中国汉族人群的线粒体DNA控制区多态性研究

探讨mtDNA多态性在法庭科学中个体识别的理论基础。应用PCR扩增产物直接测序方法 ,对 111名中国北方地区汉族人群无血缘关系个体的mtDNA控制区 (HVⅠ和HVⅡ )进行测序分析。在高变区Ⅰ 15 998～ 16 40 0之间发现 10 2处碱基变异 ,10 3个mtDNA单倍型 ;在高变区Ⅱ 0 0 0 35～ 0 0 36 9之间的发现 36处碱基变异 ,6 9个mtDNA单倍型。其可变碱基的变异形式主要为碱基替代 (转换和颠换 )、插入和缺失 ;碱基转换 (78 9% )明显高于颠换(14 3% )、插入 (3 4% ) ,缺失 (3 4% )。分析表明 ,人群个体mtDNA控制区碱基序列 ,基因多样性为 99 9% ,两个无关个体的偶合概率为 0 92 % ,具有高度序列的多态性     

mtDNA—HVⅠ和细胞色素b片段的复合扩增及其法医学应用

目的探讨复合扩增mtDNA D环HV I和细胞色素b片段进行种属鉴定和个体识别的方法及mtDNA-HV I多态性。方法用两对引物同步扩增HV I片段与细胞色素b片段,银染显带检测扩增产物,ABI377测序仪及荧光测序技术分析扩增产物序列多态性。结果人类有279bp,358bp两条带,动物只有358bp一条带。通过对131例随机广东汉族人群个体进行mtDNA控制区(15997～16236))序列测定统计,得出此区域的序列多态性。共发现69个位点变异,平均每个个体存在2.679个碱基突变,检出67个单倍型,基因多样性为97.92％。结论mtDNA控制区(15997—16236)具有较高的序列多态性。为良好的个体识别标记。复合扩增mtDNA D环HV I与细胞色素b片段进行测序分析可以同步进行种属鉴定和个体识别。     

中国汉族人mtDNA控制区异质性遗传规律

目的探讨中国汉族人mtDNA控制区异质性分布情况和遗传规律。方法将人mtDNA控制区扩增成6个部分互相重叠的片段,利用已建立的DHPLC技术分析其异质性规律。结果对150例汉族无关个体的多种组织检测,发现异质性个体的发生率达34%(51/150);个体的组织mtDNA异质性检出率最高为脑(50/150)、心肌(48/150)、最低为骨骼(22/150);本组共发现mtDNA控制区异质性位点有36个;同一个体可有多个异质性位点,最多的不超过3个;未发现异质性发生率有性别差异;超过41岁的高年龄组的异质性发生率(27/59)高于低年龄组(24/91);同一个体在2年前后取的血样,异质性检测结果一致;同一母系不同成员的异质性位点相同,但异质性mtDNA的含量有差异。结论DHPLC检测mtDNA控制区异质性具有高分辩力;mtDNA控制区异质性在中国汉族人中广泛存在;上述结果可作为mtDNA控制区多态性作个人认定和亲权鉴定的指导性资料。     

人与动物mtDNA细胞色素b基因的序列差异

目的 探讨人与动物之间mtDNA细胞色素b(Cyt-b)基因序列差异及其种属鉴定。方法 采用1对Cyt-b基因通用引物对人和19种动物共171例样本的mtDNA进行PCR扩增,琼脂糖凝胶检测扩增产物,ABI 377测序仪及荧光测序技术分析扩增产物的DNA序列。结果 所有样本均检测到1条358bp的扩增片段;任何两种动物扩增片段的序列都不相同,人与19种动物的序列差异在18.9％-30.0％,19种动物之间的序列差异在5.9％-32.9％。同种动物不同个体间只有人、驴及小白鼠存在变异,最多有4个碱基变异位点(1.3％),其它动物未发现种内变异。结论 人与不同种动物的Cyt-b基因序列存在差异,以此可区分不同种属的动物。     

基于Ion Torrent PGM~(TM)测序系统的人mtDNA全测序分析

目的应用Ion Torrent PGM~(TM)测序系统对人线粒体DNA(mitochondria DNA,mtDNA)全序列进行分析检测,研究不同组织间mt DNA序列差异情况。方法通过法医尸体检验采集6名无关个体的组织样本,包括胸腔血液、头发、肋软骨、指甲、骨骼肌和口腔上皮。使用4对引物对线粒体全序列进行扩增,应用Ion Shear~(TM)Plus Reagents试剂盒和Ion Plus Fragment Library试剂盒等构建文库,并在Ion Torrent PGM~(TM)测序系统上进行线粒体基因组全序列测序,并针对异质性位点和在HVⅠ区域突变位点,进行Sanger测序验证。结果所有样本的全基因组mtDNA都扩增成功,6名无关个体分属于6种不同的单倍型,同一个体不同组织之间mtDNA存在异质性差异。异质性位点和HVⅠ区域突变位点采用Sanger测序结果均得到验证。通过Kappa统计方法进行一致性检验后发现,相同个体不同组织的mtDNA序列检验结果仍具有较好的一致性。结论本研究所采用的人线粒体基因组全序列的测序检验方法,可以检测出同一个体不同组织间mtDNA的异质性差异,该差异具有较高的一致性,该结果对mtDNA在法庭科学中的应用具有指导作用。     

