应用

目的PALM系统联合应用低体积扩增技术,建立一种提取混合斑中精子DNA的分型方法。方法利用PALM切割捕获理想检材的精子细胞,将捕获的细胞直接放置到低体积扩增玻片的反应位点上,裂解细胞之后进行PCR扩增。结果20个精子细胞8次分型中,7次分型结果完全正确。10个精子细胞8次分型中,4次分型结果完全正确。1个精子细胞8次分型中,出现位点的基因座均在10个以上。将该方法应用于两例实际案例的混合斑检材,取得了满意效果。结论联合运用PALM系统和低体积扩增技术对混合斑检材中的精子细胞检验具有重要意义。     

混合斑中精子细胞分离及其DNA制备方法

目的尝试建立一种检测混合斑中精子细胞的方法。方法使用显微操作法捕获精子细胞,全基因组扩增(多重置换扩增)精子细胞DNA。结果对10管精斑检材的全基因组扩增,获得了高产、保真的产物。使用50μL体系对20个精子细胞直接进行全基因组扩增,省去了对起始模板的纯化过程,DNA扩增倍数达30000倍以上,片段长度大多在15 kb以上,其STRs复合扩增分型结果有可参照性。结论显微操作法可以有效捕获精子细胞,排除干扰,多重置换扩增可以提供足够量的产物用于法医DNA分析,该方法具有可行性。     

Hospital Wet Mount Examination for the Presence of Sperm in Sexual Assault Cases is of Questionable Value

Many protocols for the examination of sexual assault victims include the preparation of vaginal wet mount slides to determine whether sperm are present and if so, whether the sperm are motile. We have reviewed findings in 501 case reports to compare the efficiency of sperm detection on wet mounts to subsequent crime laboratory results of sperm searches on vaginal swabs. Sperm were detected on wet mounts in only 41% of cases in which sperm were detected in the crime laboratory. Motile sperm were observed in only 12% of cases reporting a 0–9 h postcoital interval; in three cases, motile sperm were seen at 15 h and beyond, indicating that motile sperm are not reliable evidence of a short postcoital interval. These findings demonstrate that wet mount examinations are of little value in guiding subsequent analyses in the crime laboratory or in corroborating other investigative aspects of the case.     

The establishment of the presence and group classification of sperm in mixed stains by isoelectric focusing

The article deals with experimental data on design of the method used for detection of sperm, blood and vaginal secretions according to isoelectric points of acid phosphatases, differential diagnosis of ABO group antigens in "mixed" stains as well as detection of phenotype of red cell acid phosphatase by isoelectric focusing method.