头盔上附着微量DNA的检验1例

1材料与方法1·1案例某地发生的系列抢劫案中,提取到现场遗留的摩托车头盔1顶,其上未见明显斑迹。1·2方法(1)采用棉签二步法[1]擦拭头盔上与口鼻相对应的内侧部位。(2)剪取擦拭后棉签放入0·5ml Eppendorf管中,加400μl纯水清洗,离心,去上清,保留约20μl液体和沉淀物。(3)加5%Chelex-100 200μl、PK(5mg/ml)10μl,56℃温育1hr。(4)振荡,100℃8min,振荡,13000r/min离心3min。(5)取上清液150μl,采用DNA IQTM系统(Promega Cat.#DC6700)浓缩纯化。(6)在Applied Biosystems公司的9700型Ge-neAmp PCR System上进行10μl体系的Identifi…     

3种提取高度腐败检材DNA的方法比较

本文对3种DNA提取方法在高度腐败检材DNA提取中的应用进行了比较,供法医学实践参考。1材料与方法1.1材料3份检材均为尸体肋软骨,其中1号为死后在水里浸泡18天解剖,酒精固定2年的检材,2号检材为死后15天解剖,酒精固定1年的检材,3号检材为死后10天解剖,后酒精固定1月的检材。1.2 DNA提取Chelex-100法[1]3份检材各500mg剪粹,分别加入200μl 5%Chelex-100,10μl PK(10mg/m l),10μlDTT(39mmol/m l二硫苏糖醇),37℃水浴过夜,100℃加热10m in,剧烈震荡,10 000 r/m in离心10m in,上清备用。有机法[2]3份检材各500mg剪粹,分别加入400μl TES…     

利用mRNA检验确证无精子症精斑1例

正近年来,利用mRNA进行生物物证体液斑迹的研究已经取得一定的进展,其在DNA鉴定工作中发挥的作用也越来越被重视。本实验室受理了1起强奸案,通过mRNA的检测分析,为刻画嫌疑人提供了依据,现报道如下。1案例资料1.1简要案情2015年4月某强奸案中,现场提取到有疑似精斑的床单1件,斑迹经人精P30试纸条检测为阳性。用差异裂解法提取检材DNA,同时检测上清液和沉     

微量PCR反应体系在两种试剂盒中的应用

美国AB I公司的Profiler PlusTM试剂盒和Identifi-lerTM试剂盒在当前法医DNA检案中应用广泛,但价格昂贵。本实验利用5μl体系进行PCR扩增取得满意效果,降低了检验成本。1材料与方法1.1材料法医DNA检案中常规检材,血痕、精斑、烟蒂和毛发(带毛囊)各20份。Profiler PlusTM试剂盒和IdentifilerTM试剂盒(AB I,USA)。1.2方法1.2.1 DNA提取上述检材采用Chelex-100法[1]提取模板DNA。取9mm2血痕加入5%Chelex-100150μl,56℃2h;精斑经两步法视镜检精子量多少酌情加入5%Chelex-100 150~250μl,PK 10μl(2mg/m l),DTT 10μl(1mol/L…     

DNA IQ~(TM)System试剂盒用于精斑检验1例

<正>1案例资料1.1简要案情陈某,女,25岁。2011年3月,报警称其前一日在某花园被魏某强奸,提取陈某阴道拭子及魏某血样等相关物证送检(案发后,陈某冲洗了身体且使用洗衣粉清洗了内裤)。1.2 DNA检验剪取陈某阴道拭子和内裤裆部检材置于1mL离心管内,加入TNE 1 000μL,浸泡30min,使用抗人精斑检测试剂条检测,结果显示均为阴性,镜检均未发     

室外毛巾上腐败血痕STR分析1例报道

1材料与方法1.1案例2006年某日,深圳市某山顶发现一具高度腐败女尸,现场提取一块方形小毛巾(有灰黑色可疑血痕),送检做DNA检测。1.2方法1.2.1提取DNA方法一:常规Chelex-100法[1]提取方形小毛巾上可疑血痕。方法二:应用德国QIAGEN公司生产的BioRo-bot EZ1全自动核酸纯化仪[2](以下简称BioRobotEZ1)提取方形小毛巾上可疑血痕。(1)剪取适量检材,置0.5 ml Eppendorf管中,加入EZ1试剂盒(EZ1 DNA Tissue Kit(48)(Cat.No.953034))中试剂BufferG2 190μl,PK 10μl,56℃裂解30 min,去载体将裂解液转移置2.0 ml样本管中。(2)在BioRobo…     

排便后擦拭手纸DNA检验1例

<正>1案例资料1.1简要案情樊某,女,4岁。2011年2月被一男性猥亵,因其之后已洗澡,故提取现场粘有粪便的手纸、樊某当时穿的棉毛裤及樊某血样,要求进行DNA分型检验。1.2 DNA检验DNA提取剪取手纸(P30试验阴性)及棉毛裤上的可疑斑迹(P30试验阳性)少许,用双蒸水浸泡、离心,手纸疑斑迹用Chelex-100法提取DNA并采用磁珠法进     

