利用AutoMate Express~(TM)系统提取陈旧性骨骼DNA

目的建立利用AutoMate Express~(TM)系统提取陈旧性骨骼DNA的方法。方法将骨骼用冷冻研磨机研磨成骨粉,经AutoMate Express~(TM)系统提取后,用Identifiler~Plus、MiniFiler~(TM)试剂盒扩增分型。结果10例保存在不同环境中、死亡时间在10~20年的骨骼样本利用AutoMate Express~(TM)系统3 h内完成DNA提取,有8例获得完整STR分型。结论 AutoMate Express~(TM)系统能快速、高效地提取陈旧性骨骼DNA,可应用于法医实际案件检验。     

利用AutoMate Express~(TM)自动化法医DNA提取系统提取骨骼及牙齿DNA

目的探讨建立骨骼及牙齿DNA自动化提取的新方法。方法将33份骨骼及15份牙齿样本分别用冷冻研磨和手工处理两种方法研磨成粉,采用AutoMate ExpressTM自动化法医DNA提取系统提取DNA并定量。结果 AutoMate ExpressTM自动化法医DNA提取系统能够在3h左右完成骨骼、牙齿DNA的提取,两种方法处理的骨骼样本所得DNA质量浓度差异无统计学意义。冷冻研磨处理的骨骼和牙齿样本均获得了较好的STR分型结果,且牙齿样本所得DNA质量浓度高于手工提取所得。结论应用AutoMate ExpressTM自动化法医DNA提取系统是自动化提取骨骼、牙齿DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验。     

人骨骼及牙齿DNA提取方法的比较和优化

目的人骨骼和牙齿DNA提取方法的比较和优化。方法收集18份不同个体的长骨、30颗磨牙和同一个体2根股骨、8颗磨牙。利用TissueLyser-Ⅱ组织破碎仪和PreFiler Express BTA^TM法医DNA提取试剂盒（BTA法）,应用Automate Express^TM自动化法医DNA提取系统提取DNA,进行STR分型,与脱钙法进行比较,并进行实验条件优化。结果用TissueLyser-Ⅱ结合BTA法,约2.5h即可完成骨骼和牙齿的DNA提取,分型成功率分别为94.4%和96.7%。与脱钙法比较,两种方法获得DNA质量浓度和检出率比较接近（P〈0.05）,但BTA法在操作过程方面更具优势。最佳样本量为100mg,消化时间为2h。结论采用TissueLyser-Ⅱ组织破碎仪结合BTA法对骨骼和牙齿进行DNA提取和分型检验,能满足实际检案的要求,可在法医学实践中选择使用。     

应用InnoTyper~ 21试剂盒进行毛干检验

目的探讨InnoTyper~ 21试剂盒在法医学实践中的应用价值。方法收集8名无关个体的毛发及唾液样本,采用Auto Mate Express~(TM)自动化法医DNA提取系统提取模板DNA,分别采用InnoTyper~ 21和Amp FeSTR~(TM) Identifiler~(TM) Plus试剂盒进行扩增,并对检验结果进行比较。结果采用InnoTyper~ 21试剂盒扩增时,唾液样本均可检出完整特异性分型,无毛囊毛干分型图谱峰值为57~1 219 RFU,有时可见等位基因缺失;采用Amp FeSTR~(TM) Identifiler~(TM) Plus试剂盒扩增时,唾液样本均可检出完整特异性分型,无毛囊毛干均未检出特异性片段。结论 InnoTyper~ 21试剂盒在无毛囊毛干的检案中具有一定应用价值。     

男性Y染色体Amelogenin Y、DYS570及DYS576缺失1例

正1案例1.1简要案情某水域发现1具高度腐败未知名尸体,法医初步判断死者为男性,提取死者肋软骨进行DNA检测。1.2检验方法使用AutoMate Express~(TM)核酸提取系统(美国Thermo Fisher Scientific公司)及配套试剂进行DNA提取,使用Power Plex~? 21系统(美国Promega公司)和GlobalFiler~(TM) PCR扩增试剂盒(美国Thermo FisherScientific公司)进行常染色体STR复合扩增。     

指甲DNA的STR分型研究

目的 研究尸体所处环境、指甲DNA提取部位及提取方法对STR分型的影响。方法 对案件中不同条件腐败尸体指甲,使用不同部位、不同体系和时间消化,酚-氯仿法提取指甲核DNA,进行PCR扩增及STR分型。结果 提取指甲甲体、甲根部位均可获得STR分型。结论 指甲是法医检案中一类具有实用价值的检材。     

