重庆地区汉族群体mtDNA控制区多态性研究

本文运用PCR直接测序法对重庆地区汉族群体m tDNA控制区多态性进行了调查。1材料与方法1.1材料随机采取110名重庆地区汉族人群无关个体指血。1.2仪器设备AB I3100遗传分析仪(PE公司);2400型PCR仪(PE公司)。1.3主要试剂B igDyeTMTerm inator v3.0试剂盒(PE公司);引物1L(5/-TTAGC     

微量PCR反应体系在两种试剂盒中的应用

美国AB I公司的Profiler PlusTM试剂盒和Identifi-lerTM试剂盒在当前法医DNA检案中应用广泛,但价格昂贵。本实验利用5μl体系进行PCR扩增取得满意效果,降低了检验成本。1材料与方法1.1材料法医DNA检案中常规检材,血痕、精斑、烟蒂和毛发(带毛囊)各20份。Profiler PlusTM试剂盒和IdentifilerTM试剂盒(AB I,USA)。1.2方法1.2.1 DNA提取上述检材采用Chelex-100法[1]提取模板DNA。取9mm2血痕加入5%Chelex-100150μl,56℃2h;精斑经两步法视镜检精子量多少酌情加入5%Chelex-100 150~250μl,PK 10μl(2mg/m l),DTT 10μl(1mol/L…     

武汉汉族人群MICA基因第5外显子STR遗传多态性

本文对武汉汉族群体M ICA-STR基因座遗传多态性进行了调查,现报道如下。1材料与方法1.1样品武汉地区235例汉族无关健康个体EDTA抗凝血由武汉同济医院血库提供。所有样品采用Chelex-100法提取DNA[1]。1.2引物M ICA-STR分型采用M izuki等[2]报道的引物,其中上游引物5′端用6-FAM荧光染料标记,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。1.3 PCR扩增及产物检测M ICA-STR扩增反应总体积为10μl,内含200μmol/L dNTPs,50mmol/L KC l,10mmol/L Tris-HC l(pH8.3),1.5mmol/LMgCl2,5~10ng模板DNA,0.2μmol/L每条引物,0.5U Ampl…     

河南汉族群体D4Satt、D5Saat miniSTR基因座遗传多态性

在法医学实践中,严重降解或者微量的生物检材采用STR分型,结果常不理想,而miniSTR技术是有效的一种检测方法[1]。本文从人类基因组DNA序列中查找并对D4Satt、D5Saat2个miniSTR基因座进行分型检测,希望可在日常法医学鉴定中作为核心STR基因座的补充[2]。1材料与方法1.1样本和DNA的提取134例河南汉族健康无关个体枸橼酸钠抗凝血样取自郑州市中心血站。采用酚-氯仿法提取DNA。1.2引物设计从GeneBank上下载4、5号染色体DNA序列,用Tandem repeats finder软件在距常用STR基因座较远的区域(50Mb以外)查找重复单位为3bp,连续重复12次以上的STR基因座。用Primer3软件设计引物,使扩增片段在150bp以内。引物由上海生工生物工程技术服务公司合成(表1)。1.3 PCR扩增及产物检测PCR扩增体系总体积20μL,包括1ng模板DNA,10×Buffer(含Mg2+1.5mmol/L)2μL,10mmol/LdNTPs 0.4μL,100μmol/L正反向引物各0.1μL,Taq表1 2个MiniSTR基因座一般信息基因座引物序列(5′-3′)重复区结...     

