DNA IQ磁珠法结合Maxwell~（TM） 16自动仪提取接触DNA

目的研究DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM 16自动仪对接触DNA提取的应用价值。方法 151份案件接触DNA检材95℃裂解后,采用DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM 16自动仪提取DNA,然后进行DNA定量和STR分型检测,统计各种类型的接触DNA含量I、PC CT值和STR分型成功率。结果 151份案件接触DNA检材中,除果核平均DNA获得量为9.51ng以外,其它接触检材的平均DNA获得量均大于10ng,烟蒂检验成功率最高为93%,果核检验成功率较低,为60%。所有DNA样品的IPC CT值均在27左右,纯度高。结论大部分接触DNA检材采用DNA IQ磁珠法结合MaxwellTM 16自动仪可提取到足以进行STR分型的DNA。     

运用酚-氯仿法结合磁珠法提取蝇蛆体内人类DNA

目的建立运用酚-氯仿法结合磁珠法从蝇蛆嗉囊内提取人类DNA的方法,从而提高STR分型检验的灵敏度。方法采用酚-氯仿法对蝇蛆嗉囊内容物中的人类DNA进行提取,提取产物经磁珠法纯化浓缩后用QuantifilerTM人类DNA定量试剂盒在7500型实时荧光定量PCR仪上进行PCR定量,再用AmpF■STR IndentifilerTM试剂盒在3130XL-Avant遗传分析仪上对这些DNA样本进行STR分型。结果本研究建立的方法可增加模板DNA浓度约为单独使用酚-氯仿法的2倍。用此方法提取到的DNA浓度[（0.218±0.041）ng/μL]可获得全部16个STR分型结果。结论酚-氯仿法结合磁珠法可以有效地提高提取到的人类DNA样本STR分型检验的灵敏度,对于从事法医昆虫学方面研究的工作者有较好的实用价值。     

纳米磁珠提取法在骨骼DNA提取中的应用

目的对纳米磁珠法提取纯化骨骼DNA的效果进行比较评价,为方法选择提供应用参考。方法取泥土掩埋、水中浸泡1~10年不等的25根长骨,经水洗、刮净,液氮冷冻研磨器将骨骼研磨成粉末状,分别应用纳米磁珠提取法和King Fisher仪器自动化提取法提取DNA,IdentifilerPlus试剂盒进行扩增,ABI 3100遗传分析仪进行STR分型检测;对两种方法提取的DNA定量和经扩增、分型检测的结果进行比较。结果骨骼样本采用纳米磁珠法提取到的样本DNA(1.237 5ng/μL±0.319 2ng/μL),较之King Fisher法的浓度(0.506 2ng/μL±0.280 5ng/μL)更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05);而纳米磁珠法的分型成功率亦更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05)。结论用纳米磁珠提取纯化骨骼DNA,能得到高质量DNA模板,有利于提高分型检验的成功率,可在实际检案中选择使用。     

人体接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响

目的比较3种常见的接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响。方法收集烟蒂、牙刷、纱线手套各10份;分别采用95℃、70℃直接裂解和TNE、SDS、PK预消化方式进行前处理,再用磁珠法提取纯化DNA,并进行DNA定量,统计提取的接触DNA量和IPC CT值;同时用Sinofiler复合扩增系统进行STR分型检测。结果 3种方法前处理后用磁珠提取的DNA纯度均较高I,PC CT值在26.63～27.19之间。用预消化法获得的DNA量高于裂解法,而95℃裂解与70℃裂解方法提取的DNA量无显著性差异。STR扩增检测结果亦表明,采用预消化法处理的样品STR分型成功率高于裂解法9,5℃与70℃裂解方法处理的样品STR分型成功率无显著性差异。结论人体接触检材采用预消化磁珠法提取DNA,有助于提高STR检验成功率。     

Chelex法和两种磁珠法提取接触DNA效果的比较

目的比较Chelex法、DNA IQ磁珠法、EQ国产磁珠法对接触DNA的提取效果。方法将稀释为10ng、100ng的标准品DNA,分别采用Chelex法、DNA IQ磁珠法、EQ国产磁珠法处理;对30例烟蒂和30例牙刷分别采用Chelex法、DNA IQ磁珠法和EQ国产磁珠法提取DNA,然后进行PCR定量和STR检测。结果Chelex法对DNA的提取无损失,DNA IQ磁珠法、EQ国产磁珠法对DNA的提取均有不同程度的损失;烟蒂、牙刷等检材采用Chelex法提取的接触DNA量和IPC CT值显著高于IQ磁珠法、EQ国产磁珠法,但STR检验成功率却低于IQ磁珠法、EQ国产磁珠法。2种磁珠法提取的DNA量、IPC CT值和STR检验成功率无显著性差异。结论污染轻、杂质少的接触DNA检材,用Chelex法提取最为方便快捷;IQ磁珠法、EQ国产磁珠法更适合污染接触DNA检材的提取及自动化操作。     

泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响

目的 研究泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。方法 泥浆悬液和稀释血混合,制成混有灰尘、泥土的生物样本以模拟现场生物物证,分别用加热裂解和胍盐化学裂解的方式进行细胞裂解,硅珠法提取DNA后用Identifiler Plus试剂盒进行PCR扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较;用泥浆悬液代替硅珠提取稀释血DNA,反向验证泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。结果 混有泥浆悬液的4μL、20μL稀释血加热裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 969.7±376.9 RFU、9 706.7±349.8 RFU;混有泥浆悬液的4μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后无法获得完整STR分型;混有泥浆悬液的20μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 899.8±801.3 RFU;泥浆悬液代替硅珠提取20μL稀释血得到完整STR分型。结论 泥土中的二氧化硅在胍盐存在条件下会与DNA结合,导致硅珠法提取现场生物物证DNA的回收效率降低。     

Chelex-100法提取脱落细胞检材DNA的实时定量研究

目的研究脱落细胞检材DNA检验的简便有效的提取方法。方法对76份包括帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水在内的7种脱落细胞检材采用Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用Identifiler复合扩增系统扩增,在ABI3130遗传分析仪上进行STR分型。结果从帽子（头套）中获得的脱落细胞DNA平均含量为8.31ng,眼镜擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.20ng,牙刷上获得的脱落细胞DNA平均含量为49.40ng,剃须刀擦拭物上获得的脱落细胞DNA平均含量为6.92ng、梳子擦拭物上获得的的脱落细胞DNA平均含量为10.68ng,口香糖的脱落细胞DNA平均含量为16.30ng,羊水的脱落细胞DNA平均含量为320ng。以上76份检材性别及10个以上STR位点分型成功率为75.8%。结论从帽子、眼镜、牙刷、剃须刀、梳子、口香糖、羊水等检材提取的脱落细胞可用Chelex-100法提取DNA作STR分型。     

车辆上脱落细胞STR检验

目的对汽车方向盘及变速杆把手上的皮肤脱落细胞进行STR检验研究。方法用EZ-tape采集车辆方向盘及变速杆上的脱落细胞,Chelex-100法与磁珠法结合提取DNA,延长保温时间。定量后调整PCR反应体系,适当增加PCR循环数,增加PCR产物量及延长进样时间进行电泳检测,使用GeneMapperIDV3.2软件进行STR分型。同时,对比使用多重置换扩增技术对提取的DNA进行全基因组扩增。结果对33份车辆方向盘和变速杆上脱落细胞的检测,其中19份检出全部基因座的基因分型结果,9份检出部分基因型,5份未检出DNA分型结果。而利用多重置换扩增技术未获得满意图谱。结论本研究建立的脱落细胞收集、DNA提取、PCR扩增及检测方法适合于车辆上脱落细胞的检验,其结果优于使用多重置换扩增技术获得的分型。     

车辆上脱落细胞STR检验

目的对汽车方向盘及变速杆把手上的皮肤脱落细胞进行STR检验研究。方法用EZ-tape采集车辆方向盘及变速杆上的脱落细胞,Chelex-100法与磁珠法结合提取DNA,延长保温时间。定量后调整PCR反应体系,适当增加PCR循环数,增加PCR产物量及延长进样时间进行电泳检测,使用GeneMapperIDV3.2软件进行STR分型。同时,对比使用多重置换扩增技术对提取的DNA进行全基因组扩增。结果对33份车辆方向盘和变速杆上脱落细胞的检测,其中19份检出全部基因座的基因分型结果,9份检出部分基因型,5份未检出DNA分型结果。而利用多重置换扩增技术未获得满意图谱。结论本研究建立的脱落细胞收集、DNA提取、PCR扩增及检测方法适合于车辆上脱落细胞的检验,其结果优于使用多重置换扩增技术获得的分型。     

