无精子精斑的STR基因型检验研究及在物证鉴定中的应用

在对强奸案的法医物证检验中,有时会遇到因行为人曾经做过输精管结扎术或行为人患无精子症,此时,行为人遗留下的精斑中无精子(精斑预试验和抗人精试验均阳性,但找不到精子),一般称为无精子精斑.对此种物证如沿用常规的精斑DNA提取方法检验,毫无结果.为了解决检案中对无精子精斑无法确定犯罪嫌疑人的问题,作者对此进行了试验研究,取得了满意的效果,并成功的应用于实际鉴定工作中.     

双面胶带法快速检验精斑

精液及精斑是常见的生物物证,精斑的确证主要有3大类方法:形态学检查、免疫学检验及生化分析,而形态学检查是认定精斑存在最简便、可靠的方法[1]。在实际检案中,笔者总结了一种简单实用的精子快速检出方法———双面胶带法。介绍如下:1设备与材料1.1器材双面胶带,载玻片,盖玻片,分离针,吹风机。1.2试剂染色Ⅰ液(酸性品红液):将媒染剂硫酸铝5g溶解于100ml煮沸的蒸馏水中,再加0.1g酸品红于溶液中进行搅拌,使之充分溶解。染色Ⅱ液(苦酸靛蓝胭脂红液):取靛蓝胭脂红1g,置于饱和苦味酸溶液300ml中进行溶解,过滤后使用。1%的盐酸溶液,95%乙醇溶液,…     

用ELISA检测精液及精斑中精子抗原的研究

本实验应用单克隆抗人精子抗体和酶标记羊抗人精子抗体,采用ELISA方法确定精子抗原成份的存在。对10份新鲜精液,15份精斑进行了验测,其结果阳性率为100%。新鲜精液(精子数约10,000万个/ml)稀释100万倍,精斑浸出液稀释50万倍,均可出现阳性。对唾液斑、尿斑、乳汁斑、阴道斑、汗斑及输精管结扎的精液均为阴性。实验结果表明,本法检验精子抗原具有灵敏度高,特异性好的优点。     

胶乳凝集试验及其在精斑检验中的应用

<正> 精斑检验在鉴定法医学性犯罪案件中有很重要的作用,精斑确证试验的方法主要有:形态学方法、化学方法、生物化学方法及免疫学方法。这些方法各有其优点和一定的局限性,目前仍较多地采用精子检出法和抗人精液血清琼脂双扩,而输精管结扎术者及精子缺乏症者其精斑中无精子,抗人精液血清特异性不够好便难以检出。近几年来用特异性抗-P30血清作     

酸性复红美蓝精子染色法的改进

物证精斑确证试验目前广泛首选精子检出法。检精子的方法较多,实践中大多采用酸性复红美蓝染色法,因其是一种混合染色液的复染法,操作简单,效果较好。但如遇油脂杂质较多或阴道上皮细胞较多的情况,精子着色较淡,易被掩盖,不易检出。本文介绍一种改进方法可避免上述干扰,且配制、操作简单。     

混合斑中无精子精斑DNA检验的研究

在日常性侵犯案件的DNA 检验中,经常遇到无精子精斑的混合斑,按照常规的二步消化分离法提取DNA进行STR检验则难以成功,对于此类案件常常不予检验,不能充分发挥DNA在案件中的证据作用.籍针对此类案件以Y-Plex6试剂盒对无精子精斑及其混合斑进行了检验,取得成功,现报道如下:     

中国人精子黄递酶Ⅲ型的分布及精斑黄递酶Ⅲ型的检出

应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦技术对辽宁地区200例正常人精子黄递酶Ⅲ型(DIA)的分布进行了研究。其基因频率分别为DIA_3~1=0.6850,DIA_3~2=0.2875,DIA_5~3=0.0275。由阴道液、唾液、乳汁及无精子症精液不能判定DIA_3型。室温保存精斑可检出时限为9个月。     

