基于RNA生物标志物的血痕形成时间推断模型构建与验证

目的 筛选血痕中与其形成时间(time since deposition,TSD)具有相关性的RNA生物标志物并构建血痕形成时间推断模型。方法 从文献筛选12个候选RNA生物标志物(ALAS2、B2M、HBA、HBB、PPIA、ACTB、GAPDH、SPTB、SNORD24、SNORD38B、5S rRNA、18S rRNA)，以let-7g-5p为内参基因，利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qRCR)技术检测10名健康无关个体在7个时间节点的70份血痕样本，候选RNA生物标志物在0～180 d范围内的相对表达丰度，筛选与形成时间相关性高的RNA生物标志物，以此构建用于血痕形成时间推断的多元线性回归模型并验证。结果 通过GraphPad Prism和SPSS Statistic 22软件对候选RNA生物标志物的?Cq值(?Cq=Cq_{生物标志物}–Cq _let-7g-5p)进行正态分布分析和相关性分析，确认PPIA、ACTB、GAPDH、ALAS2、B2M、HBA、18S rRNA和HBB这8个R...     

基于DNA甲基化推断年龄的研究进展

年龄推断在刑事侦查及司法鉴定领域具有重要的意义,可以为司法部门提供个体的年龄信息,有助于司法工作的开展。近年来,年龄推断方法已从既往的形态学层面拓展至分子生物学层面。随着以DNA甲基化为代表的表观遗传学的迅速发展,以及DNA甲基化检测技术及检测平台不断提升,许多基于DNA甲基化的生物标记及利用各种生物体液(如血液、血痕、唾液、精斑等)的年龄推断方法不断发展。目前,基于DNA甲基化推断年龄的相关研究较多,本文对该方面的研究进行归纳总结,希望能为相关研究和法医学应用提供参考。     

9-CpG年龄推断在不同海拔地域和性别人群中的验证及优化

目的本研究旨在对早先建立的9-CpG年龄推断模型在不同海拔地域和不同性别人群中年龄推断的适用性进行验证及优化,提升年龄推断的准确性,并研究检测体系的灵敏度。方法采集367份不同海拔地域、不同性别个体的血液样本,使用EpiTYPER技术平台检测9个CpG位点的甲基化值,利用年龄推断模型预测样本提供者的年龄,综合评估年龄预测的准确性。结果所有测试样本均获得相对准确的年龄预测值(N=367, MAD=4.0岁,R~2=0.83)。平原女性样本(N=40),MAD=3.63岁,R~2=0.88。平原男性样本(N=123)MAD=3.42岁,R~2=0.83;其中随机选取平原男性样本(N=40)MAD=3.39岁,R~2=0.83;高原男性样本(N=204)MAD=4.42岁,R~2=0.86。加入平原与高原变量,新建立8-CpG年龄推断模型,MAD=2.90岁,R~2=0.86(验证集MAD=3.31岁,R~2=0.83)。灵敏度分析中转化前最低DNA用量为250ng(转化后最低DNA用量约为8ng)可获得9个位点完整甲基化信息。结论本研究证明了9-CpG年龄推断模型在不同性别间无显著差异。同一模型应该考虑高原和平原人群血液样本DNA甲基化差异。加入平原与高原变量,新建立8-CpG年龄推断模型可提高高原地区人群年龄预测准确性。     

氨基比林血痕预试验处理血痕后样本的DNA定量

目的：探讨氨基比林血痕预试验处理血痕后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法10名健康无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,氨基比林血痕预试验检测,按试验后血样干燥保存时间分30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h共6个实验组,并采用磁珠法、QIAcube DNA纯化法、Chelex-100法三种方法提取样本DNA,应用荧光定量PCR检测样本DNA含量,PCR-STR荧光技术进行STR分型。结果提取方法相同时,氨基比林血痕预试验后血样随干燥保存时间的延长,样本DNA含量呈逐渐降低的趋势。保存时间相同时,不同DNA提取方法间,样本DNA含量差异也有统计学意义。90.56%样本均可获得16个STR基因座明确分型。结论氨基比林血痕预试验对血痕样本DNA有损伤,24 h内多可获有效STR分型。磁珠法提取样本DNA进行STR分型,效果最好。     

