1,5-AG在高糖代谢兔尸体玻璃体液中的变化

目的 了解1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-anhydroglucitol,1,5-AG)在高糖代谢兔尸体玻璃体液中的浓度水平及变化特点,探讨1,5-AG在高糖代谢紊乱所致死亡的法医病理学中的鉴定价值。方法 采用四氧嘧啶建立糖尿病高血糖兔模型,选取18只空腹血糖浓度≥13.80 mmol/L的糖尿病高血糖兔(实验组)和18只空腹血糖浓度≤6.10 mmol/L的健康兔(对照组),采用空气栓塞处死,即刻采集血液,于死后0、12、24、36 h采集玻璃体液,检测兔血液及玻璃体液中1,5-AG的质量浓度。结果 实验组血糖浓度为(25.10±3.14)mmol/L;1,5-AG质量浓度在死亡即刻血浆中[(0.94±0.20)μg/mL]与玻璃体液中[(0.99±0.05)μg/mL]差异无统计学意义(P>0.05)。实验组各时间点玻璃体液中1,5-AG质量浓度低于相应对照组(P<0.05),实验组及对照组各时间点玻璃体1,5-AG质量浓度差异无统计学意义(P>0.05)。对照组和实验组兔血浆中1,5-AG质量浓度与血糖浓度均呈负相关(对照组r=-0.79,P<0.05;实验...     

顶空固相微萃取与气质联用快速检测尿液中氯胺酮及去甲基氯胺酮

目的建立利用顶空固相微萃取（HS／SPME）结合气相色谱／质谱联用技术（GC／MS）快速检测吸毒人员尿液中氯胺酮（KT）及其主要代谢物去甲基氯胺酮（NK）的方法。方法样品瓶中加入尿样、6mol／L氢氧化钠溶液、固体氯化钠、SKF525A（内标），85℃下加热搅拌，用100μm聚二甲基硅氧烷（PDMS）萃取头顶空萃取10min，GC／MS（EI-SIM）检测。结果尿液中NK和KT浓度在0．1～2．0μg／ml范围内呈现线性关系，相关系数分别为（r^2）0．9991和0．9945，检测限（D／N=3）分别为0．87ng／ml和2．76ng／ml，定量限（S／N=10）分别为2．90ng／ml和18．52ng／ml。1ml尿液加标600ng，NK回收率在85．5％～110．1％，RSD〈13．2％（n=6）；KT回收率在77．5％～109．6％，RSD〈511．99％（n=6）。结论建立的方法简单、快速、灵敏、准确，适合尿液等生物检材中NK及KT的快速定性定量分析。     

汽车防冻液中毒致死1例

正1案例1.1简要案情某男,26岁,失联3d后独自开车回家。回家时神志欠清、口鼻流血,自述喝了汽车防冻液,当天被其母亲送往医院救治。入院当天检查:尿蛋白(+++),尿隐血(+++),尿肌酐693μmol/L(正常参考值58~110μmol/L),血氨99μmol/L(正常参考值9~33μmol/L),血钙2.17mmol/L(正常参考值2.10~2.55mmol/L),总     

“菲迪克”的滥用及其对甲基苯丙胺分析的干扰

目的：消除麻黄减对甲基苯丙胺分析的干扰。方法：在甲基苯丙胺的提取过程中增加氧化步骤，即2ml尿样用0．5ml1mol／L的磷酸缓冲液（pH6．8）和0．5ml0．3mol／L高碘酸钠处理。结果：麻黄碱在高碘酸离子的存在下降解为小碎片而甲基苯丙胺则不受影响，从而消除麻黄碱的干扰。结论：样品提取前用高碘酸钠处理可消除麻黄碱引起的干扰，该样品处理方法可用于甲基苯丙胺的确证分析。     

Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA，应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量，同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为：37份滤纸、纱布血痕0．042～5．28ng／μl，16份口腔拭子1．15—4．21ng／μl，18份烟头0．016～1．46ng／μl，10份肋软骨0．531—14．40ng／μl，8份肌肉5．75—24．80ng／μl，7份指甲0．788—11．50ng／μl，17份精斑0．79～99．50ng／μl。在建立的8μl扩增体系中，根据上述结果，调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0．5—3ng之间，大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0．5—3ng之间可得到有效STR扩增，浓度为0．5ng／μl以上的DNA样品，用小体积模板（1μl）比大体积（3μl）模板扩增效果好。     

乙醇与乌头碱联合染毒对大鼠心肌细胞RYR2的影响

目的研究不同浓度乙醇与乌头碱联合染毒对大鼠心室肌细胞RYR~2蛋白表达的影响。方法用优化的方法进行新生大鼠心室肌细胞原代培养,设置4组实验组,分别为A、B、C、D组,即分别用1μmol/L乌头碱、5mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱、50mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱以及100mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱进行染毒,同时设立对照组(E组)。染毒1h后,用Western blot技术检测RYR~2蛋白含量,重复实验,将对所得数据进行统计分析。结果 1μmol/L乌头碱作用1h,使培养的大鼠心肌细胞RYR~2蛋白量增加;5mmol/L乙醇、50mmol/L乙醇分别与乌头碱联合染毒组中RYR~2蛋白表达量均较单独乌头碱染毒组低;100mmol/L乙醇-乌头碱联合染毒组RYR~2蛋白量与单独乌头碱染毒组相较未见明显差异。结论乙醇-乌头碱联合染毒对RYR~2的蛋白量有明显影响,不同浓度乙醇与乌头碱联合染毒对RYR~2的影响效果不一致,低浓度乙醇能拮抗乌头碱引起的RYR~2含量增加,随着乙醇浓度逐渐升高,拮抗作用逐渐减弱,且有向协同作用转化的趋势。     

毛干mtDNA单倍型母系家系排查法侦破命案

笔者在实践工作中遇到利用受害者指尖粘附微量毛干线粒体DNA(m tDNA)测序的多态信息,最终成功侦破一起命案,现报道如下。1材料与方法1.1简要案件及样本DNA的提取2008年9月某市发生一命案,现场提取死者(杨某,女)指尖粘附约1cm长毛干及胸部、膝关节上毛发各1份;杨某丈夫(王某)和杨某血痕,编号1~5。按母系遗传关系排查的杨、金、何、刘姓嫌疑人血痕各1份,编号6~9。参照张纯斌等人[1]的方法提取毛干m tDNA;有机法提取血痕m tDNA。1.2巢式PCR扩增m tDNA高变区I(HVRI)15996-16401区域长片段的PCR扩增,上、下游引物序列为L15996:5-′CTCCAC-CATTAGCACCCAAAGC-3;′H16401:5-′TGTTTCACG-GAGGATGGTG-3′。15μL反应体系包括含镁离子10×PCR缓冲液1.5μL,5mmol/L dNTP1μL,1μmol/L正反向引物各1μL,0·2μL(5U/μL)TaqDNA聚合酶,0·5μLDNA(50ng/μL),余量用水补足。PCR反应条件:95°C变性2m in,94°C变性20s,58°C退火20m in,72°C...     

GC法检测血液和尿液中甲基苯丙胺和咖啡因

目的建立同时测定血、尿中甲基苯丙胺和咖啡因含量的方法。方法应用GC／NPD技术,以4-苯基丁胺为内标,直接碱化,用氯仿提取,三氟乙酸酐衍生化,8CB熔融石英毛细管柱（30m×0．25mm×0．25μm）分析。结果生物样品中甲基苯丙胺与咖啡因在0．012—7．5μg/mL浓度范围内线性关系良好,检测限（S／N=3）依次为1．2ng／mL,0．6ng／mL（血）;1．6ng／mL,0．8ng／mL（尿）。苯丙胺在0．017—10．0μg／mL浓度范围内线性关系良好,检测限为1．6mg／mL（血）,3．2ng／mL（尿）。所有样本回收率均大于85％。结论本方法准确、灵敏,适用于血、尿中甲基苯丙胺及其代谢物苯丙胺的三氟乙酸酐衍生化物和咖啡因的同时检测,为判定滥用毒品种类、追查毒品来源以及研究生物体内甲基苯丙胺和咖啡因的交互影响提供了检测手段。     