精液混合斑检验方法的应用

目前精斑-混合斑的检验方法很多,本文重点介绍其选择、综合检验方法,此法可相互印证,起到复核作用,结果可靠,使用0.5cm~2检材检验可取得理想结果。 1.现场提取性犯罪检材,涂片镜检出 精子,可直接用解离法或配合中和法测其血型。 2.检材未直接检出精子,可参考表中方法制定检验方案。     

精斑检验干扰因素的研究

目的研究精斑检验中预试验与确证试验结果的关系,以及取材时间、生活习惯对确证检验结果的干扰。方法取376例阴道拭子,用酸性磷酸酶(ACP)染色法、斑点ELISA法和抗人精PSA金标试纸法检测检测精斑。结果ACP阴性时,可检出P30、精子,性生活后精斑确证检验大部分阳性检出分布在48小时以内样本中,结果经X2检验,P<0.01,差异性显著,而不同的生活习惯对P30检测具有显著性差异。结论研究结果对精斑的检验以及检材的提取具有推广应用和指导性意义。     

Maxwell 16裂解纯化法提取陈旧精子DNA的应用

目的利用Maxwell 16裂解纯化法从保存8年以上陈旧精斑检材中获取精子DNA。方法 8份陈旧精斑检材采用Maxwell 16裂解纯化法提取精子DNA,并采用Powerplex○R21试剂盒进行复合扩增,产物用AB3130型遗传分析仪检测,结果与常规方法进行对比。结果成功获得8份陈旧精斑检材精子STR分型。结论差异裂解配合Maxwell 16裂解在陈旧精斑检材精子DNA检验中效果明显。     

精斑检材的3种提取方法比较

在日常检案中,精斑检材提取,常规应用Chelex-100法和酚/氯仿抽提法获得精子DNA。Chelex-100法耗时短,提取的精子的DNA量多,但所含的杂质也多,常影响扩增结果。酚/氯仿抽提法获得精子的DNA纯度高,但抽提过程中要用到有毒的化学制剂,消化、抽提耗时长,且抽提过程易造成DNA损失。本文直接应用磁珠法裂解提取精子DNA,获得优于Chelex-100法的高纯度的DNA,且把精斑的提取时间从酚/氯仿抽提法的2~3d缩减到7~8h。同时尝试了一步消化后的精斑检材,使用DNA自动工作站进行DNA提取,大大提高了办案效率。1材料与方法1.1精斑检材性犯罪案件中含…     

加热法快速进行T-HCl荧光标记精子的研究

盐酸四环素(以下简称T-HCl)在加热到40℃时能快速与精子结合,并且产生比通常更强的蓝色荧光,使精子在荧光显微镜下透视清晰,与载物纤维的反差强,检出率高、效果好,适合微量精斑的确证试验。     

混合斑中酸性磷酸酶及精子检出时限的研究

目的 研究探讨性生活后活体阴道内混合斑中酸性磷酸酶（ ACP）及精子的检出时限。方法 采用取材、检验三盲法对 600例阴道拭子进行 ACP及精子的常规检验。结果 ACP最长检出时限 255h,平均检出时限 52h。精子最长检出时限 132h,精子平均检出时限 29h。 ACP检出例中阳性程度在（＋＋）以上占 41.3％,精子检出例中阳性程度为每个视野 6～ 10个占 34.3％。 结论 应用混合斑中酸性磷酸酶及精子的检出时限 ,能为侦审性犯罪案件的法医学鉴定提供客观依据。     

性侵犯案件中对于精斑试纸条使用灵敏度以及特异性的研究

抗原胶体金免疫试纸条也就是精斑试纸条,这是一种使用色谱层析技术以及免疫学方法通过前列腺特异性抗原对特异性进行检测的办法.该办法在实际操作过程中具备简单、所耗费时间短、得出的结果容易判断以及没有特殊设备要求等诸多优势而在日常精斑确证试验中在法医学的实际检案上.在实际检测过程中,很可能会出现精子检测不到或者是男性的DNA不能进行扩增情况的发生,为对此种办法的灵敏度和特异性进行验证和比较,本文特对此课题做一探讨,相信本文能够对相关课题研究起到抛砖引玉的作用.     

