用PCR扩增X-Y-特异片段性别鉴定的研究

采用5%Chelex-100处理方法提取 DNA,用 PCR 扩增 Amelogenin 基因片段检测血痕和毛根的性别。扩增一个样品只需1/10体积3mm~2血痕 Chelex-100处理液或1/10体积一根毛发 Chelex-100处理液(含模板 DNA)。100例血液样品结果显示,在男性可同时显现977bpX 特异片段和788bpY 特异片段,而在女性只观察到977bp X 特异片段,该方法用于性别鉴定可靠、灵敏、方便。     

用引物Y_3,Y_4和DNA扩增技术作血液(痕)和毛根性别鉴定的研究

作者用引物Y_3、Y_4和DNA聚合酶链式反应(PCR)作微量人类血液(痕)和毛根的性别鉴定。扩增的靶序列位于Y染色体DNA特异3.4kb重复序列中,扩增产物为460bp。检材用量为:新鲜血液0.5μl、血痕纱纤维1mm、毛根单个。20例保存4个月的血痕与2例保存6年半的血痕性别判定结果均正确,无性别记载的保存9～11年的3例血痕显现了清晰的460bpY特异DNA扩增带。15例保存20天的自然脱落毛根性别判定结果均正确。本法省略了检材处理中的酚-氯仿抽提DNA等纯化步骤,既简化了实验操作,又减少了检验过程中外源DNA的污染机会和样品DNA的损耗,使这一性别鉴定方法更符合法医学实践的需要。     

线粒体16srRNA和ND4基因在种属鉴定中的应用研究

目的构建一种用于种属鉴定的线粒体DNA(m tDNA)16 srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增检测体系。方法利用引物设计软件(Prim er 5)对两个m tDNA序列ND4基因和16 srRNA基因设计两对引物,每对引物中的一条在5’端标记荧光素(6-FAM)。按传统复合扩增技术建立复合扩增体系,用AB I PR ISM 310基因分析仪对产物进行分析。结果人类DNA扩增产物出现两个峰,片段大小分别为110bp的人类特异片段和149bp的人与动物共有片段,而动物DNA扩增产物出现一个峰,片段大小为149bp。对30个实验室存放5~15年的陈旧人血痕也能明确判断其种属来源。结论该体系可以明确区分人源性生物检材与其它常见动物样本,对实验室长期存放的陈旧检材也具有较好的检测能力。     

扩增X—Y同源Amelogenin基因内含子在性别鉴定中的应用研究

本文用一对针对X－Y同源的Amelogenin基因第一内含子的引物，于同一试管中分别扩增出针对于x和Y染色体的特异性DNA片段：106bp及112bp的PCR产物，经聚丙烯酰胺凝胶电泳后用银染法观察扩增结果，取得了满意的效果．对50pgDNA模板室温放置16年的血痕及单根毛发、烟头等检材均可得到明确的性别鉴定结果．本实验证明该方法简便、灵敏、可靠、特别适用于腐败降解检材的法医学性别鉴定．     

用X-Y同源引物扩增鉴定人血痕性别的研究及应用

本文根据牙釉蛋白(Amelogenin)基因在x染色体第一内含子有6bp缺失的特性,用一对x-y同源引物.扩增x-y染色体特性DNA片段分别为106及112bp,并用PAGE电泳银染显带的方法检测扩增产物.本方法灵敏度高,实用性强.可对2mm~2血痕检材提取的DNA液1/10作出性别判定.对现场提取的生物检材.特别是微量、腐败、陈旧检材,均能较好的作出性别鉴定.室温放置16年的血痕也可检验.实际检案显示本方法简便、有效、无毒,易于推广.     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的 建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。方法 采用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置5－15年的男、女血痕标本各50例、毛发各20例、骨骼各20例以及现场提取5－－20天的男、女腐败肌肉各10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PGA（9％T,3％C）电泳、银染显带检测扩增产物。结果 所有样本均得到正确结果,男性检材表现为83bp的Y特异性及80bp的X特异性2条谱带,而女性检材仅有1条80bp的X特异性谱带。结论 用针对amelogenin基因X染色体外显子3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