河南汉族人群mtDNA(CA)n重复子遗传多态性

人类细胞内存在两套基因组,一套是核DNA(nudear DNA nDNA),另一套是线粒体DNA(m it-chondrial DNA m tDNA).m tDNA具有高度多态性,其中高变区Ⅲ(hyper variabl region HVRⅢ)存在类似核DNA的短串联重复序列(short tandem repeats STR)的CA串联重复序列称为m tDNA(CA)n重复子。本文应用PCR引物扩增nt00514—00523位置的CA串联重复序列对河南汉族214例无关个体的m tDNA(CA)n重复子基因频率进行调查,现报道如下。1材料与方法1.1检材及DNA提取214例无关个体血样,来自我校河南籍汉族学生及我系检案积累的血样,用Chelex-100…     

中国蒙古族群体mtDNA测序的聚类分析及其法医学意义

目的建立一种既节省模板、又能延长测序长度的m tDNA单倍型(群)分析方法,构建中国蒙古族mtDNA单倍型类型关系树。方法用复合扩增、巢式PCR对201名中国蒙古族m tDNA样本进行D-环区、3010~3460、4640~5204、10171~10659和14478~15204编码区域的测序分析,部份样品进行L3953/H4508等区域的测序;根据其多态界定各样本单倍型并进行聚类分析。结果L15996/H107等巢式PCR扩增产物经测序检验结果互不干扰,其分型以A等东亚人群常见的单倍型(群)为主,包括部份HV、K、J、I和U等欧洲人群优势单倍型(群),23个单倍群和共53个单倍型全部归为欧亚人群特有的M和N两大类单倍类群并呈巢式聚类。结论本研究选取的测序区域适用于构建我国各民群的m tDNA单倍型(群);复合扩增、巢式PCR法既节省模板DNA,又延长测序的长度,适用于法医学、考古学研究中的微量样本的检测。     

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较CSCD

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。     

MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较

目的通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值。方法收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱。结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差。Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象。结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优。仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势。     

两无关个体单亲亲子鉴定不排除1例

1案例资料2004年4月5日,黄埔分局送来在某医院提取的两名涉嫌被拐卖男童(均约6个月大)的口腔拭子,要求进行DNA检验,以确定是否有血缘关系。用Chelex-100法提取该两名儿童的口腔拭子DNA。先后用Identifiler试剂盒、PowerPlex 16试剂盒、FFFL试剂盒和PowerPlex Y试剂盒进行扩增。扩增产物用AB I 3100型遗传分析仪检测分型,并进行m tDNA L15997~L16401片段序列测定。经Identifiler系统15个常染色体STR基因座检验,两男孩的基因型不同,但每个基因座均至少有1个相同的等位基因,见表1。再使用Power Plex16和FFFL试剂盒检验,在增加的…     

线粒体16srRNA和ND4基因在种属鉴定中的应用研究

目的构建一种用于种属鉴定的线粒体DNA(m tDNA)16 srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增检测体系。方法利用引物设计软件(Prim er 5)对两个m tDNA序列ND4基因和16 srRNA基因设计两对引物,每对引物中的一条在5’端标记荧光素(6-FAM)。按传统复合扩增技术建立复合扩增体系,用AB I PR ISM 310基因分析仪对产物进行分析。结果人类DNA扩增产物出现两个峰,片段大小分别为110bp的人类特异片段和149bp的人与动物共有片段,而动物DNA扩增产物出现一个峰,片段大小为149bp。对30个实验室存放5~15年的陈旧人血痕也能明确判断其种属来源。结论该体系可以明确区分人源性生物检材与其它常见动物样本,对实验室长期存放的陈旧检材也具有较好的检测能力。     

原发性心肌病猝死心肌mtDNA~(4977)缺失变化

目的探讨原发性心肌病(PCM)猝死者心肌线粒体DNA(m tDNA4977)缺失情况及其与猝死的关系。方法对18例PCM猝死和28例对照组病例心肌组织蜡块,用常规方法提取心肌m tDNA,以PCR、琼脂糖紫外凝胶成像技术确定扩增产物激光密度,初步定量检测m tDNA4977缺失率。结果PCM猝死18例中,检见13例m tDNA4977缺失,占72.44%。对照组28例中,检见3例m tDNA4977缺失,占10.71%;两组病例m tDNA4977缺失率均值分别为0.5795和0.0744,差异有非常显著性意义。结论多数PCM,特别是扩张型心肌病猝死者心肌可检见m tDNA4977缺失;提示其心肌m tDNA4977缺失变化与PCM猝死的发生可能有一定关系。     