LC-MS／MS法测定人血浆中盐酸洛哌丁胺

目的建立人血浆中盐酸洛哌丁胺的液相色谱-质谱联用测定法（LC-MS／MS）。方法血浆样品中盐酸洛哌丁胺与盐酸小檗碱（内标）经甲醇液．液提取后,采用ZORBAXSB—C18色谱柱（2．1mm×150mm×5μm）,柱温35℃,流动相为乙腈：0．1％甲酸（60：40,V／V）,流速为0．4mL／min,进样量10μL。电喷雾离子源（ESI）,正离子检测,以多反应监测（MRM）方式进行定量分析,用于监测的离子为m／z477→266（盐酸洛哌丁胺）和m／z366→292（内标）。结果盐酸洛哌丁胺的检测下限为0．2ng／mL（S／N=3）,在浓度0．5～500ng／mL范围内线性良好（r=0．9982）,低、中、高浓度（1ng／mL、20ng／mL、400ng／mL）的平均回收率分别为84．6％,88．5％和90．2％,日内与日问RSD分别小于6％与7％。结论LC—MS／MS法可用于盐酸洛哌丁胺的定性定量分析。     

UPLC—MS／MS法测定人血中雪上一枝蒿甲素

目的建立超高效液相色谱-串联质谱（UPLC—MS／MS）法测定人血中雪上一枝蒿甲素含量的方法。方法样品经乙酸乙酯提取后,Ci8柱分离,以0．1％甲酸乙腈-0．1％甲酸水为流动相梯度洗脱,正离子-多反应离子监测模式（ESI＋-MRM）测定雪上一枝蒿甲素,定性定量离子对分别为344．3／58．0、344．3／91．0。结果雪上一枝蒿甲素在3．5～850ug／L-1。范围内与峰面积呈现良好的线性关系（r=-0．9968）,检测限为0．1Iμg／L-1,日内、日间精密度均〈10％,低、中、高三个浓度下准确度（n=5）为97．2％-115．2％,回收率（n=5）为86．6％~89．4％。结论该方法操作简便,结果准确,可作为测定人血中雪上一枝蒿甲素含量的方法。     

高效液相色谱法测定小鼠血清中可卡因的含量

目的 建立一种测定血清中可卡因含量的高效液相色谱方法。方法 以0.04mol/L磷酸盐缓冲液(含有0.26 mmol/L四丁基胺盐,pH3.2)-乙腈(83:17)为流动相,血清样品采用2％异戊醇正己烷-0.1 mol/L HCl液液反萃取法处理,用Kromasil C18色谱柱分析血清中可卡因的含量。紫外检测波长为235nm。结果可卡因的最小检出浓度为25ng/ml,回收率71％。结论所建方法测定血清中可卡因含量灵敏度高,简便易行。     

LC/MS分析血浆中丁丙诺啡

目的建立血浆中丁丙诺啡液相色谱/质谱（LC/MS）分析方法。方法在含有丁丙诺啡的血浆中,加入内标奋乃静,加pH10.8缓冲溶液,用401有机担体作吸附剂、三氯甲烷作洗脱剂固相萃取,N2挥干,用50μL流动相定容后进行LC/MS分析。色谱条件：Thermo Hypersil-HyPURITY C18（150×2.1mm,5μm）,柱温：40℃,流动相：10mmol/LNH4AC（pH3.4）∶甲醇∶乙腈=36∶52∶12,流速：0.22mL/min。结果方法的线性范围为0.05～5.0μg/L（r=0.9998）,定量限0.05μg/L,检出限0.01μg/L（S/N=3）;3个浓度的质量控制样品（0.1μg/L,0.5μg/L,2.0μg/L）平均回收率分别为86.40%,92.72%,92.57%,RSD分别为4.51%,3.34%,2.09%。结论该方法操作简便、灵敏度高,可用于涉毒案件血浆中丁丙诺啡的分析。     