中国广东汉族群体mtDNA控制区的多态性

目的 探讨线粒体DNA控制区(包括HVⅠ区、HVⅡ区和HVⅢ区)的多态性。方法 采用PCR扩增和末端标记荧光循环测序的方法，对100名广东汉族无关个体进行了序列分析。结果 共观察到147个变异位点，序列变异包括了碱基转换、颠换、插入、缺失等各种类型。其中在HV Ⅰ区(nt16，024～nt16，365)内观察到88个变异位点，91种单倍型，基因多样度为0.9964；在HVⅡ区(nt73～nt340)观察到42个变异位点，67种单倍型，基因多样度为0.9861；在HVⅢ区(nt438～nt574)观察到9个变异位点，15种单倍型，基因多样度为0.8760。联合3个高变区域的序列，可观察到98种单倍型，基因多样度为0.9996。结论 本研究为线粒体DNA在法庭科学中的应用提供了较系统的实验依据。结果还表明，对于mtDNA等单倍型遗传标记，增加其检测范围，可提高该系统的个体识别能力，使其在法庭科学领域充分发挥作用。     

线粒体DNA编码区的多态性

目的研究线粒体DNA(mtDNA)编码区单核苷酸多态性,建立mtDNA编码区多态性在法庭科学中应用的理论基础。方法针对mtDNA编码区nt8162-8483以及nt13070-13299两段序列设计引物,应用直接测序技术研究其多态性。结果两对引物扩增片段长分别为322bp和230bp,共检测到21种变异,24种单倍型,基因多样性为0.7511,两个无关个体的偶合概率为0.2564。结论线粒体DNA编码区多态性位点作为线粒体DNA控制区多态性位点的补充,联合应用可以提高线粒体DNA在法医学应用中的个体识别能力。     

应用HID Ion GeneStudioTM S5测序系统探讨毛干样本线粒体DNA异质性

目的应用HID Ion GeneStudio^TM S5测序系统对毛干样本线粒体全基因组分型结果的异质性进行探讨。方法采集8名无关个体的口腔拭子、血液及同一个体不同部位毛干样本,使用Precision ID mtDNA Whole Genome Panel对线粒体全基因组进行扩增,应用HID Ion GeneStudio^TM S5测序系统对线粒体全基因组进行分析检测。结果2名个体的颞部毛干样本线粒体DNA出现异质性,其余6名无关个体的口腔拭子、血液及不同部位毛干样本的线粒体全基因组分型结果均一致。8名无关个体共观察到119个碱基变异,个体的变异位点数目分别为29、40、38、35、13、36、40和35。结论应用HID Ion GeneStudio^TM S5测序系统可全面了解序列多态性。     

mtDNA异质性在法医检验中的应用价值

<正> 在一个个体内,各种组织器官及其同一组织的各个线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)序列一致。如果一个个体表现为2种以上的mtDNA序列,则称为该个体mtDNA存在异质性(heteroplas—my)[1,2]。Gill在对疑为俄国沙皇尼古拉二世的遗骸进行mtDNA序列分析时,检测了740个碱基,在16169处发现mtDNA异质性;对其兄弟遗骸测序,     

人类mtDNA控制区异质性

目的观察mtDNA的点突变异质性和长度异质性。方法运用直接测序法对50名无关个体及16名母系家族成员的血液、口腔上皮细胞、头发的mtDNAHVI、HVII区序列进行分析,并对20例HVI区直接测序失败的无关个体进行克隆后测序分析。结果同一个体的三种检材样本及16名母系家族成员的序列一致,未见异质性存在;同一个体的不同克隆的C延伸区的长度有差异,存在长度异质性。但同一个体的血液和头发具有相似的长度变异类型,即长度异质性在组织间无差异。结论mtDNA碱基序列具有同质性及稳定性,适用于法医学检案。     

