共查询到20条相似文献,搜索用时 265 毫秒
1.
2.
抗丁丙诺啡单克隆抗体的制备 总被引:2,自引:2,他引:0
目的建立抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备高特异性的丁丙诺啡单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法在丁丙诺啡的分子上连接活性羧基基团,通过缩合反应将丁丙诺啡半抗原连接于血蓝蛋白(KLH)和小牛血清白蛋白(BSA),形成完全抗原。以完全抗原免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,筛选等杂交瘤技术,建立稳定的分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过腹腔注射杂交瘤细胞,诱导小鼠产生含有单抗的腹水。用辛酸-硫酸铵加亲和层析法纯化抗丁丙诺啡单克隆抗体。采用酶联免疫反应和胶体金膜层析实验测定丁丙诺啡单抗的特异性以及免疫反应动力学参数。结果共获得3株分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为7E6,6G4和3C2。7E6,6G4抗体灵敏度为10.0ng/ml,3C2抗体灵敏度为20.0ng/ml。7E6,6CA和3C2抗体的亲和常数分别为3.6×10^-9 mol/L,4.3×10^-9 mol/L和6.3×10^-9 mol/L。特异性测试结果表明7E6和6G4抗体与40种药物、毒品无任何交叉反应,而3C2抗体与吗啡有交叉反应。结论杂交瘤细胞株7E6和6G4产生的抗丁丙诺啡单克隆抗体具有很高的特异性和灵敏度。 相似文献
3.
4.
目的建立分泌抗三唑仑代谢物α-羟基三唑仑单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备高特异性的三唑仑代谢物单克隆抗体,为三唑仑及其代谢物免疫分析方法的开发奠定基础。方法在三唑仑分子的6位苯环对位上引入活性氨基基团,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)相偶联形成完全抗原。以三唑仑-KLH免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,筛选等杂交瘤技术建立稳定的分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。纯化后的单克隆抗体,分别用SDS-PAGE电泳法、间接ELISA法和胶体金免疫层析法对其纯度、效价及灵敏度和特异性进行测定。结果获得3株能稳定分泌三唑仑代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2G4,4B2和5H6。2G4和4B2抗体只与三唑仑代谢物α-羟基三唑仑有反应,灵敏度分别为500ng/mL和750ng/mL。与其他参试物无交叉反应。因5H6抗体为IgM,考虑到纯化难度和实际应用的限制,暂未做深入研究。结论本研究制备的2G4和4B2单克隆抗体仅识别三唑仑代谢物α-羟基三唑仑,具有高度特异性和灵敏度。 相似文献
5.
抗人血红蛋白胶体金检测试剂条的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
目的制备法医学检验所用的确定人血的免疫胶体金层析试剂条。方法选取抗人血红蛋白单克隆细胞株,制备其小鼠腹水,从腹水中纯化出单克隆抗体。制备胶体金并用一纯化的单克隆抗体包被,制成免疫胶体金。取玻璃纤维以免疫胶体金浸泡,烘干。在一硝酸纤维素膜上两个不同位置分别点加另一抗人血红蛋白抗体和羊抗鼠IgG。搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性。结果制成的免疫胶体金试剂条可对稀释至20万倍的人血红蛋白溶液显示阳性,对法医学检验常见8种动物的血溶液显示阴性。结论所制备抗人血红蛋白胶体金试剂条可以应用于法医学检验。 相似文献
6.
检验人精浆特异蛋白P30免疫胶体金试剂条的研制 总被引:2,自引:0,他引:2
目的制备用于检验人精浆特异蛋白P30-主要是来自法医学案件的免疫胶体金层析试剂条.方法选取针对不同抗原决定簇的抗P30单克隆抗体细胞株,并制备其小鼠腹水,分离纯化单克隆抗体.制备胶体金并以纯化抗体包被,制成免疫胶体金,以免疫胶体金浸泡玻璃纤维.选取适宜的硝酸纤维素膜并于其上不同位置以未金标的另一株P30单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被.搭建试剂条并检测其灵敏度和特异性.结果所制成的试剂条灵敏度至少可达4ng/ml;对6人份混合的人精液物质在稀释20万倍后仍出阳性结果,且无非特异性反应.结论检验人精浆特异蛋白P30的免疫胶体金试剂条可对嫌疑人精物质做出排查,有利于法医物证检验. 相似文献
7.
8.
9.
人类免疫球蛋白IgG在体内一般作为抗体发挥作用,可与相应的抗原特异性结合。同时IgG又具有抗原特异性,可以用血清学方法检出[1],因此在法医物证学的种属检验中具有重要的意义。目前有关的报道都是与疾病相关的抗人免疫球蛋白IgG的制备,而正常人的免疫球蛋白IgG制备的报道则很少。国内法医物证检案中多用传统的抗人血清作为种属鉴定的方法。本研究用杂交瘤技术研制出人IgG单克隆抗体和建立的相应检测方法,为法医物证检案提供了新的试剂和方法。1材料和方法1.三材料多人份10%IgG溶液及新鲜血浆20份由北京市红十字血液中心购进。多… 相似文献
10.