磁珠法自动化纯化现场检材DNA方法研究

目的利用TE-MAGS在TECAN工作站上结合磁珠试剂盒,建立自动化工作站批量纯化现场检材DNA的方法,并探讨其在法医物证检案中的应用。方法灵敏度测试:标准品使用0.1ng/μL 9947A,用200μL TES稀释制备DNA总量0.1ng~1ng共10种的标准样品,采用本文方法提取纯化,使用IdentifilerTM试剂盒扩增,用3130XL型测序仪检测,Gene Mapper ID-X分析,分析STR图谱质量;纯化能力测试:在1ng总量的标准样品中加入腐殖酸、血红素,采用本文方法提取纯化、扩增检测,分析STR图谱质量;实际案件应用对比:收集304份现场检材,分别采用本方法和硅珠法进行提取纯化,经扩增检测,统计对比两种提取纯化方法 STR分型成功率。结果灵敏度测试:0.1ng~0.2ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可检测到部分基因座STR图谱,0.3ng~1ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可以得到完整的STR图谱;纯化能力测试:对混合有一定浓度的腐殖酸、血红素的标准样品的提取产物检测图谱未见明显抑制;实际案件应用对比测试:304份现场检材工作站磁珠法检出成功率(50%)高于硅珠法(40.8%)。结论本文所建立的方法缓冲范围较大,回收率高,纯化能力强,提取产物STR分型成功率高,适合现场检材批量化DNA检验。     

DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

免疫磁珠法分离混合样本中血液成分的探究

目的 基于免疫磁珠法分离脱落上皮细胞中的白细胞，消除或减弱混合检材中血液来源STR分型对结果分析的干扰。方法 分别取两名不同个体的血液和口腔脱落上皮细胞，按不同比例制备成混合样本作为实验组，并同时制备细胞量相等的对照组。应用免疫磁珠法分离实验组样本中白细胞，并与对照组以相同条件进行DNA提取、扩增、分型，对比两组STR分型结果。结果 当血液量较少时，对照组为混合STR分型，经免疫磁珠法分离混合检材中白细胞后，实验组为单一来源STR分型；当血液量较多时，此时对照组为混合STR分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带峰高较低甚至丢失，经免疫磁珠法后，实验组仍为STR混合分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带成为主峰；当混合样本中口腔脱落上皮细胞微量，血液占比极大时，此时对照组为血液来源的单一STR分型结果，经免疫磁珠法后，实验组为STR混合分型，包含口腔脱落上皮细胞来源的所有等位基因分型。结论 该方法可用于分离脱落上皮细胞中血液成分，降低血液来源的DNA比例，能够改善此类混合检材中目的细胞的STR分型结果，为刑事案件中含有血迹浸染的混合生物检材的检验提供了一种新思路。     

氨基比林血痕预试验处理血痕后样本的DNA定量

目的：探讨氨基比林血痕预试验处理血痕后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法10名健康无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,氨基比林血痕预试验检测,按试验后血样干燥保存时间分30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h共6个实验组,并采用磁珠法、QIAcube DNA纯化法、Chelex-100法三种方法提取样本DNA,应用荧光定量PCR检测样本DNA含量,PCR-STR荧光技术进行STR分型。结果提取方法相同时,氨基比林血痕预试验后血样随干燥保存时间的延长,样本DNA含量呈逐渐降低的趋势。保存时间相同时,不同DNA提取方法间,样本DNA含量差异也有统计学意义。90.56%样本均可获得16个STR基因座明确分型。结论氨基比林血痕预试验对血痕样本DNA有损伤,24 h内多可获有效STR分型。磁珠法提取样本DNA进行STR分型,效果最好。     

免疫磁珠法与差异裂解法检验混合样本的效果观察

目的分析应用免疫磁珠分离技术和差异裂解法对混合样本的DNA检验效果,评价其在法医学应用中的价值。方法制备含有不同数量精细胞与阴道上皮细胞混合悬液和植绒混合斑拭子,分别采用MOSPD3抗体、SPAG8抗体免疫磁珠法及差异裂解法对样本进行检验,观察分析不同比例的混合细胞悬液,以及不同保存时间植绒混合斑拭子DNA分型的正确率。结果当混合细胞悬液内精细胞与阴道上皮细胞比例约1∶10时,免疫磁珠法的正确率明显高于差异裂解法(P0.01);当比例等于或高于1∶1时,两种方法正确率的差异无显著性意义(P0.05)。植绒拭子混合斑的免疫磁珠法正确率明显低于差异裂解法(P0.01);随混合斑保存时间的延长,差异裂解法正确率无明显下降(P0.05)。结论免疫磁珠法适用于新鲜混合样本中精细胞的分离检验,且在精细胞含量较低时优势更明显,差异裂解法较适合陈旧混合斑的分离检验。     