全血中苯骈二氮杂类药物的胶束电动色谱法分析

目的建立用固相萃取胶束电动毛细管色谱法测定人体全血中苯骈二氮杂艹卓类药物的方法。方法全血以Oasis小柱提取,以克仑特罗为内标,采用未涂层毛细管(75μmID×50.2cm,有效分离长度为40cm),缓冲液为30mmol/LSDS→15mmol/L硼砂→15mmol/L磷酸盐(pH8.2)→18%甲醇。进样条件:压力进样0.5psi×10s,分离电压为25kV,柱温25℃,检测波长为230nm。结果本法分离效率高,9种苯骈二氮杂艹卓类药物的最低检测浓度为5～50ng/ml;血药浓度的线性范围为0.02～1.6μg/ml,日内、日间精密度<12%。结论本法简便、高效、可靠。     

乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响

目的探讨乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响。方法新生SD大鼠20只,随机分为4组,取心室肌以差速贴壁法原代培养心室肌细胞。培养第6天,制成密度为2×105个细胞/mL的细胞悬液,分别加入乌头碱混合液至终浓度为0.1、0.5、1、2μmol/L,染毒30m in;采用彗星电泳技术及CASP分析软件,检测不同浓度乌头碱染毒后心室肌细胞DNA损伤程度。结果心肌细胞被不同浓度乌头碱染毒后,尾部DNA含量、彗尾长度、尾矩、O live尾矩均随乌头碱浓度增加而升高,头部DNA含量则逐渐降低,与对照组相比,有显著性差异(P<0.01);乌头碱染毒剂量越大,心肌细胞DNA损伤越严重。结论乌头碱染毒引起细胞DNA断裂损伤呈明显的剂量—效应关系,推测细胞DNA损伤是乌头碱毒作用机制之一。     

尿中氯胺酮及其代谢物盘鉴和GC/MS/SIM测定

目的 研究尿中氯胺酮(KET)及其代谢物去甲基氯胺酮(NKET)的盘鉴(Disk SPE)。方法 用含有化学键合C18和强酸型强阳离子交换(SCX)基团的萃取柱SPEC.C18 AR/MP3萃取,加入萃取柱前的尿样用0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH 6)稀释,洗脱溶剂为含2％(v/v)氨水的乙酸乙酯;以2,4,6-三硝基甲苯(TNT)为色谱内标,GC/MS/SIM检测。结果 在加标量为0.5μg/mL、2μg/mL和6μg/mL的控制尿样中,KET和NKET的平均回收率分别为91.5％和79.9％,6次测定的RSD均为8.7％;线性范围0.02-8μg/mL,线性相关系数分别为0.9819和0.9964;检出限(S/N=3)分别为6ng/mL和4ng/mL;总离子色谱图背景低,杂质少。同一根萃取柱重复使用8次以上未见性能下降;嫌疑尿样中检出KET和/或NKET,和常规的液液萃取结果相符。结论 该方法适用于尿中KET和NKET的同时测定。     

6个Y-STR荧光复合扩增系统的建立及应用

目的建立6个Y-STR荧光复合扩增体系,评价其法医学应用价值。方法设计DYS444,GATA-A7.2,GATA-A10,DYS390,GATA-A7.1,DYS443荧光复合扩增引物,扩增总体积20μL,内含模板DNA0.5～10ng,PCR产物用3130遗传分析仪电泳,GenemapperID v 3.2分析结果,根据等位基因标准命名各等位基因,并评价该系统的特异性、准确性、均衡性、灵敏度及对混合血样的分析能力。结果当dNTP、Mg2+分别为200μmol/L、1.5mmol/L时扩增效果最佳,0.5～10ngDNA模板量均能获得较好的扩增效果,各基因座分型结果清晰,扩增均衡,特异性强,重现性好,基本满足实际应用的性能要求。对湖北汉族群体进行遗传学调查,结果GD值0.580 3～0.722 3,共检出158种单倍型,其多样性为0.995 8。结论本文6个Y-STR扩增系统分型可靠,配合常用Y-STR分型试剂盒,可进一步提高个体识别能力。     