上、下尖牙髓腔/牙体表面积比值的年龄判定价值研究

目的通过三维重建测量上、下颌尖牙髓腔/牙体表面积比值(Pulp/Tooth area Ratio,PTR)来推断个体年龄,为临床年龄推断的应用提供科学依据。方法收集口腔门诊患者年龄在16~65岁200例锥形束CT(Cone beam computed tomography,CBCT)影像资料,以4个尖牙为测量对象并进行三维重建,测量各尖牙髓腔和牙体表面积,计算PTR值。应用SPSS17.0软件进行统计学分析,推导实际年龄的推断公式。结果Pearson相关分析显示上、下颌尖牙PTR值与实际年龄呈高度负相关(P<0.001,r值为-0.833~-0.891)。4个尖牙间的PTR值无显著差异(P>0.05)。男女性别间尖牙PTR值无显著差异(P>0.05)。尖牙PTR值(x)推断年龄公式为:年龄=84.42-222.22x,R²=0.739。结论检测尖牙的PTR值,可明显提高临床年龄推断的准确性。     

联苯胺预试验处理血痕后样本DNA定量的研究

目的探讨联苯胺血痕预试验处理后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法选取10名无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕,保存干燥时间分0．5h、1h、3h、6h、12h、24h六个实验组,并采用磁珠提取法、QIAcubeDNA提取纯化法、chelex-100提取法提取样本DNA,应用RT-PCR定量技术检测样本DNA含量,同时应用PCR-STR技术和Idfiler-plus试剂盒检测相应样本STR分型。结果联苯胺血痕预试验后处理样本,随保存时间的延长,其样本DNA含量显示逐渐降低的趋势。回归线性对数分析显示,磁珠提取法：Y=-0．40871n（x）＋0．7044R0—0．7633;QIAcubeDNA提取纯化法：Y=-0．23931n（x）＋0．4764R0—0．8715;chelex-100提取法：Y=-0．11781n（x）＋0．2302R2=0．9571。不同DNA提取方法对同一保存时间的联苯胺血痕预试验试剂处理样本DNA含量间差异有极显著性,P〈O．01。结论联苯胺血痕预试验后对后续STR分型影响较大,联苯胺血痕预实验后的血痕不能继续进行STR分型检测。     

法医DNA分型的可重复性

为了了解国内法医DNA分型的可靠性，选择酪氨酸羟化酶基因第1内含子什＂mantyrosinehydroxylasegene,intron1）的短串联重复序列（STR）TH01基因座为遗传标记，在国内5个法医实验室进行了DNA分型的可重复性研究，报道如下。材料与方法一、样本制备和分送国内5个法医实验室参加本次研究工作，由华西医科大学法医学系作为协调单位，负责制备与分送盲测样本。每个法医实验室4份样本，2份为纯化DNA，2份为血痕。血液样品采自成都地区无血缘关系汉族个体，常规方法提取DNA；血痕样本由另外两名个体新鲜血液0．5ml滴于滤纸上制成，室温晾干…     

用PCR扩增X-Y-特异片段性别鉴定的研究

采用5%Chelex-100处理方法提取 DNA,用 PCR 扩增 Amelogenin 基因片段检测血痕和毛根的性别。扩增一个样品只需1/10体积3mm~2血痕 Chelex-100处理液或1/10体积一根毛发 Chelex-100处理液(含模板 DNA)。100例血液样品结果显示,在男性可同时显现977bpX 特异片段和788bpY 特异片段,而在女性只观察到977bp X 特异片段,该方法用于性别鉴定可靠、灵敏、方便。     

基于年龄相关DNA甲基化位点推断河南汉族个体年龄

目的探查中国河南汉族个体与年龄相关的DNA甲基化位点,构建年龄推断模型,进行甲基化和年龄相关性分析。方法采用焦磷酸测序法对ELOVL2、ClOrf132、KLF14、TRIM59和FHL2基因的34个CG位点进行甲基化分析,利用SPSS 23软件的多元回归方法建立模型,对甲基化和年龄相关性做分析。结果除ClOrf132基因3个CG位点的甲基化水平与年龄呈负相关外,其余4个基因的31个CG位点甲基化水平均与年龄呈正相关。多元回归分析表明,年龄与CG位点的甲基化水平存在明显的线性关系,实际年龄与推断年龄偏差在5岁以内的准确度达80%以上。结论本研究构建的河南汉族个体年龄推断模型,有助于通过检测血液等组织的DNA甲基化水平推断个体的年龄范围,具有法医学应用前景。     

