分泌抗人红细胞膜单克隆抗体细胞株的建立

以人的红细胞膜为抗原，采用选择性免疫抑制的程序，免疫BALB／C小鼠。经免疫的小鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用血凝法筛选出3株分泌抗人红细胞膜种属特异性单克隆抗体的杂交瘤，即M1A7C4．M3A5B7和M3D9F1。连续传代2个月及复苏冻存半年的杂交瘤，仍能稳定地分泌抗人红细胞膜单克隆抗体。初步鉴定证明：该抗体具有稳定的种属特异性，可鉴别人与其它动物，特别是猴的红细胞，不与己知的血型特异性成分交叉，可凝集成人及脐带血的红细胞。     

单克隆抗M、抗N抗体的研制及初步应用

用人血型糖蛋白 A 和人红细胞分别免疫 BALB/C 小鼠。用被免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞融合,在37℃、5%二氧化碳培养箱中孵育10～15天,然后用 OM 和 ON 型指示红细胞分别检测培养上清液的凝集情况,筛选出能分泌高特异性和高效价抗 M 和抗 N 抗体的细胞株,并建立了 GM_4H3、GM_4H_4、N_2A_3和 N_2D_(10)细胞株。这些细胞株可持续分泌免疫球蛋白 G 类抗 M、抗 N 抗体。应用这些抗体,通过血凝法、解离法和 ELISA 斑点法,可进行血及血痕的 MN 分型。在血型检验中,优于多克隆抗 M、抗N 血清。     

单克隆抗A、抗B、抗H指示红细胞的研制及应用

<正> 本文报道根据反向间接血凝(RPHA)原理,用单克隆抗A、抗B、抗H抗体分别在合适的pH值醋酸盐缓冲液中,致敏醛化人“O”型红细胞,制得单克隆抗A、抗B、抗H指示红细胞。用来检验人体液斑的ABH血型物质。单克隆抗A、抗B、抗H指示红细胞对相应分泌型人唾液的凝集效价为8192倍、4096倍     

抗人A型红细胞单克隆抗体的研制及初步应用

本研究在用人A型红细胞悬液免疫BaIb/C小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞融合屡次失败的情况下,改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合,终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株:3B_2、2H_2、8C_3细胞株。这些杂交瘤细胞可持续分泌抗A单克隆IgM类抗体。     

成人肾脏ABO组织血型1-4型糖链H物质的分布

目的观察1型H、2型H及3/4型H糖链在成人肾组织中的分布及其与分泌状态的关系。方法 应用抗ABO抗体及3种糖链特异的单克隆抗H抗体的免疫组织化学方法,检查分泌型与非分泌型个体肾组织中相应抗原物质的分布。结果 在分泌型和非分泌型人的肾远曲小管均表达2型H和3/4型H物质,1型H和3/4型H物质只在分泌型人肾集合管表达,在非分泌型人中不表达。另外集合管的2型H物质的表达与分泌状态无关。结论 人肾组织有ABH物质的表达,不同肾组织细胞表达的H物质结构差异与AB0型分泌状态有关。     

抗人精特异性单克隆抗体的制备及初步鉴定

用正常人精液免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP_2/O融合,得到6株分泌抗人精液单抗的杂交瘤。对其中一株命名为A_(10)C_6的杂交瘤特性,用免疫双扩散鉴定为IgG_1亚类,免疫组化证实它主要作用于人精子,ELISA(双抗体夹心法)证实它只与人精液起反应,而对牛、猪精液,人乳及A、B、O红细胞表面抗原物不起反应,证明它具有较高的特异性,有一定的应用价值。     

免疫抗A、抗B、抗H沉淀素血清的制备

本文介绍了用浓缩的分泌型人唾液免疫鸡,经吸收精制获得鸡抗A、抗B、抗H沉淀素血清的方法。用本法制备的抗血清,对相应血型人唾液的特异性沉淀价可达1:512倍以上,对非相应血型者的分泌液不出现非特异性沉淀反应。应用该血清进行环状沉淀试验、单向琼脂扩散试验等免疫学试验,可简便、准确地鉴定人唾液斑、精液斑等分泌液斑的ABO血型。     