毒品稀释剂N-异丙基苄胺的检验

近期,某公安局破获5起案件,查获N-异丙基苄胺盐酸盐660余g。本文将简述N-异丙基苄胺的检验以及相关资料。1实验部分1.1主要仪器美国安捷伦Agilent 7890/5975C气质联用仪。GC条件：DB-5MS型石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）;柱温80℃,以20°C/min升至280℃保持5min;载气为高纯氦气;进样量1.0μL;分流比为20∶1。     

青海省蒙古族15个STR位点遗传分析

本文对居住在青海省蒙古族的126个无关健康个体,进行D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818和FGA等15个STR基因座遗传学调查,结果报告如下。1材料与方法样本青海地区的126个无关健康知情个体血痕(三代以内居住在本地区)。DNA提取及扩增基因组DNA用Chelex-100进行提取[1]。使用AmpFLSTR Identifiler试剂盒进行15个常染色体PCR复合扩增。扩增总体系10μl,其中0.9μl(2ng/μl)DNA样本,2.9μl双蒸水,4μl dNTP,0.2μl金牌酶,2.0μl引物。用…     

中国汉族人群2个高变MVR基因座遗传多态性

常染色体小卫星基因座D16S309(MS205)位于16p13.3(AE006466)[1],核心序列为45~54bp,重复次数8~87次[2]。D2S44(YNH24)基因座位于2q21.3-q22(AJ001534)[3],核心序列为31bp。本文采用MVR-PCR技术,选择重复单位3′侧翼区引物(公共引物)和MVR特异性引物匹配进行PCR扩增,对中国河北汉族人群2个基因座遗传多态性进行了调查。1材料与方法1.1样本及DNA提取116份枸橼酸钠抗凝血样由河北省血液中心提供,采自无血缘关系汉族健康个体。常规饱和酚-氯仿法提取DNA。1.2MVR-PCRD16S309引物序列参见文献[2,4]。反应体系为25μl,分别加入5μl…     

山西汉族人群DYS460基因座遗传多态性

本文对山西地区汉族群体的DYS460基因座遗传多态性进行了调查,现报道如下。1材料与方法1.1样品100名无关男性个体和20名女性个体来自山西汉族人群,取外周血1ml,用EDTA抗凝,DNA提取采用TKM法[1]并做相应调整:TKM破坏红细胞,白细胞用2×蛋白酶K消化液(20 mmol/L Tris-HCl,pH7.6;20 mmol/L EDTA,pH8.0;300 mmol/L NaCl;1%SDS)和蛋白酶K(100μg/ml)55℃水浴3~5h。酚-氯仿抽提,无水乙醇沉淀,最后溶于无菌去离子水中。1.2方法引物引物序列参照基因库GDB,由大连TaKa-La公司合成。PCR扩增及电泳检测50μl反应体系,含50~100ng基因…     

匹拉米洞与联苯胺在血痕预实验中的灵敏性及DNA损伤检测研究

目的血液痕迹是暴力犯罪现场最易遗留的一类痕迹,是法医学检验中最常见和最重要的一类物证。血痕预实验是利用化学检测的方法从现场大量分布的可疑斑迹中初步筛选可能是血痕的重要方法,是法医学鉴定的重要前提。本文比较匹拉米洞法和联苯胺法的灵敏度、对DNA-STR检验的影响以及对细胞核的损伤情况,以探索匹拉米洞法应用于血痕预实验的可行性。方法对新鲜全血进行梯度稀释,观察比较检测灵敏度;利用Chelex-100提取匹拉米洞、联苯胺等试剂预检后的血痕样本中的DNA,应用PCR-STR技术及荧光检测技术检测样本的STR分型,观察STR分型结果,比较两种方法对后续DNA-STR检验的影响;在细胞培养液中加入联苯胺、匹拉米洞,应用彗星电泳技术评价细胞核DNA的损伤。结果匹拉米洞法可检测的最低血红蛋白浓度为25μg/m L,灵敏度低于联苯胺法(5μg/m L);DNA-STR有效分型率为96.67%,远高于联苯胺法(18.09%);联苯胺组彗星尾长为52.40±9.21、尾距为43.29±4.85、尾部DNA含量为16.25±2.35,显著高于匹拉米洞组。结论匹拉米洞法可用于血痕预实验,对血痕中DNA的损伤、对DNA-STR分型的影响均低于联苯胺法,可替代联苯胺作为新的法医学血痕预实验方法。     