利用PrepFiler Express~(TM)提取粪便DNA1例

<正>1案例资料1.1简要案情2015年12月,某地山区发生一起盗窃古墓案。现场勘验人员在现场发现成型大便两处,分别用多根棉签擦拭其表面后,送DNA实验室检验。1.2 DNA检验分别采用Chelex-100法、手工磁珠法(CON SUMMATE,武汉凯斯美特)、Prep Filer Express~(TM) BTA法(Prep Filer Express~(TM) BTA~(TM)法医DNA提取     

运用酚-氯仿法结合磁珠法提取蝇蛆体内人类DNA

目的建立运用酚-氯仿法结合磁珠法从蝇蛆嗉囊内提取人类DNA的方法,从而提高STR分型检验的灵敏度。方法采用酚-氯仿法对蝇蛆嗉囊内容物中的人类DNA进行提取,提取产物经磁珠法纯化浓缩后用QuantifilerTM人类DNA定量试剂盒在7500型实时荧光定量PCR仪上进行PCR定量,再用AmpF■STR IndentifilerTM试剂盒在3130XL-Avant遗传分析仪上对这些DNA样本进行STR分型。结果本研究建立的方法可增加模板DNA浓度约为单独使用酚-氯仿法的2倍。用此方法提取到的DNA浓度[（0.218±0.041）ng/μL]可获得全部16个STR分型结果。结论酚-氯仿法结合磁珠法可以有效地提高提取到的人类DNA样本STR分型检验的灵敏度,对于从事法医昆虫学方面研究的工作者有较好的实用价值。     

纳米磁珠提取法在骨骼DNA提取中的应用

目的对纳米磁珠法提取纯化骨骼DNA的效果进行比较评价,为方法选择提供应用参考。方法取泥土掩埋、水中浸泡1~10年不等的25根长骨,经水洗、刮净,液氮冷冻研磨器将骨骼研磨成粉末状,分别应用纳米磁珠提取法和King Fisher仪器自动化提取法提取DNA,IdentifilerPlus试剂盒进行扩增,ABI 3100遗传分析仪进行STR分型检测;对两种方法提取的DNA定量和经扩增、分型检测的结果进行比较。结果骨骼样本采用纳米磁珠法提取到的样本DNA(1.237 5ng/μL±0.319 2ng/μL),较之King Fisher法的浓度(0.506 2ng/μL±0.280 5ng/μL)更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05);而纳米磁珠法的分型成功率亦更高,两种方法间差异具有统计学意义(P0.05)。结论用纳米磁珠提取纯化骨骼DNA,能得到高质量DNA模板,有利于提高分型检验的成功率,可在实际检案中选择使用。     

联苯胺试验对血痕DNA检验的影响

目的探讨联苯胺试验及相关试剂对血痕DNA检验的影响。方法制作含1μL静脉血的滤纸血痕970份,其中10份为对照样本,960份经联苯胺试验及相关试剂分别处理后,采用Chelex-100法和硅珠法提取DNA,Amp F詛STR~(TM)Identifiler~(TM)Plus PCR扩增试剂盒进行复合扩增,对比各组STR分型结果。结果联苯胺试验后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(3.80±1.34)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;联苯胺试验后干燥处理,硅珠法有13例(21.7%)获得全部STR基因座分型结果,且STR基因座检出数[(12.90±1.49)个]远高于Chelex-100法[(4.70±1.96)个](P0.05);加入冰醋酸后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(9.40±2.09)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;只加冰醋酸后干燥处理以及只加四甲基联苯胺乙醇饱和溶液或3%过氧化氢溶液,两种方法均获得完整15个STR基因座分型结果。结论联苯胺试验对血痕的后续DNA检验有很大的影响,Chelex-100法不适合联苯胺试验后血痕的DNA检验,联苯胺试验后干燥处理及采用硅珠纯化的方法可有效提升联苯胺试验后血痕的STR基因座检出数。     

六色荧光标记快速PCR扩增体系的建立及验证

目的建立PCR快速扩增程序和体系,并对其技术指标进行验证。方法采用六色荧光标记技术,对24个常染色体STR基因座、1个Y-STR基因座和Amelogenin、Y-In Del基因座进行复合扩增及毛细管电泳检测,同时考察体系的灵敏度、特异性、同一性、稳定性、混合样本及批量样本测试,并观察各种常见检材及降解、脱落细胞检材的分型情况。结果所建立的体系灵敏度达0.062 5 ng,快速扩增仅耗时65 min就可获得准确分型;种属特异性高;各种纸质血样本和混合、降解、脱落细胞检材的分型正确。结论本研究建立的快速扩增体系可显著提升检验速率,分型准确、稳定,对建立STR数据库、研究群体遗传学和进行法医学鉴定有重要意义。     

