应用等电聚焦电泳对人精液黄递酶Ⅲ表型分布的研究

应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳对武汉地区198例成人精液黄递酶Ⅲ(DIA_3)作了分型。观察到4种表现型,基因频率分别为DIA_3~1=0.7727;DIA_3~2=0.2172;DIA_3~3=0.0101。对保存精斑进行检测证实,室温下保存9周的精斑仍能作DIA_3分型。在聚丙烯酰胺凝胶中引入分离剂HEPES,提高了分辨率。改进后的等电聚焦技术尤适于DIA_3基因产物的分离。文中还调查了我国汉族人群DIA_3频率分布,并与其它群体资料作了比较。     

上海地区人体精子黄递酶_Ⅲ型的遗传多态性研究

Straub提纯一种与NADH或NADPH氧化有关的电子传递酶,具有黄素蛋白特性,命名为黄递酶(Diaphorase,DIA).Caldwell等首先报导了黄递酶的遗传多态性,可分1-1型、2-1型和2-2型三型,由一对共显性基因控制,作者认为此酶为精子细胞和睾丸组织所特有,称为精子黄递酶(sperm diaphorase,SD).Frsher等报导了黄递     

人体组织黄递酶Ⅲ分型

应用超薄层PAGIEF对人体组织作DIA3分型，结果显示睾丸、卵巢、子宫肌和牙髓组织均可检出DIA3多型带。脑、肝、肾、肾上腺、脾、肠、胰腺、心肌、肺、皮肤和骨骼肌以及血液、阴道液和毛根均未检测出DIA3。应用紫外分光光度法测定人体不同组织，血液和阴道液中DIA相对活性，结果各组织DIA活性相对值与PAGIEF中DIA显色谱带密度基本一致。作者认为，用PAGIEF对生殖器官和牙髓进行DIA3分型在法医的个人识别中有一定意义，在混合斑鉴定中可以不考虑阴道液对精液DIA3分型的干扰。     

用酶标抗体免疫组化法测定性交后阴道内容物中精子的ABO血型

应用间接酶标抗体免疫组化法测出了53例新鲜精液、5例陈旧精斑及40例阴道分泌液中的精子与阴道脱落上皮细胞的ABO血型,30例精子与不同血型分泌型阴道分泌液孵育,未发现精子吸附阴道液中血型物质的现象,同时发现人类睾丸曲精细管中部份生精细胞、精子细胞,精子;直细精管部份上皮细胞、精液、精子;睾丸网大部份上皮细胞及副睾管中的精液与精子均含ABH抗原,故认为精子上的ABH抗原主要是精子固有抗原,13例性交后阴道内容物中精子的ABO型测定结果:7例与供者血型吻合,6例不吻合。6例中5例从O型精子中测出了女方分泌型阴道分泌液中的A或AB物质,1例B型精子未测出B及H抗原,文中对这种现象进行了讨论。     

利用红细胞酶型检验技术破获一起重大轮奸杀人案

遇到强奸案,检测混合斑中PCM;酶型时,往往获得的是阴道液与精液混合的PGM;结果。我们采用细胞分离技术,提取出精子检验PGM;酶型,并破获一例特殊案件。现报道如下。1案情1992年某月,三名男青年将受害人1（女,16岁）、受害人2（女,21岁）扶持到一地道内轮奸后,杀死了受害人1,并使受害人2重伤昏迷。案发后,公安干警及时提取了现场遗留物证,将受害人1、2所穿内裤及受害人1的阴道擦拭物一并送检。笔者受理了此案。2材料与方法（1）梯度离心法分离精子[1]。取混合斑检材适量,剪碎放入试管内,加0．5ml生理盐水浸湿,然后吸取浸…     

用免疫酶组化法测定混合斑中精子ABO血型的案例分析

精液与阴道液混合斑的检测,一直是强奸案件中的棘手问题之一。传统的中和试验由于不能排除阴道分泌物中ABH物质对精液ABO血型测定结果的干扰,个人识别能力有限。国内外学者用多种方法研究证实了人类精子上含ABH物质。欧炯文等采用酶标抗体免疫组化法直接测出了混合斑中精子的ABO型,我们用该法对各市、县公安局送检的12例强奸案混合斑中精子的ABO型进行了测定,供个人识别之用,结果见表、图1、图2。     

应用免疫酶组化法测定混合斑中精子ABO型

应用免疫酶组化法测定混合斑中精子ＡＢＯ型李荣华，吴梅筠华西医科大学法医血清学教研室（６１００４１）精液与阴道液混合斑的检验，一直是强奸案件中的棘手问题之一。传统的中和试验由于不能排除阴道分泌物中ＡＢＨ物质对精液ＡＢＯ血型测定结果的干扰，个人识别能力有...     

