检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响

目的 研究检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响。方法 使用生物检材采集与保存套管棉签、尖头棉签和普通医用棉签采集血样,分别放置于生物检材采集与保存套管或纸质物证袋中保存1周。剪取全部血样于96孔板中,用磁珠法结合自动化工作站提取DNA,以ABI7500型荧光定量PCR仪定量。结果 生物检材采集与保存套管采集保存的血样所提取的DNA浓度平均为(2.54±0.63)ng/μL,而尖头棉签、普通医用棉签采集并分别用纸袋保存的血样提取的DNA浓度平均为(2.06±0.44)ng/μL和(0.93±0.59)ng/μL。结论 生物检材采集与保存套管较之于尖头棉签或普通医用棉签采集、纸袋保存方式,其获得的DNA浓度显著提高,DNA提取率高。     

脱落上皮细胞类生物检材的自动化提取

目的建立一种自动化提取脱落上皮细胞类生物检材DNA的方法。方法附着于不同载体上的脱落上皮细胞类生物检材共278份,应用Eppendorf epMotion 5075LH工作站结合DNA IQTM系统提取模板DNA,并用Identifiler试剂盒进行STR检验。结果在278份被检的生物检材,其中126份检材获得13个基因座以上的STR分型,不同类型的检材其检出率不相同,最高达73.44%,最低为10.89%。结论脱落上皮细胞类检材应用自动化工作站提取DNA模板可在法医日常检案中广泛应用。     

砂纸擦蹭皮肤的DNA提取及检验

<正>目前,DNA检验技术已广泛用于实际办案,日常检案可能遇到不同的检材载体,其内含的抑制物成分是对检验成功的干扰因素,本文针对砂纸上擦蹭的人体生物检材进行检验,并对抑制因素的影响进行了初步探讨。1样本及检验1.1样本送检的被鉴定人手臂擦蹭细砂纸1块,约2cm×2cm;志愿者用与上述检材一致的细砂纸擦蹭皮肤1次的检材1块,以有砂面可见皮肤碎屑为纳入标准。1.2 DNA检验     

生物检材采集与保存套管的应用

目的探讨生物检材采集与保存套管在法医学中的应用价值。方法在不同温、湿度环境下，观察悬空放置在生物检材采集与保存套管、有孔与外界相通的套管及密闭管内的湿润棉签的干燥时间30次；分别用生物检材采集与保存套管和医用棉签采集纸袋保存口腔细胞、血液、皮肤脱落细胞样本各20例，磁珠法提取DNA并进行DNA定量；用生物检材采集与保存套管采集口腔脱落细胞和血样进行DNA直接扩增。结果在温度4～30℃、相对湿度21％～90％的环境下，湿润棉签在套管内的平均干燥时间为7．89h，有孔管内的为23．30h，密闭管内观察15天仍不干燥，出现霉斑。生物检材用套管采集保存比医用棉签采集纸袋保存方式获得的DNA量显著提高，平均高达0．968倍；用套管采集口腔细胞和血样进行直接扩增，操作简单方便，成功率高。结论生物检材采集与保存套管具有快速干燥、对检材无损耗和浓缩等优点，可提高检材DNA的提取效率，且适合直接扩增。     

磁珠直接吸附法对体态检材游离DNA的提取

目的采用磁珠直接吸附法对人体尿液、唾液、血液3种体态生物检材中的游离DNA进行提取检验,为法医物证中游离DNA的研究及检验工作提供参考。方法对3种生物检材采取离心吸取上清液的方法分离游离DNA,然后采用磁珠直接吸附法进行提取纯化,Identifiler-Plus试剂盒进行复合扩增后常规STR检测。结果在3种检材中均检出了游离DNA,其中血液中游离DNA检出率为100%,唾液为90%,尿液为70%。结论人体体态生物检材中存在游离DNA,同时磁珠直接吸附法可高效、快捷的提取生物检材中的游离DNA。     

盗窃案件现场检材提取与DNA检测结果的统计分析

目的统计分析1574例盗窃案件中提取的2496个现场生物检材,为提高DNA在盗窃案件侦破中的应用成效提供参考。方法根据2496个生物检材的类型、现场提取方法、重点提取部位、DNA检测结果等进行统计和分析比较,总结常见类型盗窃案件现场生物检材的主要发现提取部位以及不同方法提取的现场生物检材DNA检出率。结果接触类检材已成为盗窃案件最多见的生物检材类型,但检出率仍然较低,对混合分型应进一步分析筛选以提高DNA的认定率;不同方法提取的现场生物检材在DNA检出率方面存在统计学差异,接触类生物检材以植绒拭子和原物提取的方式为首选;现场生物检材的主要发现提取部位根据盗窃案件的类型不同有所侧重。结论现场勘查人员在盗窃案件中发现和提取到有价值的生物检材是提高DNA检出认定能力的关键因素,应着力培养现场勘查人员的微量生物物证意识,提高现场勘查人员提取和处理微量生物检材的能力。     

