20个STR基因座的种属特异性研究

确定本室常用的20个STR基因座对常见10种动物的种属特异性。20个STR基因座对10种常见动物血或软组织的DNA进行PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色法进行DNA分型,测定各STR基因座的种属特异性。D11S554、SE33基因座对10种动物DNA,D12S391、CSF基因座对狒狒DNA,D19S253基因座对兔、狒狒的DNA,FGA基因座对兔、猴、狒狒的DNA均有PCR扩增产物,其片段长度与人的在同一电泳区内;DYS19基因座对10种动物的DNA,FES基因座对鸡DNA,PLA基因座对猪DNA,D21S11基因座对蛇、牛、狒狒的DNA有扩增产物,但其片段长度明显与人的不同。DYS389、DYS288、DYS390、D7S809、D13S631,TH01、vWA、AR、CD4、FABP基因座对鸡、猪等动物的DNA均无PCR扩增产物。在20个STR基因座中,10个基因座只对人DNA有扩增产物,有较好的种属特异性;8个基因座对人和部分动物均有扩增产物,但产物的片段大小与人的不同,在进行个人识别时,可以用其分析DNA的种属来源;2个基因座对人和动物均有扩增产物,且片段长度相近,在进行个人识别时,应先作DNA种属来源检查。     

短串联重复位点ACTBP2(SE33)的扩增片段长度多态性研究

应用变性聚丙烯酸胺凝胶电泳（dn－PAGE）结合银染色技术对短串联重复（STR）位点ACTBP2（SE33）的扩增片段长度多态性（Amp－FLPs）进行了研究。在210名无关中国个体中观察到了25个等位基因，等位基因频率分布在0．007～0．093之间。基因型的分布符合Hardy－Weinberg定律，个体识别能力（DP）值为0．99，杂合度（H）为98．7％。七个家系分析的结果表明，该位点的遗传符合孟德尔遗传法则，未观察到变异。对几种常见的法医物证检材的分析表明，该分型系统对DNA降解放为严重的检村适用性强，而且灵敏度高（0．5ng），适合于法医学实际应用。     

线粒体DNA短片段复合扩增系统鉴别种属的研究

目的建立线粒体DNA短片段复合扩增体系用于种属鉴定的方法。方法提取人、牛、猪、羊、鸡的DNA,用所选的3对引物复合扩增细胞色素b基因（cyt b）片段、16srRNA基因片段和ND4基因片段,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测。结果人DNA扩增产物在358bp、157bp和110bp处各出现一条带;动物DNA扩增产物均只有358bp一条带。结论线粒体DNA短片段复合扩增鉴别种属的方法可区分人源性生物检材和其它动物样本,可应用于法庭科学实践。     

D3S1358等7个DNA位点的荧光法在法医学中的应用

报道了D3S1358、D16S539等7个DNA位点的复合扩增和四色荧光分析技术。经310自动测序仪检测7个位点 ,实现了STR位点同步扩增和自动检测目的。同一性实验表明 ,同一个体肌肉、血液、唾液和头发等组织STR位点基因型完全一致。对2个四代家系、3个三代家系的调查结果表明 ,这些位点符合孟德尔遗传定律。D3S1358、D16S539等7个位点对陈旧、微量的检材适用性很强,灵敏度达75pg ,在法医个人识别和亲子鉴定中有着重要意义     

成都地区汉族人群D2S441位点的遗传多态性研究

为研究 STR位点 D2S441的遗传多态性,为法医学应用提供基础数据,应用 PCR及 PAG电泳技术对 260名成都地区汉族无关个体进行了调查,共检出 9个等位基因及 26种基因型,首次获得汉族群体频率分布 ,其等位基因片段大小范围为 131～ 155bp。该位点基因型频率分布符合 Hardy－ Weinberg平衡。家系调查证实了等位基因的传递遵循孟德尔遗传规律。其个人识别能力（ Dp）、杂合度（ H）、多态性信息含量（ PIC）和非父排除率（ PE）分别为 0.9084、 0.7885、 0.7390和 0.5778,表明该位点在法医学个人识别及亲子鉴定中具有较高的实用价值。     

D8S1179位点扩增不平衡

短串联重复（shorttandemrepeat，STR）是目前法医学上个体识别中应用最广泛的遗传标记。STR的分型多数采用扩增片段长度多态性（amplifiedfragmentlengthpolymorphism，Amp－FLP）分型技术。由于各种原因，不同的STR等位基因的PCR扩增效率并不总是相等，使杂合子个体的两个等位基因间可能出现扩增不平衡的现象。本文报道４例D８S１１７９位点扩增不平衡的现象。１材料与方法１．１标本来源４个血样本的DNA用酚／氯法提取。１．２D８S１１７９位点的分型１．２．１聚丙烯酰胺凝胶银染法检测引物按照STRBase（http：／／www．cstl…     

同步分型16个STR位点及法医学应用研究

为提高法医学鉴定中单次检测信息量,探讨建立了同步检测16个STR位点方法.应用同步扩增、同—PAC板电泳分离银染,同时完成16个STR位点分型.16个位点的累计非父排除率0.99999878,平均匹配概率4.30×10~(-18).收集亲子鉴定328例,个人识别62例,均获较满意的结论.对同步分型16个STR位点的方法、法医学应用特点等作了讨论.     