液相色谱-质谱联用同时检测17种常见毒品的定性分析方法

目的 建立同时检测17种常见毒品的液相色谱-质谱联用定性分析方法.方法 对海洛因、吗啡、冰毒、氯胺酮等17种毒品的色谱行为进行了研究,对流动相梯度程序和质谱参数进行了细致考察和优化.采用岛津Shim-pack XR-ODS（100mm×2.0mm,2.2μm）色谱柱,流动相A：0.3％甲酸;流动相B：0.3甲酸乙腈,梯度洗脱程序0min～3min～8min～15min～20min,3％B～18％B～23％B～93％B～93％B,雾化电压5kV,扫描速度3750u/sec,雾化气流量1.5L/min,干燥气流量10L/min.结果 所测17种毒品的21种组分均获得了良好的分离效果和质谱响应,scan模式下检测限（S/N≥3）1.9pg/μL～40.0pg/μL.结论 该方法快速、简便、高效,适合公安办案中对未知毒品进行定性检测.     

血液和尿液中草甘膦的净化富集及检测

目的建立血液、尿液中草甘膦的净化富集及定性定量方法。方法取适量血、尿样品,用80%甲醇水溶液稀释,经Agilent Accu Bond NH2（弱阴离子交换柱）净化富集,用3m L 5%氨水溶液洗脱后进行ESI/LC/MRM对草甘膦的定性及阴离子色谱法（IC）的定量检验分析。结果血液、尿液中草甘膦的IC法检验回收率均大于90%,方法的线性范围均在1-100μg/m L,血检测限为0.1μg/m L,尿液为0.08μg/m L。血液、尿液中草甘膦的LC/MRM的方法检测限均在5ng/m L左右。结论建立的血、尿中草甘膦的前处理方法和LC/MRM定性分析及IC定量分析方法,可满足司法检验要求。     

GC/MS法测定血液中的米氮平

目的采用液液提取-GC/MS法检测血液中米氮平。方法用0.1mol/L NaOH溶液调节血液pH值为8～9,以二氯甲烷∶环己烷(4∶6)混合溶剂作为提取溶剂,液液提取法提取血液中米氮平,外标法气相色谱/质谱联用仪定性定量分析。在2mL血中分别添加标准米氮平1、0.5、0.1μg,进行回收率测定。结果血液中添加米氮平的平均回收率为91.5%,方法的工作曲线为Y=1E+06X-16206,相关系数r=0.999 7,线性范围0.5～10μg/mL,最小检出限0.1μg/mL(S/N=46)。结论本文方法操作简便,适合于血液中米氮平的定性、定量分析,可在实际捡案中选择使用。     

A Case of Fatal Dehydration During Police Custody

In the forensic literature, fatal dehydration predominantly concerns young children or incapacitated elderly persons. The postmortem diagnosis of fatal dehydration can be challenging to confirm, especially if the preceding circumstances are unknown. Here presented is a case of a 23‐year‐old man who died while held in an isolation cell during police custody for 18 days. Autopsy findings were unspecific, but vitreous fluid analysis showed 192 mmol/L sodium, 179 mmol/L chloride, 16 mmol/L potassium, 352 μmol/L (3.98 mg/dL) creatinine, and 81 mmol/L (226.9 mg/dL) urea nitrogen. Based on the findings and circumstances, the cause of death was determined as severe dehydration and manner of death accident. This case illustrates the importance of performing postmortem biochemistry.