一种用于降解DNA样本的性别鉴定方法

目的　建立一种采用PCR技术对降解DNA样本进行性别鉴定的新方法。　方法　采用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1,对在室温环境下放置 5～ 15年的男、女血痕标本各 5 0例、毛发各 2 0例、骨骼各 2 0例以及现场提取 5 - - 2 0天的男、女腐败肌肉各 10例标本中提取的降解DNA样本进行扩增。用PAG( 9%T ,3 %C)电泳、银染显带检测扩增产物。　结果　所有样本均得到正确结果 ,男性检材表现为 83bp的Y特异性及 80bp的X特异性 2条谱带 ,而女性检材仅有 1条 80bp的X特异性谱带。　结论　用针对amelogenin基因X染色体外显子 3bp缺失设计的引物AMELU1及AMELD1鉴定性别的方法灵敏、可靠、方便 ,是降解DNA检材性别鉴定十分理想的方法。     

用Y—染色体特异DNA探针鉴识微量干血痕性别的研究

法医鉴识干血痕性别,通常是用盐酸阿地平染色观察 Y—小体的方法。重组 DNA 技术的发展与应用,为法医物证检验开辟了新的领域。本文用 Y—染色体特异 DNA 探针鉴识干血痕性别的成功,为法医的血痕性别签定,提供了一种新的检验方法。     

用引物Y_3、Y_4和PCR方法鉴定性别的法医学应用

用Y3、Y4和Alu9．1、Alug．2两对引物和PCR方法检测陈旧血痕和毛根的性别获得成功。引物Y3、Y4扩增的靶序列位于Y染色体特异3．4Kb重复序列中，扩增产物为460bp；引物Alu9．1、Alu9.2用以扩增男女共有的Alu重复序列，扩增产物为130bP。室温保存13年之久的19例脐带血血痕（男性9冽，女性10例）和室温保存10～11个月的10例已知性别自然脱落毛根（男性6例，女性4例）的性别测定结果均正确；对一起凶杀案的血痕性别测定为定案提供了重要证据。本方法简化了样品的前处理过程。     

扩增Amelogenin基因用于生物检材种属鉴定

目的扩增Amelogenin基因测定血痕或组织的种属,以确定在法医学检验中的应用价值。方法收集猪、羊、马等10几种常见动物的血痕或肌肉组织,应用PCR扩增Amelogenin基因,PAGE电泳,银染后观察结果。结果哺乳动物猪、牛、狗、羊、马、驴动物血痕扩增产物为1条带,片段长度102bp。猕猴检见106bp和112bp两条带,与人血痕没有区别。兔、猫、鼠血痕未检出特异性片段。其它常见物种鳝鱼、青蛙、鸭、鹅、鸽、鹌鹑、麻雀等均未见扩增产物。结论扩增Amelogenin基因进行种属鉴定,方法简单,灵敏度高,可应用于法医检案。     

体外DNA扩增技术鉴定血痕性别三例报告

本文报道用体外DNA扩增技术对3例刑事案中的人血痕标本进行性别鉴定。其方法是从血痕标本中微量抽提DNA,用蛋白酶K进行消化。然后用两组引物Y1.1与Y1.2和Alu9.1与Alu9.2及国产FD耐热DNA聚合酶进行聚合酶链反(PCR)扩增DNA,电泳分析Y及Alu重复序列,从而判断血痕的性别。     

Sex determination of human blood micro-stains and single hairs using specific DNA amplification with polymerase chain reaction

Amplification of Y chromosome specific DNA in vitro enables a rapid and reliable sex determination of human minute traces such as blood stains and hairs. In presence of male DNA a band of 154 bp is visualized by agarose gel electrophoresis after amplification, this band is lacking in case of female DNA alone. Amplification of a sex independent DNA locus (such as a fragment from the alcohol dehydrogenase gene) generates identical reaction products for both sexes. This shows that the absence of a band is not due to the lack of trace DNA. It is possible to perform this technique with as little as 0.5 microliters of blood or with a single hair.     

考古样品中Amelogenin同源基因的提取和检测

目的利用人类性染色体Amelogenin同源基因在X、Y染色体上序列长度的差异,选择设计引物,对考古样本进行古DNA性别信息研究。方法采用苯酚/氯仿-二氧化硅-超滤离心方法提取东岭墓葬群殉人骨骼、牙齿古DNA,PCR扩增,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离和检测古DNA扩增片段。结果8个墓葬16个样品中有7个样品出现阳性扩增检测,目标基因片段清楚,男性为二条带(X、Y),女性为一条带(X),牙齿样品检测成功率优于骨骼样品。结论改进的苯酚/氯仿—二氧化硅—超滤分离法是较好的古DNA提取方法,具有降低PCR抑制剂、消耗成本低和提取成功率高等特点。基于人类X、Y染色体Amelogenin同源基因的古DNA性别分析方法可成为分子考古重要的技术方法。     