微量检材DNA提取方法

法医DNA鉴定中常见的微量检材,是指含有微量核DNA的降解检材(例如陈旧骨骼等)和附着载体上生物组织量少的检材。为了获得“大量”的检材DNA就必须增加检材用量,扩大反应体系。应用大反应体系提取微量检材DNA时,常出现提取溶液DNA含量过低,而不能获得DNA沉淀。如果不采用有效的方法,就会由于提取操作不当而引起DNA损失,导致PCR反应失败,直接影响案件的侦破和法庭证据的科学性。本文应用正丁醇浓缩法成功地解决了微量检材DNA的提取问题,在实际的案件鉴定中取得了满意的结果。1材料与方法1.1微量检材所用微量检材均来自案件鉴定所用…     

线粒体DNA cytb和HVI的分析用于种属鉴定

目的以线粒体DNA为目标序列,探讨生物检材的种属来源问题。方法复合扩增线粒体DNA细胞色素b基因(Cb)片段和D-环HVI上人源特异性DNA片段,2%琼脂糖凝胶电泳检测复合扩增产物谱带;用常规测序技术获得种属来源不明的检材Cytb基因序列,登陆美国国家生物信息中心网站主页(http://www.ncbi.nlm.nih.gov),将Cytb序列的测序结果用BLAST2.2.9[2004.5.1]进行匹配查询,查询数据库中存在的与其相匹配的物种条目。结果检材经复合扩增后电泳检测可区分人源性检材和非人源性检材;用生物信息法可确定检材种属来源结论检测线粒体DNA细胞色素b基因和D-环HVI的有关序列可在DNA分子水平上鉴别人源性检材和非人源性检材,结合测序的分子生物信息学方法,可对检材进行种属鉴定。     

两种纯化试剂盒对人体脱落细胞检材STR检出率比较

正随着DNA检验技术的普及和发展,办案人员应用DNA技术的意识不断增强,采集人体脱落细胞进行DNA分析应用逐渐广泛。采用常规提取方法难以获得高质量的DNA模板,影响后续的STR分型。本研究分别采用QIA DNA Investigator试剂盒(德国QIAGEN公司)、PrepFiler~?Express BTA Forensic DNA Extraction试剂盒(美国AB公司,下文简称为PrepFiler~?Express BTA试剂盒)对129份不同载体上人体脱落细胞检材进行检验,评估两种方法的     

刑事现场188份接触DNA检材法医学检验分析

目的分析188份接触DNA检材的提取、送检和检验结果,探讨接触DNA检出率及可能影响接触DNA检验的因素。方法收集本辖区2016年1月至2016年10月提取并送检的188份接触DNA检材,按照检材载体性质、提取方法、送检时间、检出率等进行分类,采用SPSS13.0软件对数据进行统计分析和χ2检验。结果188份接触DNA检材成功进行STR分型的有38份,检出率为20.21%;其中表面质软、粗糙的载体接触DNA检出率58.82%,高于其它载体接触DNA检出率组的差异具有统计学意义;直接原物提取的接触DNA检材检出率42.11%,高于脱落细胞粘取器提取、棉签拭子转移提取的检出率组的差异具有统计学意义;送检时间早的检材检出率高于送检时间晚的检材组且具有统计学意义。结论接触DNA检材的检出率受载体性质、提取方法、送检时间等因素影响,日常现场勘查时要注重发现检出率高的载体上的接触DNA选择适当的方法提取,并及时送检。     

接触性DNA及其现场发现

接触性DNA类检材在案件侦破和法庭证据中的作用越来越重要.本文指出对现场的接触性DNA的发现.提取策略,附着于不同载体上DNA的提取方法以及生物物证污染防控体系建立的探索将有助于此类检材的利用.     

陈旧骸骨DNA身份鉴定的法医学进展

骨骼和牙齿是重要的生物样本,由于结构特殊,抗降解能力强,是自然条件下保留DNA理想的生物检材。在历史人物鉴定案例中,陈旧的骨骼和牙齿样本常常是唯一的生物检材,但其DNA呈微量、毁损和不同程度降解状态,需要经过特殊的实验处理以实现身份鉴定。本文综合近年来相关研究报道,从采集检材、DNA提取、DNA富集、检测分析方案等方面进行综述,以期促进陈旧骨骼和牙齿检测体系的进一步发展和完善。     

