抗污染扩增试剂在法医物证检验中的应用

客观、准确的法医遗传检验结果是作出准确鉴定意见的基础。随着检验设备、扩增检测试剂检验灵敏度日益增加,防控实验室污染、样品污染的压力与日俱增,其中PCR扩增产物对检测结果的污染最难防控。本文测试一款抗污染扩增试剂盒NH-18A,该试剂盒包含16个常染色体STR基因座,1个性别识别基因座（Amel）和一个Y染色体插入缺失基因座（Indel）,NH-18A通过STR复合扩增可得到含有尿嘧啶碱基的DNA片段,该类型的DNA片段在50℃时可被尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG）高效水解,每次新一轮PCR扩增前增加一步50℃保温孵育可以彻底消除既往扩增产物对结果的污染威胁。经实验验证,NH-18A具有优异的抗扩增产物污染能力,且替换碱基扩增不改变DNA分型结果,检测灵敏度和DNA产物片段稳定性不降低,后续电泳分析不受影响。利用此试剂盒可以有效消除扩增产物对鉴定结果的污染。     

一核酸清洁剂在法医DNA实验室防污染上的应用

法医DNA实验室污染是导致鉴定结论错误的重要因素,DNA实验室应加强实验室管理,重点防范实验室的DNA污染,并解决污染问题。一核酸清洁剂由A、B两种组分构成,两种组分配合使用能破坏DNA结构,防止DNA在PCR中的复制。该核酸清洁剂能有效防范DNA实验室的污染,并解决实验室的污染问题,能很好的应用于法医DNA实验室质量监控管理。本文通过实验对比分析,阐明了该核酸清洁剂的作用效果。     

法医DNA实验室的DNA污染和防范

DNA污染是产生DNA鉴定结论错误的重要因素,法医DNA实验室要努力去解决这一问题。DNA污染有自身污染、交叉污染、PCR污染3种。法医DNA实验室要采取实验室分区、严格检验操作步骤、对试剂及消耗材料进行质量控制等方法防止发生DNA污染,采取设置对照样本、核查DNA结果、建立DNA排查数据库等方法监测和发现DNA污染。     

国外DNA测试简介

在我国刑事案件侦破和审理的过程中，法医DNA检验技术发挥了显著作用。由于我国刑事司法系统对DNA鉴定的依赖性较大， DNA鉴定结论常常作为法庭判决的关键证据，但是，在实际应用中几乎不对其证据能力进行评估。因此，对鉴定机构而言，提高DNA鉴定的质量和可信度，对法医DNA检验的实验室进行测试就显得十分必要。 目前，在DNA检验方面国内还没有专门的测试机构，但在国外则有如美国的实验室测试服务公司（Collaborative Testing Services Inc，以下简称CTS）、英国的塞尔马克公司（Cel lmark Diagnostics）等比较大的DNA测试机构。美国CTS测试在规模上最大，已被美国、英国、法国、荷兰、加拿大、日本等许多国家的质量认证组织所认可。下面就对CTS的DNA检验测试作一介绍。     

法医 DNA 实验室外源性污染15例

PCR 具有高灵敏度，可扩增微量 DNA，但如果不采取正确的防护措施，其高灵敏度同样会带来麻烦[1]。本研究通过对本鉴定中心 DNA 实验室发生的15例法医 DNA 外源性污染进行分析，强调 DNA 提取、包装、送检务必要按规范操作，尽量避免人为污染。一旦发生污染，要有能力及时发现，避免给办案造成更大的问题。     

DNA甲基化在法医学中的应用前景及其检测方法新进展

DNA甲基化是一种重要的表观遗传标记。新近的一些研究表明,DNA甲基化在二联体亲权鉴定、同卵双生子法医学个体甄别等案例中可能具有一定的应用前景,可作为STR或SNP等经典遗传标记的有益补充。目前基于甲基化敏感的限制性核酸内切酶、重亚硫酸盐转化以及甲基化CpG结合蛋白等原理已建立了一系列的DNA甲基化检测方法。甲基化敏感的单核苷酸引物延伸、实时荧光PCR、甲基化特异性PCR、甲基化特异性多重连接反应依赖性探针扩增、光纤微珠芯片等位点特异性DNA甲基化检测方法都可用于已知CpG位点甲基化状态的检测并可能在法医学实验室具有一定的应用前景;AIMS、HELP、COMPARE-MS等通过对基因组范围内的DNA甲基化扫描分析,可发现具有潜在法医学应用价值的DNA甲基化位点。     

DNA技术在法医物证鉴定中应用的经验

自1989年开始DNA指纹技术研究获得成功并正式用于法医物证检验以来，我们已受理检案上干起。在此基础上开展的PCR技术及单位点DNA图谱技术，将DNA指纹中的同位素标记探针检测方法发展为辣根过氧化物酶标记探针及光增强检测法。这些新技术的应用，相互弥补各自的不足，使目前广泛的DNA技术更趋于完善。经过几年的办案实践，我们摸索出一些实验室经验，同时也看到一些存在的问题，现总结如下。一、多位点DNA指纹技术由于此项技术在侦察破案中的重要性已逐渐为广大司法工作者所认识，我们已经受28个省、市、自治区的基层公安系统和法院…     