人类精子ABO血型抗原的间接免疫荧光研究

应用间接免疫荧光技术,对40份精子标本进行 ABO 血型抗原检测。A 型人精子上存在 A 抗原;B 型人精子上存在 B 抗原;AB 型人精液中,一部分精子带有 A 抗原,另一部分精子带 B 抗原。各血型人的精子均有 H 抗原。精子血型抗原为本身所固有,并非来源于精浆。不同人的精子血型抗原含量各不相等,与其供体是否为分泌状态或强弱无直接关系。精子 ABO 血型抗原主要存在于精子的颈部和顶体等区域。     

精斑检材的3种提取方法比较

在日常检案中,精斑检材提取,常规应用Chelex-100法和酚/氯仿抽提法获得精子DNA。Chelex-100法耗时短,提取的精子的DNA量多,但所含的杂质也多,常影响扩增结果。酚/氯仿抽提法获得精子的DNA纯度高,但抽提过程中要用到有毒的化学制剂,消化、抽提耗时长,且抽提过程易造成DNA损失。本文直接应用磁珠法裂解提取精子DNA,获得优于Chelex-100法的高纯度的DNA,且把精斑的提取时间从酚/氯仿抽提法的2~3d缩减到7~8h。同时尝试了一步消化后的精斑检材,使用DNA自动工作站进行DNA提取,大大提高了办案效率。1材料与方法1.1精斑检材性犯罪案件中含…     

DNA IQ^TM系统在混合斑精子DNA检验中的应用

笔者在强奸案件混合斑精子的DNA检验中,以差异裂解法第一步消化去除女性细胞得到精子沉淀后,采用DNA IQTM系统直接提取混合斑中精子DNA,在200余份检材的检验中获得较满意结果。现将方法报告如下:1材料与方法1.1材料取自本实验室日常检案积累的混合斑样本216份。主要仪器和试剂采用9700PCR扩增仪(美国ABI公司)、ABI3100型遗传分析仪(美国ABI公司)、DNA IQTM系统(Promega公司)、AmpF1STRIdentifiler试剂盒((美国ABI公司)。1.2方法1.2.1 DNA提取参照差异裂解法,经过套管离心去除女性细胞后,得到沉淀精子,加入100~200ulDNA …     

DNA指纹图在法医学鉴定中应用的研究(Ⅱ)——应用‘Myo’小卫星探针进行血斑、精斑、个体组织的个体认定

应用‘Myo’小卫星 DNA 探针,Southern 印迹杂交技术,对血斑、精斑、同一个体不同组织进行 DNA 指纹图分析,均获得清晰的图谱。同一个体的血斑与血液、精斑与精液以及不同的组织其 DNA 指纹图谱完全相同。可以根据斑痕或组织与嫌疑个体的血液或某一组织 DNA 的指纹图谱比对以做出同一认定。50μl 血液量的血斑、5μl 精液量的精斑可以获得清晰易辨的指纹图谱。五年的精斑、两年的血斑亦可做出与同源个体新鲜精液、血液完全一致的 DNA 指纹图谱。对杀人、强奸杀人、碎尸等不同案件的血痕、精斑、不同组织碎块进行了 DNA 指纹图检验,均做出了正确的个体认定。本方法的应用为我国法医物证检验提供了新的分析手段,使个体认定得以实现。     

辽宁汉族人血清类粘蛋白(ORM)型的分布及其在血痕精液(斑)及脑脊液中的检出

本文作者采用PAGIEF结合免疫固定法,调查了辽宁汉族群体(431人)ORM的分布,检出了ORM1型和ORM2型各8种表现型;对不同条件下的血痕标本进行检测,成功地检出了37℃保存2年血痕的ORM1型;首次由脑脊髓液中检出了ORM1型。ORM型的总鉴别机率为0.7043,是进行个人识别和亲子鉴定的良好遗传标记。     

红细胞酯酶D(EsD)型的分布及血痕EsD型的检出

本文应用高压琼脂糖凝胶电泳法对沈阳地区汉族221例随机献血者的红细胞酯酶D(EsD)型进行了检测,其基因频率为 EsD~1=0.629,EsD~2=0.371。结合文献资料分析了EsD 型分布的种族差异,发现黄种人的 EsD~1频率最低,白种人及黑人最高。用本法对红细胞溶血液的最小检出量为1μl;以1μl 溶血液作成的血痕检样,室温保存2周仍可分型。以5μl 溶血液作成的血痕检样可分型时间为3周;37℃保存的溶血液可分型时间为7～8天。     