单克隆抗M、抗N抗体的制备和应用

<正> 把用生理盐水洗涤5次的新鲜人ON型红细胞和纯化的血型糖蛋白A分别免疫BALB/C小鼠,用免疫的脾细胞同SPZ/O骨髓瘤细胞进行融合。37℃培养10～15天后,用ON型和OM型红细胞检测每个培养孔里培养基上清的凝集情况,建立了分泌高特异性和高效价的抗M和     

用浓缩唾液制备抗A、抗B血清的吸收精制方法

<正> 用浓缩1/2容量的ASe和BSe人唾液,采用多用途、多部位,并逐渐增大剂量的方法免疫大耳白兔,每4次为一个免疫程,可制备出1024倍以上的抗A、抗B血清.但所得抗血清除有抗A、抗B凝集素外,还含有大量与各型红细胞发生凝集的非特异性凝集素.经反复试验,先用人血粉吸收,然后用少量唾液吸收,可以除去非特异性凝集素,制备出特异性好的抗A、抗B血清,具体方法如下.     

抗人同种异型G2m(23)单克隆抗体研制及特异性鉴定

本文用快速液相色谱（FPLC）从G2m（23）阳性人血浆中纯化出IgG2蛋白，免疫BALB/c小鼠，建立了一株分泌抗人G2m（23）单克隆抗体的细胞株，定名为2G8。经抑制ELISA，双抗体ELISA及斑点ELISA分析，证明2G8抗体具有G2m（23）单一特异性。     

分泌抗人类血型-H抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株建立及初步应用

应用杂交瘤技术,建立了两株分泌抗 H 的单克隆抗体细胞株 H_(2-6)H_8和 B_(2-5)D_9。经体外培养半年以上,生物学性状稳定。两株细胞分泌的抗体属 IgM 类,特异性识别 H 型物质,与几种常见动物的红细胞无交叉反应。培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达1024倍和1.28×10~5倍,可用在中和试验、免疫斑点法中,在实际办案中应用理想。     

抗人同种异型G1m(3)单克隆抗体研制及特异性鉴定

用快速液相色谱仪从G1m（3）阳性人血浆中纯化IgG1蛋白，用其免疫BALB／C／小鼠．建立了一株分泌抗人G1m（3）单克隆抗体的细胞株（D7E8）。经抑制ELISA，直接ELISA及斑点ELISA分析，证明D7E8抗体具有G1m（3）单一特异性。其培养上清液效价为512倍，并初步应用于法医办案。     

巴比妥单克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定

目的建立抗巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备抗巴比妥单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法将巴比妥分子环状丙二酰脲环上氨基引入活性羧基,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,得到完全抗原BAR-KLH和BAR-BSA,并用紫外分光光度计鉴定。用BAR-KLH免疫Balb/C小鼠,利用细胞融合技术建立稳定分泌抗巴比妥单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备巴比妥单克隆抗体,饱和硫酸铵法、亲和层析法纯化,并进行免疫学特性鉴定。结果完全抗原偶联成功,其偶联率为30∶1;筛选出1株杂交瘤细胞命名为5C6,其产生的单抗效价为1∶6.4×104,属于IgG1/kappa,抗体亲和力常数为2.27×108L/moL。纯化后的巴比妥单克隆抗体用ELISA法检测其灵敏度为130ng/mL,并与其他7种镇静催眠类药物交叉反应率小于1%。结论本研究制备的杂交瘤细胞株5C6分泌的抗体具有高特异性和灵敏度。     

高特异性三唑仑代谢物单克隆抗体的制备

目的建立分泌抗三唑仑代谢物α-羟基三唑仑单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备高特异性的三唑仑代谢物单克隆抗体,为三唑仑及其代谢物免疫分析方法的开发奠定基础。方法在三唑仑分子的6位苯环对位上引入活性氨基基团,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)相偶联形成完全抗原。以三唑仑-KLH免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,筛选等杂交瘤技术建立稳定的分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。纯化后的单克隆抗体,分别用SDS-PAGE电泳法、间接ELISA法和胶体金免疫层析法对其纯度、效价及灵敏度和特异性进行测定。结果获得3株能稳定分泌三唑仑代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2G4,4B2和5H6。2G4和4B2抗体只与三唑仑代谢物α-羟基三唑仑有反应,灵敏度分别为500ng/mL和750ng/mL。与其他参试物无交叉反应。因5H6抗体为IgM,考虑到纯化难度和实际应用的限制,暂未做深入研究。结论本研究制备的2G4和4B2单克隆抗体仅识别三唑仑代谢物α-羟基三唑仑,具有高度特异性和灵敏度。     