硅珠法提取DNA在强奸案中的应用

通常情况下进行混合斑中精子DNA的提取采用酚－氯仿法及Chelex－１００法,但仍存在一些缺点。本实验室采用了一种新的方法进行精子DNA的提取,取得了较好的效果。介绍如下：１方法１．１试剂的配制犤１犦１．２操作方法（１）剪取精斑检材各约２cm×２cm,分别加入７５０μlTNE溶液、１０％SDS７．５μl及pk７．５μl（１０mg／ml）于１．５ml离心管中,置３７℃水浴１h。套管离心,１１０００r／min离心３min,弃上清液,沉淀用TNE垂悬,离心３min,重复２～３次。（２）沉淀中加入７ ０μlTNE、１０μl十二烷基肌氨酸钠及２μl…     

塑料袋包裹胎儿经福尔马林浸泡4个月后DNA检验1例

某女被强奸致孕,7个月后在医院引产一名男性胎儿。之后,该胎儿用塑料食品袋包裹后浸入福尔马林溶液,4个月后要求进行DNA检验。1 DNA检验1.1取材及其DNA提取纯化用无菌手术剪剪取黄豆粒大小的胎儿大腿深层肌肉组织,切碎后用组织匀浆器匀浆,放入1.5m l离心管内,加入纯水浸泡2h,其间换水1~2次。然后用无水乙醇洗涤2~3次,离心弃上清,室温晾干;沉淀物用去离子纯净水洗涤,加入5%CTAB裂解液500μl及PK(终浓度为400μg/m l),置65℃水浴箱中温浴3 h(其间不时振荡)后取出,100℃变性8m in,离心取上清,加入等体积的氯仿:异戊醇(24∶1)抽提上层DN…     

大体积液体检材过滤装置研发及提取技术

目的研究一种新型的"液体检材过滤提取仪",用于过滤、富集大体积液体检材中的脱落细胞。方法在液体检材过滤提取仪中分别安装8种不同孔径的滤膜(0.45μm、10μm、20μm、30μm、60μm、80μm、120μm的尼龙膜、无纺布),依次过滤、富集64份200 mL洗手水样本;采用M48磁珠法提取滤膜上富集的细胞DNA;再分别对提取到的DNA用7500荧光定量PCR仪进行定量;根据定量结果进行DNA-STR检验。结果 10μm和20μm孔径的尼龙网格膜成为该过滤提取仪首选,无纺布次之。结论 "液体检材过滤提取仪"可用于法庭科学实际案例中大体积液体检材中脱落细胞的过滤、富集。     

阴茎上检出他人精子1例

1 案例 某男,52岁,某日下午到某女(30岁,哑巴,弱智)家看电视.某女婆婆当时在家,后来带孙子出去玩,约15 min后回家,发现两人正在拎穿裤子,即怀疑某女被强奸,遂报案.提取以下7份生物检材:某女短裤裆部可疑斑迹、阴道擦拭物、外阴部擦拭物,某男阴茎擦拭物,某男、某女及其丈夫血样各一份,分别编为l～7号.精斑预试验:1～4号检材均呈阳性;精斑确证试验:1～3号检材均检出人精子;DNA检验结果见表1.     

特殊载体上人体细胞DNA检验2例

1案例资料案例1侯某(女,中学生),2002年12月15日晚5时,在放学回家途中遭1名男子强奸。侯某未及时报案,也未保存相关物证检材,给该案侦破带来一定难度。侦查人员在勘查时提取了现场遗留牙刷1把,经侯某回忆犯罪分子当时曾用牙刷捅其下身。检验人员用1根约3~4cm的干净纱线蘸取生理盐水,反复擦拭牙刷柄,并用另1根纱线再反复擦拭1次,将2根纱线一并放入1.5m l离心管中,加200μl生理盐水浸泡、振荡洗涤,12 000 r/m in离心,取上清液进行人血种属试验,结果呈阳性;再向管中加1m l无菌纯水,振荡洗涤,再次离心后去上清,5%Chelex-10050μl和PK 10mg/m l…     

检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响

目的 研究检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响。方法 使用生物检材采集与保存套管棉签、尖头棉签和普通医用棉签采集血样,分别放置于生物检材采集与保存套管或纸质物证袋中保存1周。剪取全部血样于96孔板中,用磁珠法结合自动化工作站提取DNA,以ABI7500型荧光定量PCR仪定量。结果 生物检材采集与保存套管采集保存的血样所提取的DNA浓度平均为(2.54±0.63)ng/μL,而尖头棉签、普通医用棉签采集并分别用纸袋保存的血样提取的DNA浓度平均为(2.06±0.44)ng/μL和(0.93±0.59)ng/μL。结论 生物检材采集与保存套管较之于尖头棉签或普通医用棉签采集、纸袋保存方式,其获得的DNA浓度显著提高,DNA提取率高。     