精斑中磷酸葡萄糖变位酶(PGM_1)及其亚型的电泳分型

本文用淀粉凝胶电泳法和 PAGIEF 对精斑 PGM_1普通型及亚型进行了检测。169份精液斑的 PGM_1分型结果是:PGM_1 1—1 87例;PGM_1 2—1 66例;PGM_1 2—2 16例,其中31例同一个体红细胞及精液 PGM_1分型的结果完全一致。研究了138例不同精子数精斑的 PGM_1型,发现精子数的多少对分型无影响。亚型检测结果与红细胞一样可分10型。     

Detection of amphetamine in bloodstains,semen, seminal stains,saliva, and saliva stains

Low nanogram quantities of amphetamine were detected in 100μl samples of dried bloodstains using radioimmunoassay. Saliva, saliva stains, semen, and seminal stains also contained measurable quantities of the drug.     

氟乙酸五氟苄基酯的气相色谱分析

目的 对氟乙酸根阴离子的衍生物-氟乙酸五氟苄基酯(PFB-MFA)进行了气相色谱分析，以满足氟乙酰胺类鼠药化验工作的需要。方法 使用GC／ECD、GC／MS Scan、GC／MS SIM对该化合物的标准溶液进行了分析，得到了各种分析方法的校正曲线及检测限。结果 三种方法测定PFB-MFA的线性范围分别为GC／ECD 0.01～0.1ng／μl、GC／MS SCAN 1～100ng／μl、GC／MS SIM 5×10~(-3)～1ng／μl。三种方法对氟乙酸根阴离子的检测限分别为：GC／ECD1.31×10~(-4)ng／μl、GC／MS SCAN 0.13ng／μl、GC／MS SIM 1.76×10~(-4)ng／μl。结论 氟乙酸根阴离子的衍生物氟乙酸五氟苄基酯在GC／ECD及GC／MS上具有一定的线性范围，有非常高的灵敏度，可用于法庭科学的定性定量分析。     

红细胞和血痕酸性磷酸酶(EAP)表型及广东人群EAP基因频率的调查

本文采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳检测红细胞及血痕酸性磷酸酶表型,并对不同条件下的血痕标本进行检测,发现室温下(15～33℃)保存的110例纱布血痕7周内可全部正确分型,21例磁板血痕9周内均可正确分型;含血量≥5λl 的血痕可被正确检出 EAP 表型;日晒、水洗、发霉等因素可影响血痕 EAP 型的正确检出。同时调查了广东人群的 EAP 表型分布,基因频率为 p~a=0. 2338,p~b=0. 7662,发现 EAP 基因频率分布存在着地区差异。     

A sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for ABO blood typing of semen by using anti-p 84 monoclonal antibody as a marker of blood group substance in semen

A blood group substance (BGS), a protein with ABH antigenic activity, was isolated from human seminal plasma and designated as p 84 (Sato, 1995). We have developed a method for determining the ABO blood type of semen by performing a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in which p 84 is captured with an anti-p 84 monoclonal antibody, and evaluated the specificity and sensitivity of this method. Although BGS activity was detected in semen sensitively by this method, it was not detected in saliva, urine, breast milk, blood or vaginal secretions. Since the concentration of p 84 in semen was independent of the secretion status, the status can be determined as non-secretor when p 84 but not BGS activity was detected. To determine the stability of BGS activity on p 84, dried stains of semen on filter paper were kept at 4, 26, and 37 degrees C for 8 months, 2 years and 1 month, respectively, and their BGS activities were examined. After 8 months at 4 degrees C, over 60% of the original BGS activity was recovered from the stain. The activity could be detected even from a square as small as 0.25 by 0.25 cm. After 1 month at 37 degrees C and 2 years at 26 degrees C, 31 and 20% of the BGS activity, respectively, still remained. It could be detected from the pieces of 1.0 by 1.0 cm and 0.5 by 0.5 cm squares, kept for 1 month at 37 degrees C and 2 years at 26 degrees C, respectively. Finally, semen was mixed with saliva or blood at varying volumetric ratios and used for the sources of dried stains. The BGS activity of p 84 could be detected in the stains until the ratio between semen and saliva or blood reached 1:4. We conclude that this sandwich ELISA offers a more sensitive and specific method for determining the ABO blood type of semen samples obtained from sexual assault victims than existing methods, such as the conventional absorption-elution and classical hemagglutination-inhibition tests.     

Detection of orosomucoid 1 phenotypes in semen and semen stains

Orosomucoid 1 phenotypes were detected in seminal plasma by isoelectric focusing and immunoprinting. The orosomucoid 1 phenotypes in seminal plasma correlated with the types found in the corresponding serum specimens. Semen stains stored for ten days could be typed for orosomucoid 1. The present work revealed that orosomucoid 1 is a useful genetic marker for the medicolegal grouping of semen stains.