强化南通DNA技术应用

江苏省南通市公安局刑警支队以服务实战为核心，以开展DNA应用年为突破口，强化应用意识，拓展应用范围，大力加强DNA实验室现代化和规范化建设，取得了显著成效：特别是陈旧尸骨DNA提取方法得到国家科技成果鉴定，先后为全国14个省份52个地区破解疑难命案116起。目前，全市已采集建库血样近4万份，其中检验建库37000多份，现场检材建库2125份，通过DNA信息库的检索比对，成功破获各类案件4300多起。     

法庭科学DNA实验室认可与质量控制

法庭科学DNA实验室认可是整个实验室认可活动的一个组成部分,是对法庭科学DNA实验室的质量管理水平和技术能力的一种国家及国际间的正式承认。本文从文件体系建立、测量溯源、方法的确认、能力验证、质量控制等5个方面,对DNA实验室在认可中存在的主要问题进行了分析,对法庭科学DNA实验室认可与质量控制进行了探讨。     

微流控芯片技术应用于精阴混合斑分离的研究进展

在性侵案件中，精阴混合斑检材是常见且具有重要证据价值的物证，如何从中分离出嫌疑人精子细胞并检出其STR分型，是破案的关键，更是法医DNA实验室必须解决的问题。目前，国内实验室主流应用的差异裂解法以及基于此原理的改良方法，都存在难以克服的缺点。微流控技术的不断发展为混合斑中精子细胞的分离带来了新思路，基于不同原理并不断演进的微流控芯片被研制出来以尝试解决此难题。本文从研究和应用进展角度对机械操控法、流体动力和捏流分选融合法、声波差异提取法、介电泳法、SLeX糖芯片法等5种用于精阴混合斑分离的不同类型微流控芯片进行了概述与简要比较。随着相关技术的不断发展和完善，推出具有体积小、速度快、效果稳定等优点，可以广泛适用于各级法医DNA实验室进行案件混合斑分离的芯片将指日可待。     

DNA分型实验室管理应重视的几个问题

1985年Gill等第一次报导将DNA指纹图用于个体讽别并获得成功后，DNA分型技术在个体识别和亲子鉴定中的应用潜力开始为法医界所注目【'］．随着该项技术的日益完善，它极大地提高了生物学检材（血液，血痕，精斑，混合斑，毛发和指甲等）在法医物证学鉴定过程中的价值，并广泛应用于法医鉴定实践中．同时，法医界又面临着这样一个问题：如何对有关的DNA分型实验室进行管理监督，以保证其能更好地为司法实践服务．本文从DNA分型实验室人员设置和要求，DNA分型技术标准化以及与传统血型血清学的关系等方面并结合国外进展作如下探讨．ID…     

甲醛固定组织的DNA提取

在法医物证检验中，分子量大于23kb的DNA分子可以直接作出指纹图谱，部分降解的DNA分子可以通过PCR扩增进行检验。但对甲醛处理的组织，用上述提取方法，只能得到已严重降解的小分子DNA，并由于甲醛溶液的影响，无法进行VNTR－PCR检验。因此，如何从甲醛处理的各种组织中提取大分子DNA是一个迫切需要解决的问题。本文摸索出从甲醛处理的组织中提取大分子DNA的方法。同时研究了固定时间对提取DNA质量的影响，找到了适合DNA释放的最佳PK酶解条件，包括离子强度、反应体系、酶解时间、温度等。材料与方法1．组织的处理取自同一个…     

选用DNA试剂盒经验体会

目前应用DNA检验的试剂盒种类较多，但是不同的试剂盒具有各自不同的运用范围，有其独特的最佳适用条件。笔者在工作实践中的体会是，根据具体的案情和检材情况选择运用不同的试剂盒，或者联合运用多种DNA试剂盒，进行扩增检测，可以使案件的检验获得更加完美的结果，为案件的破获起到积极的作用。     

PCR-RFLP法分析北方汉族人群HLA-B基因多态性

目的建立以PCR-RFLP法分析HLA-B基因多态性的方法,并对105名北方汉族人群酶切片段类型、频率进行调查,为其法医学应用奠定基础。方法酚/氯仿抽提法抽提样本DNA;PCR扩增HLA-B基因的外显子2,3;NlaIII酶切PCR产物;聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术检测酶切结果;DNA测序确认酶切位点。结果HLA-B特异性扩增片段长度为943bp,以NlaIII酶进行酶切时在北方汉族人群中获得了14条片段,20种谱带类型,观察到了6个酶切位点。结论仅应用一种内切酶对HLA-B基因进行PCR-RFLP分析即可获得多条片段,多态信息含量大大提高,该法可以应用于法医学亲子鉴定和个人识别等。     