阴茎上检出他人精子1例

1 案例 某男,52岁,某日下午到某女(30岁,哑巴,弱智)家看电视.某女婆婆当时在家,后来带孙子出去玩,约15 min后回家,发现两人正在拎穿裤子,即怀疑某女被强奸,遂报案.提取以下7份生物检材:某女短裤裆部可疑斑迹、阴道擦拭物、外阴部擦拭物,某男阴茎擦拭物,某男、某女及其丈夫血样各一份,分别编为l～7号.精斑预试验:1～4号检材均呈阳性;精斑确证试验:1～3号检材均检出人精子;DNA检验结果见表1.     

GC/MS衍生化测定精浆中游离支链氨基酸和果糖

目的 建立人精浆中支链氨基酸和果糖的气相质谱衍生化分析方法.方法 精液样本液化离心后,按精子活率的临床标准分为正常组和非正常组,经TMS微波衍生化,GC/MS分析两组支链氨基酸、果糖衍生物含量差异.结果 正常组与非正常组的缬氨酸,亮氨酸,异亮氨酸在相对含量上均有一定差异.正常组3种氨基酸相对含量高于非正常组.果糖分析观察到同样的特征,正常组相对含量高于非正常组.结论 精子活率低的精浆样本仍可检出支链氨基酸和果糖,其差异有助于无精子、少精子精斑的法医学鉴别.     

抗P30胶体金免疫试纸条灵敏度和特异性探讨

抗P30胶体金免疫试纸条(又称精斑试纸条)是利用免疫学方法和色谱层析技术对前列腺特异性抗原(PSA,又称P30)进行特异性检测的一种简便方法[1]。由于操作简单、耗时短、无需特殊设备和结果易判读等优点而被广泛用作法医学实际检案中的精斑确证试验。但在实际案件中,有时会出现精斑试纸条检测呈现阳性结果,却检测不到精子或无法扩增男性DNA的情况,为验证及比较灵敏度及特异性,本文进行了一些探讨,现报道如下。1材料和方法1.1材料精斑试纸条:购自美国E-boat Dallas公司。样品:10支阴道棉签拭子取自一周内无性生活的女性志愿者,阴道分泌液斑…     

混合斑中女性物质的PCR检验1例

１９９８年９月２７日,海阳大闫家镇村民某某将一１３岁小女孩骗至家中强奸。技术人员在现场提取了一团可疑的卫生纸,其上检出精斑。但犯罪嫌疑人拒不交代罪行,对于现场附有精斑的卫生纸,犯罪嫌疑人称是其与妻子发生性行为时所用。经常规ABO血型检验,受害人和犯罪嫌疑人妻子的血型均为“A”型;犯罪嫌疑人为“O”型,卫生纸上检出精斑且含“A”型物质。利用二步消化法分别将混合斑中的女性物质与精子DNA提取出来,进一步做DNA检验,经HUMTH０１犤AATG犦n、HUMFABP犤AAT犦n、pMCT１１８、apoB位点扩增、电泳、银染,结果…     

Chelex快速处理法成功检测肛门拭子1例

在实际办案中,法医检验精斑多集中于阴棉、内裤、擦拭物,而肛门拭子检验较少,笔者遇到一例,并成功检出犯罪嫌疑人所留精斑的基因型.     

精子富集柱分离技术的研究

目的在传统差异裂解法基础上,研究建立新的混合斑检材中精子分离技术。方法根据精细胞的结构特点,研制精子富集柱。取混合斑检材经第一步消化后的混合液,加入精子富集柱中离心,使DNA等小分子物质透过,而精细胞被特异性黏附和拦截在富集层中。采用本文技术和常规裂解方法对12份混合斑检材中精子进行分离,分离后精子DNA采用Identifiler试剂盒进行PCR扩增和电泳检测。结果混合斑检材经精子富集柱分离后均获得单一男性精子的STR分型结果,而12份检材用常规裂解方法分离,其中有6份检材女性成分去除不完全或未能检出精子STR基因型。结论本研究建立的精子富集柱分离技术适用于常见混合斑检材中精子的分离,特别适合对含有大量女性混合物而精子量较少检材的分离提取。