抗丁丙诺啡单克隆抗体的制备

目的建立抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备高特异性的丁丙诺啡单克隆抗体，并对其免疫学特性进行鉴定。方法在丁丙诺啡的分子上连接活性羧基基团，通过缩合反应将丁丙诺啡半抗原连接于血蓝蛋白（KLH）和小牛血清白蛋白（BSA），形成完全抗原。以完全抗原免疫Balb／c小鼠，通过细胞融合，筛选等杂交瘤技术，建立稳定的分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过腹腔注射杂交瘤细胞，诱导小鼠产生含有单抗的腹水。用辛酸-硫酸铵加亲和层析法纯化抗丁丙诺啡单克隆抗体。采用酶联免疫反应和胶体金膜层析实验测定丁丙诺啡单抗的特异性以及免疫反应动力学参数。结果共获得3株分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为7E6，6G4和3C2。7E6，6G4抗体灵敏度为10．0ng／ml，3C2抗体灵敏度为20．0ng／ml。7E6，6CA和3C2抗体的亲和常数分别为3．6×10^-9 mol／L，4．3×10^-9 mol／L和6．3×10^-9 mol／L。特异性测试结果表明7E6和6G4抗体与40种药物、毒品无任何交叉反应，而3C2抗体与吗啡有交叉反应。结论杂交瘤细胞株7E6和6G4产生的抗丁丙诺啡单克隆抗体具有很高的特异性和灵敏度。     

分泌抗人精液特异蛋白P_(30)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

作者通过杂交瘤技术建立了9株产生抗精浆特异蛋白 P_(30) 单克隆抗体的杂交瘤细胞系。它们是由 SP2/0骨髓瘤与经 P_(30) 免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞按常规方法进行细胞融合、并经克隆化筛选得出.这些细胞株均经体外培养3个月以上能够稳定分泌抗 P_(30) 单克隆抗体。该抗体只能识别纯化的 P_(30) 和精液中的 P_(30) ;与人精液以外的其他体液和多种人体组织无交叉反应;与几种常见动物的精液和血液无交叉反应。这些 P_(30) 单克隆抗体均属 IgG 类和 IgG_1亚类。其培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达到320和128,000。以 ELISA 法应用这些单克隆抗体能很好地鉴定精液和精斑。     

分泌抗人精子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

建立两株分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株G_8与E_(10),采用洗涤人精子免疫Balb/c小鼠,取免疫脾与Balb/c小鼠的Sp2/0骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞诱生腹水的方法。Elisa,IIF或酶标抗体免疫组化法结果发现,G_8与E_(10)单抗与人精子(射出精子、睾丸、副睾管及输精管中的精子)及睾丸各级生殖细胞均发生反应;与人甲状腺上皮细胞、肾小管上皮细胞、胰腺导管上皮细胞以及胰岛均发生不同程度的交叉反应,与其他33种人体正常组织、9种人体液与分泌液、8种不同种族的动物精子均不发生交叉反应,说明在一般情况下这两种抗体可用于鉴定人类的精液斑以及精液与阴道分泌液的混合斑。两种单抗与人精子的顶体部、赤道部、后核帽、颈部及中段结合,证明精子特异性表面抗原分布于这几个区域。两种抗体均属IgG_1,G_8与E_(10)抗体的效价分别为1:512与1:1024。     

抗人N单克隆抗体的制备及其特性的研究

用ON型人红细胞免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得分泌IgM类抗人N单克隆抗体杂交瘤细胞株(ON_1D_3)。其培养上清液抗体效价为128～256,诱生小鼠腹水的抗体效价为8192;与Panel A红细胞反应呈抗N特异性;检测273名成人红细胞,只特异性凝集N(?)MN型人红细胞,不凝集M型红细胞。与猴等9种动物红细胞无交叉反应;酶修饰试验结果表明,ON_1D_3识别的抗原决定簇是唾液酸依赖性的。