扩增TP53内含子8用于生物检材的种属鉴定

目的扩增常见动物TP53内含子8片段,确定其在法医学生物检材种属鉴定中的应用价值。方法收集标本为包括人在内的15种常见动物的血痕或肌肉组织,提取DNA后定量,应用PCR扩增TP53内含子8,PAGE电泳,银染后观察结果。结果人和猕猴都扩增出一条长度为460bp的片段,鳝鱼、鲢鱼、青蛙、鸭、兔、猫、小白鼠、豚鼠、猪、牛、羊虽有扩增产物,但不在分型区内,鸡、狗未见扩增产物。结论扩增TP53内含子8进行种属鉴定,方法简单,灵敏度较高。     

复合扩增mtDNA-HVI和Cyt b片段鉴定混合血痕种属

目的探讨mtDNA-HVI和Cyt b片段复合扩增法鉴定人与动物混合血痕种属的应用价值。方法用chelex-100法从人、牛、猪、狗、兔、鱼、鸡和鼠血痕中提取DNA,复合扩增mtDNA-HVI片段和Cyt b片段,琼脂糖凝胶电泳检测。结果人类在mtDNA-HVI区和Cyt b区分别出现279bp和358bp各一条带,且279bp条带亮于358bp;动物均只有358bp一条带。人与7种动物血痕的检测灵敏度均为3.13ng。检测人与动物混合DNA,灵敏度仍为3.13ng,但358bp条带亮于279bp条带。结论当358bp带明显强于279bp带时,提示检材为人与动物的混合。     

STR系统HUMCSF1PO-HUMTPOX-HUMTH01三位点复合扩增在上海地区的频率分布

STR（ShortTandemRepeat）短串联重复序列多态性又称微卫星（Microsatellite）DNA多态性，通常由某个位点3～7个碱基对的重复数目差异构成，用PCR方法扩增STR位点的技术为个体识别提供了又一有效方法。由于STR片段相对较短（＜500bp），更适用于法医实践中已降解的DNA样品的需要；由于多个STR位点可以复合扩增，又较符合法医检案中DNA样品通常是很微量的实际，因此该技术已广泛地受到法医界的关注。国外已有对HUMTH01、HUMvWA、HUMF13A1、HUMFES等位点的研究报道，国内也已开始了一些工作。我们参照美国Promega公司的方…     

5个miniSTR基因座遗传多态性及其在降解检材中的应用

STR遗传标记已广泛运用于法医学领域的个人识别及亲子鉴定.常规STR分型试剂盒主要适用于片段长度为100～450bp长度的DNA,对于DNA大部分已经断裂的严重降解的样品,常常不能得到理想的分型结果.     

三个单位点DNA杂交联合应用的研究

本文从一些多态位点中筛选出在中国人群中，对于同一种限制酶HaeⅢ酶解都能检出良好多态性的三个单位点探针（PMLJ14、PYNH24、α－globin－3’HVR）。对这三个位点的等位基因频率进行了调查．用DNA指纹自动识别系统进行了数据处理，各位点的数据如下：PMLJ14、杂合度94％，等位基因频率分布0．002～0．051；PYNH24：杂合度89％，等位基因频率分布0．003～0．152；α－globin-3’HVR：杂合度78％，等位基因频率分布0．003～0．077。分析15个家系，未见到变异发生，符合孟德尔遗传规律。这三个位点个人识别中的累加机率是：1．7×10-5～2．1×10-14。     

短串联重复vWFⅢ扩增片段长度多态性在法医学应用的可行性研究

目的探讨STR位点vWFⅢ用于法医学鉴定中的实用价值。方法应用聚合酶链式反应（PCR），聚丙烯酰胺凝胶电泳结合染银显带的分离方法对STR位点vWFⅢ扩增片断长度多态性进行研究。结果经过优化筛选掌握了该位点的最适扩增条件，其对各类检材均获得稳定可靠的扩增产物。本方法的灵敏度达10pg基因组DNA、0．5μl全血、1μl新血痕、0．1μl精液、0．2μl新鲜精斑。结论本方法快速、灵敏、准确，在法医学个人识别和亲子鉴定中具有推广应用的价值。     

亲子鉴定DNA分型亲权指数的简化计算法

PCR扩增DNA片段长度多态性位点，如AmP－FLP、PCR－STR分型技术，在亲子鉴定中应用日益增加。由于被选择应用的DNA位点均具高杂合度、高非父排除率，以及PCR技术取材广泛、灵敏度高等特点，PCR－DNA分型有。逐步取代常规血型检测的趋势。PCR－DNA分型结果表明，杂合子个体呈2条片段，纯合于及条片段，等位基因为共显性遗传，位点均具有不连续基因频率分布。所以，亲权指数计算并不复杂。本文依据单位点DNA分型特发，根据Esse。M6ller计算理论，提出一套简明亲权指数计算公式。同时对父子单亲亲子鉴定的亲权指数计算公式也作…     