DNA的apoB位点扩增片段长度多态性的检测及其在法医学中的应用

用PCR方法对100例无关个体血样的apoB位点扩增片段进行研究,已发现有11个等位基因,片段长度分布于600～1100bp之间,基因频率为0.005～0.525,杂合度为70％。家系分析及对人体血液、血斑、精液、精斑、混合斑、带毛囊毛发及其它各种有核细胞组织的研究表明,该技术在个人识别及亲子鉴定上均能发挥重要作用。     

复合扩增mtDNA-HVI和Cyt b片段鉴定混合血痕种属

目的探讨mtDNA-HVI和Cyt b片段复合扩增法鉴定人与动物混合血痕种属的应用价值。方法用chelex-100法从人、牛、猪、狗、兔、鱼、鸡和鼠血痕中提取DNA,复合扩增mtDNA-HVI片段和Cyt b片段,琼脂糖凝胶电泳检测。结果人类在mtDNA-HVI区和Cyt b区分别出现279bp和358bp各一条带,且279bp条带亮于358bp;动物均只有358bp一条带。人与7种动物血痕的检测灵敏度均为3.13ng。检测人与动物混合DNA,灵敏度仍为3.13ng,但358bp条带亮于279bp条带。结论当358bp带明显强于279bp带时,提示检材为人与动物的混合。     

扩增12S rRNA基因鉴定生物检材种属

目的建立一种能够在同一反应条件下鉴定多个具体物种．又满足简单、快速、特异、灵敏、准确等实用要求的种属鉴定方法。方法从GenBank中获取人、鸡、鸭、鹅、猪、兔、鼠、绵羊、水牛、狗、山羊等11个物种的12SrRNA基因序列．设计一对针对上述11个物种的通用引物和分别针对人、鸡和鸭的特异引物,同时扩增各物种12SrRNA基因。以通用引物扩增片段为内部对照．以特异引物扩增片段用于人、鸡和鸭的种属鉴定,并分别对人、鸡、鸭单一检材以及人和鸡、人和鸭、鸡和鸭等二元混合DNA进行鉴定。结果通用引物扩增,各物种均有400bp左右的扩增片段：特异引物只对各自目标种属有扩增产物,片段大小：人163bp、鸡286bp、鸭374bp;测序结果与GenBank既有序列比对,Identities分值：人100％、鸡99％、鸭100％;通用引物扩增人、鸡和鸭检材的灵敏度为2．5Pg;特异引物扩增灵敏度人为2．5pg,鸡、鸭均为200Pg;混合DNA中任一种DNA的含量只要高于检测灵敏度即可被准确检出．不受另一种DNA量的干扰：盲测结果准确。结论本方法可以利用同一种PCR反应条件鉴定多个物种的种属。     

pYNZ22位点扩增片段长度多态性法医应用的研究

对120名中国人进行pYNZ22位点扩增、银染检测，已找到11个等位基因，频率分布于0.4～30.4％，片段长170bp～870bp，相邻等位基因长度相差70bp，杂合度为73％，DP值为0．938。分析了五个家系均符合孟德尔定律。同一个体的血液、血斑、精液、混合斑中分离出的精子、毛囊、唾液及其它有核细胞组织的DNA多次进行pYNZ22位点扩增，得到一致的结果。灵敏度达到0．5ng核DNA。     

焦磷酸测序分析短片段牙釉质蛋白基因进行性别鉴定

目的采用焦磷酸测序技术分析短片段牙釉质蛋白基因进行性别鉴定并用于骨骼及腐败生物检材的检测。方法应用blast软件,确定牙釉质蛋白基因(Amel)上1段含有3个SNP位点及1个插入/缺失(indel)位点的序列作为待测靶序列,设计引物,扩增该段序列,应用焦磷酸测序技术分析扩增序列,进行性别鉴定。对方法进行准确性、灵敏度、种属特异性的测试,并用于对骨骼和高度降解DNA的检测。结果 PCR产物分别为44bp(Amel X)和45bp(Amel Y),女性测序结果为:G/G,T/T,…/…,C/C,男性测序结果为:G/T,T/A,…/C,C/A,分型图谱清晰。应用本文方法检测100份已知性别的DNA样本,结果均正确无误,方法最低DNA模板量为0.5ng,具有较好的人类种属特异性。用于高度降解DNA分析,较IdentifilerTM试剂盒具有更高的成功率且骨骼样本也得到清晰的分型结果。结论本文采用焦磷酸测序技术分析Amel的方法在法医学性别鉴定中有较好的应用价值。