批量陈旧血样DNA的自动化检验

目的建立批量陈旧血样DNA自动化提取检验的方法。方法采用普通磁珠法和本文建立的磁珠法经TECAN Freedom EVO150—8型自动化工作站分别提取540份陈旧血样模板DNA,采用Sinofiler^TM试剂盒进行荧光标记复合扩增。结果采用普通磁珠法和本文所建DNA提取方法,在540份样本中获得全部基因座STR分型的样本分别为217份和488份,检验成功率分别为40．2％和90．3％。结论本文所建方法可显著提高大批量陈旧血样自动化检验成功率。     

茚三酮薰显法在人体接触细胞发现采集中的应用

目的 研究茚三酮薰显法在人体接触细胞发现采集中的应用价值.方法 对衣服、口罩、棍棒等可疑人体接触细胞检材258份,采用1％茚三酮溶液进行显色反应,然后用磁珠法提取DNA,并进行DNA定量和STR检测.结果 可疑人体接触细胞检材中有172份显色反应阳性,其中115份检出的DNA浓度在0.02ng/μL以上并检出6个以上STR基因座的基因型,检出率为66.86％;显色反应阴性的86份检材均未检出DNA浓度或成功进行STR基因型.结论 茚三酮薰显技术可用于指导案件人体接触细胞的发现采集.     

浓缩DNA法结合miniSTR分型技术检验微量DNA

目的优化低拷贝数DNA STR分型方法。方法对采用磁珠法或Chelex-100法提取DNA,Identi-filer试剂盒扩增,未获得分型结果的日常检案检材,采用物理浓缩法或过柱浓缩法浓缩DNA,采用miniFilerTM试剂盒再次扩增分型。结果 127例检材中,47例磁珠法提取DNA未获得分型的样品,分型成功率为36%;80例Chelex-100法提取DNA未获分型的样品,分型成功率为30%。结论采用浓缩法和miniFilerTM试剂盒,可以提高日常检案中低拷贝数检材的STR检验分型成功率。     

联苯胺试验对血痕DNA检验的影响

目的探讨联苯胺试验及相关试剂对血痕DNA检验的影响。方法制作含1μL静脉血的滤纸血痕970份,其中10份为对照样本,960份经联苯胺试验及相关试剂分别处理后,采用Chelex-100法和硅珠法提取DNA,Amp F詛STR~(TM)Identifiler~(TM)Plus PCR扩增试剂盒进行复合扩增,对比各组STR分型结果。结果联苯胺试验后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(3.80±1.34)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;联苯胺试验后干燥处理,硅珠法有13例(21.7%)获得全部STR基因座分型结果,且STR基因座检出数[(12.90±1.49)个]远高于Chelex-100法[(4.70±1.96)个](P0.05);加入冰醋酸后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(9.40±2.09)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;只加冰醋酸后干燥处理以及只加四甲基联苯胺乙醇饱和溶液或3%过氧化氢溶液,两种方法均获得完整15个STR基因座分型结果。结论联苯胺试验对血痕的后续DNA检验有很大的影响,Chelex-100法不适合联苯胺试验后血痕的DNA检验,联苯胺试验后干燥处理及采用硅珠纯化的方法可有效提升联苯胺试验后血痕的STR基因座检出数。     

PowerPlex21直扩法与磁珠法用于毛发STR检验的比较

目的比较Power Plex21直接扩增法与磁珠提取后扩增法用于带毛囊毛发STR检验的效果。方法带毛囊毛发平均分成2组,每组含拔取毛发20根、自然脱落带毛囊毛发20根,剪取毛囊后1组用Power Plex21试剂盒直接扩增,1组先用磁珠法提取DNA然后扩增Power Plex21试剂盒,扩增产物在3130XL遗传分析仪上进行电泳检测分析。结果拔取毛发直接扩增和磁珠提取后扩增均成功检出全部STR基因型。自然脱落带毛囊毛发直接扩增检出STR基因型的成功率为55%,磁珠提取后扩增检出STR基因型的成功率为25%。结论 Power Plex21直接扩增法比磁珠提取后扩增更适于带毛囊毛发的STR检验。