水中浸泡50余小时口罩上DNA检验1例

1案件简介2005年2月4日凌晨,我省某县发生一起特大入室抢劫杀人案,案发后50多个小时,在距离案发地1km处一农用大口井内打捞出一个沾有大量淤泥的白色口罩及其他相关犯罪物品。我们重点对口罩进行了DNA检验。2检验与结果(1)取适量检材,常规150μl5%的Chelex-100提取DNA。(2)取(1)中DNA50μl以Microcon-100浓缩柱浓缩至10μl,分别以模板DNA1、2μl进行Plus试剂盒扩增(28个循环,10μl体系),结果1μl模板DNA扩增出4 1个位点(见图2-A)。图2 Microcon-100浓缩柱提取的口罩DNA,Plus试剂盒扩增(28个循环,10μl体系)图谱A:模板1μl(3)取(1)…     

使用QIAmnp DNA Stool Mini Kit提取粪便DNA并检验

笔者应用QIAamp DNA Stool Mini Kit(QIA-GEN公司)提取粪便DNA,并用不同试剂盒进行了对比试验,以寻找合适的检测方法。1材料和方法1.1样本自愿者提供的粪便样本15份,于-20℃保存,粪便样本提供者提供的唾液样本15份。1.2 DNA提取用QIAamp DNA Stool Mini Kit(QIAGEN公司)提取,稍作改动,过程如下:取220mg粪便放于2ml离心管中,加1.6ml Buffer ASL,振荡至粪便样品完全均质,14000r/min离心2min,上清移至一新2ml离心管,加一片InhibitEX,振荡至InhibitEX片完全溶解,室温放置2min,14000r/min离心3min,吸取所有上清于另一新2ml离…     

联合应用Y-STR和ABO基因分型检验技术侦破命案2例

1 案例 案例1 某日,李某(女,53岁)被杀死在家中,下身赤裸,头部有钝器伤.提取死者阴道擦拭物等生物检材送检. 案例2 某日晚,邢某(女,48岁)被杀死在家中.技术人员勘查现场后提取现场血迹等生物检材送检DNA.     

应用激光生物检材发现仪提取痕量DNA1例

1案例资料 2013年某日,本地区村民何某家中的一只保险箱被窃。在中心现场提取到口罩一副,怀疑为犯罪嫌疑人遗留,要求进行DNA检验。1.1 DNA检验口罩在自然光下观察,未见可疑斑迹。将检材置于暗室,使用TL-445B台式激光生物发现仪（Tech-Long国际股份有限公司）用445nm纯蓝激光激发,佩戴专用眼镜则见可疑斑迹处出现荧光反应（图1）。     

Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA，应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量，同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为：37份滤纸、纱布血痕0．042～5．28ng／μl，16份口腔拭子1．15—4．21ng／μl，18份烟头0．016～1．46ng／μl，10份肋软骨0．531—14．40ng／μl，8份肌肉5．75—24．80ng／μl，7份指甲0．788—11．50ng／μl，17份精斑0．79～99．50ng／μl。在建立的8μl扩增体系中，根据上述结果，调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0．5—3ng之间，大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0．5—3ng之间可得到有效STR扩增，浓度为0．5ng／μl以上的DNA样品，用小体积模板（1μl）比大体积（3μl）模板扩增效果好。     

关于血缘关系鉴定中基因突变判断的探讨

利用十几个STR系统的基因座进行血缘关系鉴定时,如果仅有一个基因座不符合遗传定律,是否判断为基因突变,由于没有直接的论证手段,历来是个难解的问题[1-2]。本文通过两个案例对血缘关系鉴定中基因突变的判断进行探讨。1材料和方法1.1检材案例1:碎尸案,采集失踪者韩某的母亲及三个姐姐的血样。案例2:贩毒案,采集犯罪嫌疑人及携带的男婴的血样。1.2方法1.2.1DNA提取血样用Chelex-100提取法(总体积200μl)提取模板DNA。1.2.2STR分型[3]上述血样采用ProfilerPlus试剂盒(ABI公司)和Cofiler试剂盒(ABI公司),或Identifiler试剂盒(ABI公…     

硫酸铜检验1例

硫酸铜(CuSO4)是二价铜盐,可溶于水,有毒性,其水溶液因硫酸铜水解而略呈碱性。无水硫酸铜为白色粉末,一般情况下,易吸水变为CuSO4.5H2O呈蓝色。2005年3月11日,新乡市获嘉县某线材厂被盗铜板(已被硫酸反应过,铜板上附有大量硫酸铜)20块,价值3000余元。3月17日查获犯罪嫌疑人冯某,提取冯某的棉袄、棉鞋以及几块红砖(棉袄、棉鞋以及红砖上均附有微量浅蓝色物质)。1检材提取将棉球用去离子水浸泡后,分别擦拭附有微量浅蓝色物质检材的表面;挤出棉球中的水,离心(1000r/min)1min,取上清液备检。2检验(1)取检材提取液各1ml,滴加0.5ml0.5?Cl2溶…