Unusual sources of Sn in GSR. An experimental study by SEM and IBA

Gunshot Residue (GSR) produced by the discharge of a firearm often provides very useful information in criminal investigations in cases involving the use of firearms. Scanning Electron Microscopy equipped with an Energy Dispersive X-ray Spectrometer (SEM-EDS) is typically used worldwide to visualize micrometric particles constituting GSR and to analyse their elemental composition. The 2017 ASTM Standard guide for gunshot residue analysis by scanning electron microscopy/energy dispersive X-ray spectroscopy specifies that “Particles classified as characteristic of GSR will have one of the following elemental compositions: Lead, antimony, barium; Lead, barium, calcium, silicon, tin”. For the first time, the presence of an additional element, such as Sn, plays a key role in ASTM particle classification. It is known that some ammunitions, used for pistols, revolvers and rifles, contain tin foil discs for sealing the primer mixture into the cup, resulting in GSR particles containing Sn. The authors faced some cases in which Sn was unexpectedly found in GSR particles from a 0.22 Long Rifle derringer and from some 12 gauge shotguns. No tin foil discs are used in rimfire ammunitions and there is no published evidence of tin foil discs in shotshell ammunitions. Following a “case by case” approach, experimental research has been carried out to explain how Sn can be present in GSR particles when the last discharged cartridge also does not contain any Sn either in components and in the explosive charges.Moreover, the use of Particle Induced X-ray Emission (PIXE) showed the capability to overcome overlap ambiguity of Sb and Sn peaks in the X-ray spectra, being a possible key issue in real shooting cases if Sn quantities are below the lower limit of SEM detection, especially when Sb is also present.     

血中毒鼠强的固相萃取和GC-NPD法测定

目的 研究人全血中毒鼠强的固相革取(SPE)。方法 用Bond Elute C18固相萃取柱萃取,GC-NPD检测,以甲基对硫磷为色谱内标(CS)。结果 全血中加标0.5μg/ml,毒鼠强回收率为92.5％,变异系数2.3％(CV,n=4)。在0.5～10μg/ml的浓度范围内,线性相关系数为0.9994。检出限(S/N=3)和定量限(S/N=10)分别为6ng/ml和20ng/ml。同一根萃取柱连续使用6次未见性能明显下降(CV=3.6%)。结论 本文方法适用于毒鼠强中毒的全血测定。     

实验性兔羊水栓塞血浆NO和ET的含量变化

目的观察兔羊水栓塞(AFE)后血浆一氧化氮(NO)、内皮素(ET)含量的动态变化。方法采用怀孕家兔制作羊水栓塞动物模型,将不同性质的自身羊水注入兔血循环,分别在羊水注入前、注入后5min、45min从兔心脏取血,用镉还原法、放射免疫分析(RIA)法分别检测血浆中NO和ET的动态变化。结果注入羊水后ET含量显著增加,NO含量则显著降低,对照组无显著变化。NO与ET含量变化呈显著负相关。结论NO、ET的动态变化在羊水栓塞早期的一过性肺动脉高压及随后发生的DIC等过程中起重要作用。     

“法”义新论

"法"在字源和词源上有三个系统,即灋、佱、。许慎在《说文》中仅以战国篆文为据,未能考察商至战国前期文字发展的理路,对"灋"的词源解释有误。廌与作为神兽的獬豸有差异,并无掌法神兽之义。灋字在西周时代作为"废"的本字使用,与后世的"法"义并无关联。宗周文化系统中有一个表规范、法则意义的"佱"字;南方文化中有一个表达规范、法则、效法甚至法律的"",因此在先秦时代有宗周的"佱"和南方的""两个与后世"法"有渊源关系的概念系统。这两个系统在春秋中叶至战国时代发生碰撞、融合,最终以""吸纳并取代"佱",并写作"灋"为终结。具有"刑罚"、"审判"之义的"法",通过"灋"的字源和词源无法解释,而当与宗周文化系统之外的南方文化中的系统有关。     

Evaluation of genetic markers for the analysis of THC levels of Cannabis sativa samples using principal component analysis – A preliminary study

Cannabis sativa is a worldwide commercial plant used for medicinal purposes, food and fiber production, and also as a recreational drug. Therefore, the identification and differentiation between legal and illegal C. sativa is of great importance for forensic investigations. In this study, principal component analysis (PCA), an exploratory data analysis technique, was tested to correlate the specific genotype with the concentration of tetrahydrocannabinol (THC) in the samples. C. sativa samples were obtained from legal growers in Piedmont, Italy, and from illegal drug seizures in the Turin region. DNA was extracted, quantified, amplified with a 13-loci multiplex STR and finally analyzed with an automated sequencer. The results showed a trend in the analyzed samples as they differed by their THC content and allele profiles. PCA yielded two clusters of samples that differed by specific allele profiles and THC concentrations. Further validation studies are needed, but this study could provide a new approach to forensic investigation and be a valuable aid to law enforcement in significant marijuana seizures or in tracing illicit drug trafficking routes.     