11.
12.
巴比妥单克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
目的建立抗巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备抗巴比妥单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法将巴比妥分子环状丙二酰脲环上氨基引入活性羧基,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,得到完全抗原BAR-KLH和BAR-BSA,并用紫外分光光度计鉴定。用BAR-KLH免疫Balb/C小鼠,利用细胞融合技术建立稳定分泌抗巴比妥单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备巴比妥单克隆抗体,饱和硫酸铵法、亲和层析法纯化,并进行免疫学特性鉴定。结果完全抗原偶联成功,其偶联率为30∶1;筛选出1株杂交瘤细胞命名为5C6,其产生的单抗效价为1∶6.4×104,属于IgG1/kappa,抗体亲和力常数为2.27×108L/moL。纯化后的巴比妥单克隆抗体用ELISA法检测其灵敏度为130ng/mL,并与其他7种镇静催眠类药物交叉反应率小于1%。结论本研究制备的杂交瘤细胞株5C6分泌的抗体具有高特异性和灵敏度。 相似文献
13.
目的利用蛋白检测的快速性优势,研究不同性别在SMCY抗原氨基酸序列的差异,筛选出特异性氨基酸序列,并克隆表达性别特异融合抗原,制备相应抗体,建立一种快速鉴别法医物证性别的方法。方法通过对人SMCY和SMCX进行序列分析,发现了三段差异片段,采用搭桥PCR方法获得差异片段全长基因,连接入p ET-28a载体进行原核表达,用Ni柱纯化后的性别特异融合抗原免疫制备多克隆抗体,用ELISA法和western blot检测SMCY多抗与抗原的反应特异性,制作胶体金试纸条检测样本。结果筛选出具有性别特异性的氨基酸序列,获得SMCY性别特异融合抗原,成功制备出多克隆抗体及胶体金试纸条。结论获得SMCY性别特异融合抗原具有很好的抗原活性,制备的多克隆抗体可以与抗原特异性地结合,用于性别鉴定。 相似文献
14.
15.
分泌抗人精液特异蛋白P_(30)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
作者通过杂交瘤技术建立了9株产生抗精浆特异蛋白 P_(30) 单克隆抗体的杂交瘤细胞系。它们是由 SP2/0骨髓瘤与经 P_(30) 免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞按常规方法进行细胞融合、并经克隆化筛选得出.这些细胞株均经体外培养3个月以上能够稳定分泌抗 P_(30) 单克隆抗体。该抗体只能识别纯化的 P_(30) 和精液中的 P_(30) ;与人精液以外的其他体液和多种人体组织无交叉反应;与几种常见动物的精液和血液无交叉反应。这些 P_(30) 单克隆抗体均属 IgG 类和 IgG_1亚类。其培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达到320和128,000。以 ELISA 法应用这些单克隆抗体能很好地鉴定精液和精斑。 相似文献
16.
17.
18.
法医学血痕种属检验的方法很多,如环状沉淀试验,琼脂糖单扩散试验以及对流免疫电泳试验等。这些方法操作简便,但灵敏度低,易受血痕所附着的客体以及化学合成物等因素的干扰。笔者参照文献[1]介绍的方法,用酶标抗人Hb单克隆抗体检测微量血痕种属,取得良好的效果,现报道如下。材料与方法一、材料酶标扰人Hb单克隆抗体和8管反应板(华能公司博塞试剂研究所生产);抗人Hb单克隆抗体(白求恩国际和平医院提供);抗人Hb多克隆抗体(公安部第二研究所血清室提供);三羟甲基氨基甲烷等试剂(北京化学试剂厂);牛血清白蛋白(BSA)(… 相似文献
19.
研制人转铁蛋白的单链抗体。以纯化人转铁蛋白免疫小鼠,制备小鼠脾脏 mRNA,RT-PCR 扩增重轻链可变区基因;Linker 连接及引入 Sfi Ⅰ和 NotⅠ酶切位点构建单链抗体基因;同载体 pCANTAB 5E 连接,转化 E.coliTG1细胞,以 M13K07挽救制备噬菌体抗体呈现文库,筛选抗原阳性重组噬菌体粒子(Panning);感染 E.coliHB2151菌株,制备可溶抗体并检测其性质;测定抗体基因序列并分析同源性及结构特征。制备出4株分泌抗人转铁蛋白可溶抗体的 E.coli HB2151菌株。抗体基因只由小鼠抗体的轻重链可变区基因构成,开放读码,无终止子,并紧接一末尾为一琥珀终止密码的 E 末端序列,其对应氨基酸序列 V_H 和 V_L 部分均遵从抗体可变区特征。实验证明,可把基因工程抗体技术应用于法医血清学,以制备新型抗体试剂。 相似文献