27个常染色体AIM-SNP的筛选和验证

目的构建27个常染色体AIM-SNP组合用于未知个体种族来源推断。方法通过对Hap Map数据库中描述祖先遗传信息标记的908个AIMs位点(非洲、欧洲、东亚人群)筛选,选出27个AIMs位点组合,利用相关软件同时与数据库908个AIMs不同子集合的分析进行对比,验证其推断祖先来源的可行性。结果应用本研究27个AIMs的SNP多态性分析方法可以正确推断未知样品祖先起源,估算祖先成分比例。结论本研究建立的常染色体27个AIMs的SNP多态性分析方法可准确推断来自于欧洲、非洲、东亚3大祖先血统个体的祖先来源,是SNP多态性分析用于个体种族来源推断的一种有效方法,在法医实践中可以用于DNA检验中未知DNA供者洲际人群祖先来源推断。     

利用耻骨MSCT三维重组技术推断成人活体年龄

目的建立基于成人耻骨MSCT三维重组推断活体年龄的方法,并验证其准确性与可靠性。方法收集300名年龄大于17岁的志愿受试者的耻骨联合面容积再现(volume rendering,VR)图像,对不同年龄段人群运用耻骨联合面推断年龄的方法和公式,对受试者的年龄进行推断。结果 300名受试者中,生物学年龄与实际年龄相差1岁以内的117例,相差1~2岁的178例,相差大于2岁的5例。结论 MSCT三维重组技术可以用于成人活体年龄的推断,推断结果准确性与可靠性较高。     

利用峰面积分析混合DNA样品

在法医DNA检验过程中，经常会遇到多个体的混合样本，如受害人和嫌疑人的混合样品，几个嫌疑人的混合样品。荧光标记自动分析STR系统，不仅能根据位点等位基因的个数判断样品是否为混合样品，而且还能根据等位基因峰面积(谱带荧光总强度)确定混合样品中各组分的混合比例，推断混合样品中各组分的基因分型。Gill等建立了利用峰面积分析混合样品的方法。本文利用该法对一宗案件中的混合样品进行了分析，推断混合样品各组分的比例及各组分的基因分型。     

利用峰面积分析混合DNA样品

在法医DNA检验过程中 ,经常会遇到多个体的混合样本 ,如受害人和嫌疑人的混合样品 ,几个嫌疑人的混合样品。荧光标记自动分析STR系统 ,不仅能根据位点等位基因的个数判断样品是否为混合样品 ,而且还能根据等位基因峰面积 (谱带荧光总强度 )确定混合样品中各组分的混合比例 ,推断混合样品中各组分的基因分型[1] 。Gill等建立了利用峰面积分析混合样品的方法[2 ] 。本文利用该法对一宗案件中的混合样品进行了分析 ,推断混合样品各组分的比例及各组分的基因分型。材料和方法2 0 0 1年于中山某地发生一宗强奸案 ,送检材料为事主血纱 ,嫌疑人 …     

血痕特异性mRNA标记研究

血痕是案发现场尤其是命案中比较常见的生物物证,而血痕的正确组织来源推断是当前鉴定工作中急需解决的问题。随着法医物证学的不断发展,以mRNA(messenger RNA)为基础的体液斑迹组织来源鉴定技术作为一种不同于传统血痕免疫学检测的新型方法,已经越加显示其独特的优越性。在该技术的基础上,实现共同提取生物物证的RNA与DNA的目标,建立体液斑迹鉴定与DNA分型兼容的方法,有利于现场重建,提高生物物证的证据效力,完善证据链。本研究建立了一个包括血痕总RNA提取、逆转录、荧光特异引物扩增、遗传分析仪电泳检测分析等步骤的血痕来源推断技术平台。实验共采集制备了40份的中国人群(女性)外周血、16份月经血样本,筛选了5个外周血标记:HBA、HBB、GYPA、SPTB、ALAS2,2个月经血标记:MMP7、MMP11,构建了一个囊括外周血、月经血特异标记的荧光复合扩增体系。结果显示mRNA技术为基础的鉴定血痕来源的方法是可行的,并且建立了血痕RNA检验的遗传分析仪结果判读方法。     