两种包装方式对小体积生物检材DNA检验的影响

目的探讨一种适用于小体积生物物证检材的包装方式。方法选择M4型螺丝钉作为研究对象,经去污消毒处理,通过手握方式转移人体脱落细胞到其表面,对螺丝钉采用两种不同的包装方式(滤纸包裹和悬空固定),经KingFisher Flex自动提取工作站进行DNA提取,从基因座等位基因检出情况、STR分型谱带峰高、均衡性等方面比较两种包装方式对螺丝钉上DNA检出率的影响。结果悬空固定包装螺丝钉实验组获得的STR分型谱带峰高、均衡性等方面均优于滤纸包裹包装实验组,其在基因座检出数量、分型完全相同样本数及有效分型样本数方面也多于滤纸包裹包装实验组。结论为降低微量生物检材DNA二次转移造成的损耗,提高小体积生物检材DNA的检出率,建议对小体积生物检材采用悬空固定方式进行物证包装。     

衣物载体上人体脱落细胞的负压吸附采集法

目的建立脱落细胞负压吸附方法,用于DNA检验中衣物等载体上人体脱落细胞的采集。方法检材包括由志愿者佩带1、5、10、20m in纱线手套,穿着5、10、20m in的内衣以及外套、鞋、帽子、头套、袜子、水杯、矿泉水瓶等。在吸尘器的进风口处连接特制的吸筒,一端覆盖具有拦截和静电吸附细胞能力的特制吸附膜,选择适当负压对各检材相应部位进行吸扫。收集吸附膜上的脱落细胞,采用Chelex-100法提取DNA,AmpFLSTR Identifiler复合扩增试剂盒扩增检测。结果上述检材用本文负压吸附法采集人体脱落细胞,经检验均获得清晰、完整的STR分型图谱,并与检材提供者的基因型一致。结论本文建立的脱落细胞负压吸附技术可有效吸附载体上的脱落细胞,适用于DNA检案实践。     

改良EVO150-8方法在DNA自动化检案中的应用

目的探讨改良EVO150-8方法在批量生物检材DNA检验中的应用价值,建立一种自动化、简单、快速的DNA提取方法。方法采用改良EVO150-8自动化核酸提取纯化仪器与DNA IQ磁珠法纯化试剂盒,对各现场提取的880份血迹、烟蒂、口香糖、精斑（混合斑）、组织、骨骼、脱落细胞等常见生物检材进行DNA提取与纯化,采用Identifiler试剂盒进行扩增检验,用3130XL电泳,GeneMapper ID V3.2分析软件进行分析比对。结果在880份生物检材中,有836份检材成功获得STR分型;检验92份检材仅需时128min。结论改良EVO150-8适合批量生物检材的自动化提取。     

现场大量生物检材的自动化提取应用

正随着司法诉讼进程对证据质量要求的不断提高,重特大案件的现场重建直接导致生物检材的送检量大幅度提升,时效要求也越来越高。而现场送检的生物检材种类繁多,以往应用Chelex-100法手工操作耗时长、易污染,手工磁珠法无法批量进行,传统方式已无法适应形势的要求~([1]),寻求高通量的生物检材DNA自动化提取应用已迫在眉睫。本研究通过采用Auto Lys STAR自动化工作站结合微量检材DNA提取试剂盒建立生物检材DNA自动化检验体系,以实     

大面积载体上隐性浸润性生物物质DNA的提取

大面积载体上隐性浸润性生物检材主要指毛巾、衣裤等载体上看不见摸不着的人体脱落细胞。对于反复使用的物品,如牙刷、鞋帽、眼镜等,由于人体遗留的脱落上皮细胞较多,使用常规DNA提取方法如Chelex-100法等往往能获得理想的检测结果[1]。     

降解生物检材DNA分析策略的研究进展

生物检材发生降解后的DNA分型是法医DNA领域的难题之一。本文对降解检材分析策略的研究进行综述。分析了目前常用的降解DNA分析方法与技术的优缺点,对近年来新出现的方法,如扩增前降解损伤DNA修复策略、扩增后纯化策略和核小体DNA策略做了介绍,希望能为降解生物检材DNA检验的研究和分析提供思路,为相关应用提供新方法的参考。     

衣物类生物检材DNA检验的研究

目的建立对衣物类生物检材STR检验的有效自动提取纯化方法。方法对100例衣物类生物检材用EZ1DNA Investigator试剂盒、EZ1Advanced XL工作站的Large-Volume程序(大体积法)进行提取纯化,AmpFLSTR~Identifiler~Plus荧光STR复合扩增,3500x L型遗传分析仪分析结果。结果 69份检材中检出了单一DNA分型结果,9份检出了混合基因型,22份未检出基因型。结论该方法对衣物类生物检材DNA提取纯化后进行荧光STR检测,可应用于法庭科学实践。     

一种收集衣服上脱落细胞的新方法

目的建立一种生物脱落细胞的微量提取新方法。方法利用一套自制的“生物细胞提取仪”无损提取衣物等载体上的人体脱落细胞,采用Chelex-100法提取DNA,用不同的试剂盒进行STR复合扩增检验。结果10例检材都得到16个基因座成功分型。结论用该方法提取微量细胞DNA,可获得满意的DNA分型。