Post-mortem interval estimation using miRNAs of road traffic accident cases: A forensic molecular approach

In forensic examination accurate estimation of post-mortem interval (PMI) is a challenging task, particularly in the advanced stages of decomposition. The existing methods (algor mortis, livor mortis, rigor mortis, putrefaction etc) used for estimating PMI rely on analyzing the physical, biochemical, and metabolic changes that occur in the corpse after death. While these methods have shown some level of effectiveness in estimating PMI during the early stages of decomposition, accurate estimation becomes increasingly challenging during the later stages of putrefaction when the body undergoes significant changes. Recently, microRNA (miRNA) profiling due to its relatively small size and stability has emerged as a promising tool in several areas of forensics. This study demonstrates the potential of miRNA for PMI estimation in advanced stages of death. In this study, miRNA-195, miRNA-206, and miRNA-378 were selected as target miRNAs and miRNA-1 as reference miRNA. Left ventricle tissue (5 g) of the heart from 20 forensic autopsies of traffic accident victims (18–32 years) were collected and processed. The samples were held at room temperature for eight different time intervals (12, 24, 48, 72, 96, 120, 168 and 196 h), and RNA was extracted from all the samples using Trizol-based RNA isolation protocol, followed by cDNA synthesis and amplification with commercially available specific miRNA probes in Real-Time PCR (RT-PCR), Ct was calculated. The result showed that miRNAs were associated with PMI. Over time, there were substantial changes in the Ct values of all three miRNAs, with significant reductions observed at 196 h compared to 12 h. miRNA-206 demonstrated significant changes at multiple time intervals, while miRNA-1 remained stable for up to 196 h and thus holds caas an endogenous marker. In conclusion, miRNA has the potential to serve as a valuable tool for estimating PMI, especially during the advanced stages of decomposition, when used in conjunction with established techniques. However, further validation of the study is required to obtain more accurate estimates of PMI.     

“法”古文拾零

战国六国文字,即“古文”。楚简中的“佱”、“灋”、“廌”三个字,就是古文“法”字。运用郭店简、上博简、包山简以及金文中的材料,对照传世文献,分别对三个古文“法”字进行考释,从而提出了一个值得大家思考的课题：探求“法”字的来龙去脉,关乎“法”的渊源及其演变历程,关乎我国早期“法”概念形成脉络的把握。     

心肌及传导组织内3种蛋白的变化与SMDS的相关性

目的 观察心肌及传导组织内肌动蛋白、血浆白蛋白及纤维连接蛋白的染色变化，探讨青壮年猝死综合征(SMDS)死后诊断的新方法。方法 应用免疫组化S-P法，对SMDS及冠心病猝死者心肌及传导系统内肌动蛋白、血浆白蛋白和纤维连接蛋白的进行染色观察。结果 22例SMDS例猝死者心肌及传导系统内的肌动蛋白缺染17例；血浆白蛋白染色阳性18例；纤维连接蛋白染色阳性15例。并发现在SMDS中，8例有CCS严重病变。结论 心肌及传导系统内血浆蛋白、肌动蛋白改变与SMDS密切相关，部分SMDS病例死前存在早期心肌缺血或梗死的改变。     

御史纠弹:唐代官吏犯罪的侦控程序考辨

御史纠弹是唐朝追诉官吏犯罪的程序。“纠察”为调查程序 ,指御史依职权对中央和地方的各级官吏的各项职事进行主动监督 ,以发现犯罪并进行调查。“弹奏”为控诉程序 ,指御史将其所发现并已核实的案件事实直接向最高统治者提起弹劾。纠与弹是相互联系的两个阶段 ,前者是手段 ,后者是目的。御史纠弹制度中的一些合理设置 ,可为当今追诉职务犯罪的制度建设提供史鉴.     

化学显色法快速筛选饮料及尿液中γ-羟基丁酸和γ-丁内酯

目的建立化学显色法快速筛选饮料及尿液中γ-羟基丁酸(GHB)及其前体γ-丁内酯(GBL)的方法。方法在酸性条件下GHB转化为GBL,GBL和盐酸羟胺在碱性条件下生成γ-羟基丁酰羟胺,γ-羟基丁酰羟胺在酸性条件下和三氯化铁反应,生成紫红色的络合物。结果饮料中GHB最低检出浓度为0.5～2mg/mL,低于常见滥用质量浓度。该方法也可以用于尿液分析,最低检出质量浓度为0.5mg/mL。考察了常见有机溶剂和麻醉镇静药物的干扰。结论该方法简单、安全、快速,为临床和法庭科学实验室快速筛选GHB和GBL提供了便利。