血痕特异性mRNA标记研究

血痕是案发现场尤其是命案中比较常见的生物物证,而血痕的正确组织来源推断是当前鉴定工作中急需解决的问题。随着法医物证学的不断发展,以mRNA(messenger RNA)为基础的体液斑迹组织来源鉴定技术作为一种不同于传统血痕免疫学检测的新型方法,已经越加显示其独特的优越性。在该技术的基础上,实现共同提取生物物证的RNA与DNA的目标,建立体液斑迹鉴定与DNA分型兼容的方法,有利于现场重建,提高生物物证的证据效力,完善证据链。本研究建立了一个包括血痕总RNA提取、逆转录、荧光特异引物扩增、遗传分析仪电泳检测分析等步骤的血痕来源推断技术平台。实验共采集制备了40份的中国人群(女性)外周血、16份月经血样本,筛选了5个外周血标记:HBA、HBB、GYPA、SPTB、ALAS2,2个月经血标记:MMP7、MMP11,构建了一个囊括外周血、月经血特异标记的荧光复合扩增体系。结果显示mRNA技术为基础的鉴定血痕来源的方法是可行的,并且建立了血痕RNA检验的遗传分析仪结果判读方法。     

UPLC-MS/MS法测定人血液中毒死蜱的含量及其在中毒案例中的运用(英文)

目的建立人血液中毒死蜱的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法,并验证其在中毒案例中的应用。方法样品通过乙腈沉淀蛋白法提取,经C apcell Pack C18MGII柱(250 mm×2.0 mm,5μm)分离,利用溶剂A(含2mmol/L乙酸铵及0.1%的甲酸水溶液)、溶剂B(含2mmol/L乙酸铵的甲醇)以体积比5∶95等度洗脱。结果线性范围为5~500 ng/m L(r=0.998 7)。检出限及最低定量限分别为2 ng/m L及4 ng/m L。日内及日间精密度均小于10%,准确度为97.44%~101.10%。长期冷冻稳定性试验数据良好。基质效应、提取回收率及提取效率分别为64.97%~86.81%、76.70%~85.52%及55.57%~66.58%。结论该方法可用于法医毒物分析及临床治疗中毒死蜱的快速提取及其定量分析。     

用PCR扩增X-Y-特异片段性别鉴定的研究

采用5%Chelex-100处理方法提取 DNA,用 PCR 扩增 Amelogenin 基因片段检测血痕和毛根的性别。扩增一个样品只需1/10体积3mm~2血痕 Chelex-100处理液或1/10体积一根毛发 Chelex-100处理液(含模板 DNA)。100例血液样品结果显示,在男性可同时显现977bpX 特异片段和788bpY 特异片段,而在女性只观察到977bp X 特异片段,该方法用于性别鉴定可靠、灵敏、方便。     

TH01基因座等位基因丢失1例

<正>1案例资料2010年,本市发生1起入室盗窃案,现场提取血痕2份、烟蒂1枚。采用Chelex法提取检材DNA,使用Identifiler试剂盒10μL体系在AB 9700型扩增仪上进行扩增;扩增产物经AB 3130型遗传分析仪检测,GeneMapperID V3.2软件进行分析。结果血痕、烟蒂为同一个体所留,其中TH01基因座为纯合子(7)。