2种陈旧骨骼、牙齿DNA纯化方法的比较

目的比较有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法对陈旧骨骼和牙齿DNA的纯化效果。方法选择10份陈旧骨骼和12份牙齿样本,进行消化后分别采用有机法+QIAquick纯化法和DNA IQ磁珠法进行提取纯化,进行DNA定量后用SinofilerTM试剂盒进行检测。结果 2种方法纯化的骨骼、牙齿DNA的IPC CT值无显著差异。有机法+QIAquick纯化法纯化的骨骼、牙齿DNA平均浓度分别为0.180ng/μL±0.068ng/μL和0.132ng/μL±0.027ng/μL,所有样品均获得全部基因分型。DNA IQ磁珠法纯化的DNA平均浓度分别为0.038ng/μL±0.028ng/μL和0.036ng/μL±0.007ng/μL,有5份骨骼和6份牙齿样本仅获得部分基因分型或未能分型。结论有机法+QIAquick纯化法对陈旧骨骼、牙齿DNA的纯化效果优于DNA IQ磁珠法。     

二次消化结合磁珠法提取腐败组织DNA

目的 研究二次消化结合磁珠法对3种腐败组织DNA的提取效果.方法 采用二次消化结合磁珠法对用常规磁珠法提取DNA失败的91例高度腐败尸体的软骨、指(趾)甲、关节囊组织提取DNA,QuantifilerTM试剂盒进行DNA定量,用SinofilerTM或MinifilerTM试剂盒进行STR检测分型. 结果 91例高度腐...     

23个STR基因座荧光复合扩增体系的法医学应用评估

目的评估新建立的23个STR复合扩增体系EX23的法医学应用价值。方法使用磁珠法提取样本DNA,应用23个STR复合扩增体系进行扩增,ABI3130XL遗传分析仪对扩增产物进行电泳,GeneMapperID 3.2软件进行基因分型,对法医学应用参数、灵敏度、种属、脱落细胞检材及降级检材分型效果进行观察,并与Sinofiler试剂盒比较。结果 DNA模板量在0.05~1.00ng时,各基因座分型结果清晰准确,均衡性好、特异性强。应用该复合扩增体系检验混合样本、降解检材及脱落细胞检材,均能获得正确的分型结果。统计结果显示该23个STR基因座累计个人识别（TDP）率达0.999999999,三联体累计非父排除率（CPE）达0.999999997。结论新建立的23个STR复合扩增体系分型效果良好,在广东地区汉族人群中具有高度多态性,可满足日常法医鉴定的需要。     

头发中氯硝西泮的分段分析在药物辅助犯罪案件中的作用

目的通过分段分析头发中的氯硝西泮,对药物辅助犯罪案件中受害人的摄药频度及摄药史进行推断。方法采用液氮冷冻研磨技术联合超声浴技术,以液相色谱-串联质谱法,对6名不同案件中受害人的头发分段分析,并测定各头发段中的氯硝西泮及7-氨基氯硝西泮的含量。结果 6名受害人的部分头发段中均检出氯硝西泮及其代谢物7-氨基氯硝西泮,且头发中药物峰值浓度的出现时间与受害人自述摄药时间相一致。结论头发分段分析可提供摄药频度与摄药时间信息,在药物辅助犯罪案件中具有独特的证据价值。     

基于重组质粒制备STR分型阳性参照物

目的基于重组质粒制备可用于校准法医STR分型的阳性参照物。方法以常用阳性参照物9948人类基因组DNA STR分型为依据,基于重组质粒构建包含CSF1PO、D7S820、TH01等40个常染色体位点,DYS391、DYS522、DYS385a/b等22个Y染色体位点以及性别判定基因座Amelogenin的STR分型阳性参照物。将重组质粒定量、稀释后等比例混合,分别应用于DNATyper~?19、DNATyper~?24、DNATyper~?Y、Amp F?STR~?Identifiler~?Plus以及Power Plex~?18D System五种扩增试剂盒。结果阳性参照物中各重组质粒浓度为0.01pg/μL~0.001pg/μL;应用于Amp F?STR~?Identifiler~?Plus PCR扩增试剂盒,基于重组质粒制备的阳性参照物与人类基因组DNA扩增检测结果差异较小;将此阳性参照物分别应用于不同公司、不同STR基因座的四种STR扩增试剂盒,电泳检测图谱显示各基因座基因型完整,分型正确,峰高相当,基因座间均衡性良好。结论基于重组质粒制备STR分型阳性参照物,是一种可以替代细胞系制备阳性参照物的方法,具有一定的参考价值。基于此方法制备的阳性参照物可适用于市面上常用的STR检验试剂盒,普适性较强,对法医DNA分型检测有一定的实用价值。