DNA甲基化与个体年龄的相关性研究进展

年龄推断在法医实践中占有重要的地位。分子生物学的巨大进展使得人们借助于生物学标记推断个体年龄成为可能。作为表观遗传学重要组成部分的DNA甲基化,在机体生长、发育、衰老的过程中存在着动态变化过程,通过检测DNA甲基化改变,有望构建与之相关的年龄变化模式,用以推断个体年龄。本文着重介绍DNA甲基化水平的改变与个体年龄的相关性及其在判断个体年龄方面的前景。     

STR基因座三带型等位基因的统计学分析

目的探讨STR基因座三带型等位基因的统计学方法。方法对8846份无关个体的静脉血或血痕样本利用磁珠法提取血液DNA，通过复合荧光扩增和毛细管电泳得到STR基因型，采用GeneMapperIDv3．2软件分析STR基因型，并通过直接计数法检测三带型基因型频率，公式计算三带型等位基因频率，并推导三带型统计学分析在亲缘鉴定及个体识别中的公式。结果8846份样本中，共检出4例三带型等位基因和3种三带型基因型。且发现等位基因基因频率的乘积与实际发生率差异具有统计学意义，并成功推导出三带型在亲缘鉴定及个体识别中的公式。结论三带型等位基因某两个等住基因作为整体在群体中遗传的频率可用这两个等位基因频率的乘积进行估算。     

PCR扩增ZFY/ZFX基因鉴定人类干血痕性别

应用 PCR 技术同时扩增人 ZFY 和 ZFX 基因特异的 DNA 序列,在男性血痕中可检测到两种扩增产物,即340bp 长的 ZFY 基因及488bp 长的 ZFX 基因特异 DNA 片段;在女性血痕中仅可检测到488bp 长的 ZFX 基因特异 DNA 片段,据此判定干血痕性别。干血痕的最小检出需要量为0.125μl 血液量的血痕。室温保存10年的血痕可以准确判定性别。ZFY 基因位于 Y 染色体短臂。本方法同时检测两条性染色体,可以避免由于扩增失败或 Y 染色体长臂变异出现的假阴性或假阳性。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳即可区分。     

DNA甲基化与年龄推断

年龄推断是法医学研究的重要内容。近年来表观遗传学研究发现,基因组DNA甲基化总体水平随年龄增加而降低,同时部分位点的甲基化水平却随年龄增加而升高。通过检测DNA甲基化水平,构建与之相关的年龄变化模型,可用于推断个体年龄。本文对DNA甲基化与个体年龄的相关性、适用于法医学领域的检测方法及其在法医学年龄推断方面的应用前景进行综述,希望能为相关研究和应用提供参考。     

DNA甲基化与个体年龄的相关性研究进展

年龄推断在法医实践中占有重要的地位。分子生物学的巨大进展使得人们借助于生物学标记推断个体年龄成为可能。作为表观遗传学重要组成部分的DNA甲基化，在机体生长、发育、衰老的过程中存在着动态变化过程．通过检测DNA甲基化改变，有望构建与之相关的年龄变化模式，用以推断个体年龄。本文着重介绍DNA甲基化水平的改变与个体年龄的相关性及其在判断个体年龄方面的前景。     

端粒DNA在法医学年龄推断中的应用

法医学中年龄推断的常用方法是对齿龄和骨龄进行推断,但这二种方法都受地理环境、营养状况、生活习惯、民族等因素的影响,尤其对成年人而言准确性会下降。随着对端粒研究的不断深入,已证实端粒DNA长度可反映细胞的分裂程度,代表细胞的生长寿命并与供体年龄有负相关性,因此测定端粒DNA长度有望成为法医学推断年龄有价值的新方法。