云南白族人群DIS80位点扩增片段长度多态性研究

本研究采用扩增片段长度多太性(Amp—FLP)分析技术，对116名云南白族人DIS80位点进行检测。共检出19个等位基因，52种基因型。扩增片段大小分布于340～780bp之间，基因频率分布为0．0043～0．2424，杂合度为85.34%，个人识别半(DP)为0．9606。     

法医DNA标准物质备选细胞STR等位基因片段长度的定值

目的 研究建立法医DNA标准物质备选细胞基因组STR基因座等位基因片段长度标准定值的方法.方法 利用有机法提取HPF和HSSM细胞基因组DNA并进行STR复合扩增,将产物进行电泳检测.利用Gene Mapper软件分析电泳结果,记录STR基因座等位基因的数值,并对目前我国公安系统应用较为广泛的DNATyperTM15、IdentifilerTM两种试剂盒扩增产物进行相应的DNA片段长度(bp)统计以及定值.结果 HPF为男性个体细胞,HSSM为女性个体细胞.HPF和HSSM细胞DNATyperTM15系统等位基因片段长度范围分别为126.26±0.05～367.53±0.20bp和125.33±0.07～370.08±0.17bp,IdentifilerTM系统等位基因片段长度范围分别为117.22±0.04～340.02±0.08bp和117.21±0.03～323.86±0.09bp.结论 对STR基因座等位基因片段长度进行标准定值,可为法医DNA标准物质提供有效的溯源途径.     

中国人p33.6位点的扩增片段长度多态性

用PCR、小型聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法对小卫星区域p33.6(D1S111)位点的扩增片段长度多态性(Amp—FLP)进行分析和对100例无关中国人p33.6位点的等位基因频率进行调查及数据处理,发现该位点核心序列重复数从9到22之间的全部14个等位基因,片段长度分布于435～925bp之间,基因频率为0.5～35.5％,杂合度为76％。对6个家系共22名相关个体进行分析,符合孟德尔遗传定律;对人体各种不同组织DNA进行该位点的分析,显示出高度的一致性。该位点适用于法医学上的个人识别以及亲子鉴定。     

pYNZ22位点扩增片段长度多态性法医应用的研究

对120名中国人进行pYNZ22位点扩增、银染检测，已找到11个等位基因，频率分布于0.4～30.4％，片段长170bp～870bp，相邻等位基因长度相差70bp，杂合度为73％，DP值为0．938。分析了五个家系均符合孟德尔定律。同一个体的血液、血斑、精液、混合斑中分离出的精子、毛囊、唾液及其它有核细胞组织的DNA多次进行pYNZ22位点扩增，得到一致的结果。灵敏度达到0．5ng核DNA。     

荧光标记短片段STR复合扩增系统的法医学应用研究

目的解决严重降解(低于300bp)DNA检验问题,提高降解DNA的检出率。方法重新设计引物,减小扩增产物片段长度,用荧光标记短片段STR复合扩增体系进行DNA检验,扩增结果与用Identifiler试剂盒扩增出的结果进行比较。结果用荧光标记短片段STR复合扩增系统对实际案件中的高度降解DNA检材进行检验,可以获得满意分型。结论该系统可用于严重降解DNA检材的检验工作。     

扩增12S rRNA基因鉴定生物检材种属

目的建立一种能够在同一反应条件下鉴定多个具体物种．又满足简单、快速、特异、灵敏、准确等实用要求的种属鉴定方法。方法从GenBank中获取人、鸡、鸭、鹅、猪、兔、鼠、绵羊、水牛、狗、山羊等11个物种的12SrRNA基因序列．设计一对针对上述11个物种的通用引物和分别针对人、鸡和鸭的特异引物,同时扩增各物种12SrRNA基因。以通用引物扩增片段为内部对照．以特异引物扩增片段用于人、鸡和鸭的种属鉴定,并分别对人、鸡、鸭单一检材以及人和鸡、人和鸭、鸡和鸭等二元混合DNA进行鉴定。结果通用引物扩增,各物种均有400bp左右的扩增片段：特异引物只对各自目标种属有扩增产物,片段大小：人163bp、鸡286bp、鸭374bp;测序结果与GenBank既有序列比对,Identities分值：人100％、鸡99％、鸭100％;通用引物扩增人、鸡和鸭检材的灵敏度为2．5Pg;特异引物扩增灵敏度人为2．5pg,鸡、鸭均为200Pg;混合DNA中任一种DNA的含量只要高于检测灵敏度即可被准确检出．不受另一种DNA量的干扰：盲测结果准确。结论本方法可以利用同一种PCR反应条件鉴定多个物种的种属。