快速PCR扩增体系的建立及法医学应用

目的建立快速PCR扩增体系,探讨其在法医实践中的应用价值。方法设置不同的缓冲液、酶浓度与Mg SO4浓度、热循环参数等,观察不同参数对扩增结果的影响,建立快速PCR扩增体系。使用该体系对常见检材进行STR分型,与常规方法扩增的结果比较,考察其分型准确性与扩增用时。结果本文建立的快速PCR扩增体系含DNA TyperTM19试剂盒的Primer Mix(5×)2μL;Ta KaRa试剂的Fast BufferⅡ(10×)1μL,Speed STARTMHS DNA Polymerase(5U/μL)0.3μL,Mg SO4(50mmol/L)为0.1μL。扩增程序为95℃120s;95℃2s、61℃15s,27个循环;72℃60s。结论快速PCR扩增体系分型结果准确,用时仅19min,缩短了常规扩增用时,有较大的法医学应用价值。     

快速PCR扩增检验体系的建立及技术指标验证

目的建立PCR快速扩增程序和体系,并对其技术指标进行验证。方法运用快速扩增酶Fast Start与DNA TyperTM15 plus primer mix组合并优化建立快速扩增体系,对50份静脉血卡和35份案例检材提取的DNA进行扩增,并对体系检测结果的准确性、稳定性和检材适应性进行验证;采用不同稀释浓度的标准品9947,采用快速扩增方法进行检测,验证体系的灵敏度。结果模板DNA浓度达到0.50ng/μL,采用快速扩增体系可能获得准确分型;扩增耗时仅为69min,比常规扩增方法明显缩短;不同种类检材,经检测均获得良好分型图谱,同一份样本重复实验结果一致、稳定。结论本文建立的快速扩增体系可显著提升检测速率,其灵敏度、准确性、稳定性、检材适用性等技术性能,可满足实际检验的需求。     

中国人群线粒体DNA HVI区单倍型频率统计和法医学意义初探

随着DNA分析技术的不断发展,其在刑事案件侦破中的作用越来越重要.目前法庭科学实验室运用的主要方法是分析位于细胞核中的染色体DNA(即核DNA),由于其鉴别能力强,使得核DNA成为法医DNA分析的首选遗传标记.核DNA分析的方法学与统计学已被广泛接受,尤其是以PCR为基础的片段长度多态性分析已被法庭所认可.     

基于切口酶的等温全基因组扩增体系的建立与应用

目的 建立依赖切口酶Nt.BstNBI的等温全基因组扩增体系，并对该体系的微量生物物证STR分型效能进行验证。方法 选用切口酶Nt.BstNBI（识别序列为GAGTC）和等温扩增的聚合酶Bst，建立切口酶依赖的扩增体系（NDA）。对DNA样本进行NDA并纯化NDA产物，对NDA前后的样本进行复合扩增和毛细管电泳，检测该方法的有效性、灵敏性。结果 007标准品12个常染色体基因座的扩增效率提高2倍以上，灵敏度约为3 pg/μL;19个Y染色体个基因座的扩增效率提高2倍以上，灵敏度约为6 pg/μL。8个人血样本扩增效率提高2倍以上的常染色体基因座与007标准品一致。结论 本文建立的NDA体系准确性好，能够对包含特定侧翼序列的STR基因座进行有效的线性扩增，对法医微量生物物证的高效扩增检测具有重要意义。     

短串联重复序列突变的研究进展

短串联重复序列(short tandem repeat,STR)是广泛存在于人类基因组中的一类具有长度多态性的DNA序列,是目前法庭DNA实验室使用最广泛的一类遗传标记.但是,随着STR分型的广泛应用,STR的突变现象已不罕见,并影响了法医日常检案,得到法医学工作者的重视.同时,作为群体遗传学研究的理想模型,STR突变在群体遗传学领域也得到了较深入的研究.本文根据近年来国内外一些资料,概括地介绍一下这方面研究的动向.     

法医物证DNA自动化检验技术体系的研究

目的建立自动化工作站同步提取不同种类涉案法医生物检材DNA的新方法。方法选用TECAN Freedom EVO100．4、75—2型自动化提取、加样工作站,采用磁珠法及Chelex-100法对各类涉案生物检材进行DNA提取、PCR扩增、毛细管电泳检测其STR分型,进行比较测试。在“全国公安机关DNA数据库应用系统”中建立并应用实验室信息管理系统（LIMS）模拟实施规范化DNA检案。结果1552份各类检材,采用工作站-磁珠法提取DNA效果最佳,STR检测成功率为95％,工作站-Chelex法为88％;二者分别与其手工提取法比较,成功率无明显差异。92个样本同期检测,自动化工作站较手工操作DNA检案时间可缩减1．25倍。结论工作站域珠法提取涉案检材DNA,可获得满意的STR分型结果。应用LIMS管控,可有效防控污染,明显提高检案效率及鉴定质量。