FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验

目的建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法。方法收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEPX SpectrumOrangeTMY SpectrumGreenTM试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光捕获显微分离系统分离男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒结合低体积扩增技术分别对男女成分进行STR扩增。结果荧光原位杂交后,可清晰分辨混合斑中的男女细胞。捕获20个精子细胞可以得到完整的STR分型,检出率为80%。随着精子数目增多,检出率提高而等位基因丢失率降低。30个精子检出率最高,为95%。结论激光捕获显微分离联用FISH技术可用于混合斑中男女细胞DNA的分离检验。     

单细胞检验技术用于混合上皮细胞的分离和检验

目的建立单细胞显微捕获联合低体积扩增技术,用于混合上皮细胞检材分离检验。方法取5名男性口腔上皮细胞拭子浸泡液30μL,分别滴加到5份含同一女性皮肤表皮细胞拭子上,制成5份混合上皮细胞样本为实验组,同时制备同样的5份样本为对照组。实验组样本采用显微捕获单个口腔上皮细胞,并使用低体积扩增技术进行扩增;对照组用M48纯化试剂盒提取DNA,Identifiler试剂盒复合扩增,扩增体系为10μL。所有产物均用ABI 3130遗传分析仪进行STR分型。结果 5份实验组样本均得到男性STR分型结果,5份对照组样本则均仅得到混合分型结果。将该方法应用于1例强奸杀人案例检验,取得了满意效果。结论单细胞显微捕获联合低体积扩增技术可用于混合上皮细胞样本的分离检验。     

激光显微捕获口腔上皮细胞的DNA分型

目的探索激光显微技术(lasercapturemicrodissectionsystem,LCM)捕获口腔上皮细胞,并进行STR-DNA分型检测的方法。方法用VERITAS显微切割仪红外低能激光显微捕获一定数量口腔上皮细胞,进行ProfilerPlus试剂盒STR复合扩增,检测DNA基因型。结果7～8个口腔上皮细胞能成功获得STR-DNA分型。3～4个口腔上皮细胞不能成功获得STR-DNA分型。结论激光显微捕获作为一种分离单个细胞的新技术,对于微量口腔上皮细胞的STR-DNA分型是可行的。     

激光捕获显微分离技术及其法医学研究进展

激光捕获显微分离技术(laser capture m icrod issection,LCM)是一项显微捕获分离单个细胞和多个细胞的自动化新技术,本文综述了其在法医学领域的研究新进展。经过研究和实践,它将在法医学实践中解决混合和微量物证的DNA检验难题中发挥重要作用。     

激光显微捕获技术用于尿液脱落细胞DNA检测

目的采用激光显微捕获技术（LCM）捕获尿液脱落细胞,并进行STR分型。方法收集10份健康成人尿液样本,根据储存时间分组,其中新鲜尿液组（≤24h）分别采用Chelex-100及LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,储存尿液组（〉24h）再分为4℃组和室温组,分别在4～30d内不同时间点采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA;各组提取的模板DNA进行扩增及SRT分型检验。结果新鲜尿液组采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,所有样本均可检出全部基因座（16个）,采用Chelex-100法则在部分基因座上出现等位基因丢失、非特异性扩增、峰值低等现象;4℃储存10d和室温储存4d以内的尿液经检验可明确判读12个以上基因座,4℃20～30d及室温7d,可检出7个以上基因座。结论 LCM技术可用于尿液检材的DNA分型检验,且检材应尽可能4℃保存并尽快检验。     

单细胞分离荧光原位杂交法用于男女混合血DNA分型

目的采用单细胞分离荧光原位杂交法精确分离混合血样中男性和女性细胞并进行分型检验。方法收集男、女性血,按照男∶女为1∶5、1∶10、1∶20制备混合血样,加入0.075mol/L KCl 600μL,轻混、放置30min后加入150μL固定液离心留沉淀涂片,利用Vysis 30-161050试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光显微捕获系统分离出男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒复合扩增并进行检测。结果捕获8个血细胞即可得到完整的DNA分型,且随着细胞数目的增多,检出率逐渐提高而等位基因丢失率逐渐降低。10个血细胞的检出率最高,为93.75%。5μL男性血液与本实验各比例女性血混合用本文方法检验均可获得男性分型。案例混合血斑经检验获得单一男性和女性分型。结论单细胞分离荧光原位杂交法可用于男女混合血样本中DNA分型检验。     

激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞

目的 评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection.LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值.方法 配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液.分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用IdentifilerTM试剂盒进行STR基因型检测.结果 LC...     

混合斑中精子细胞分离及其DNA制备方法

目的尝试建立一种检测混合斑中精子细胞的方法。方法使用显微操作法捕获精子细胞,全基因组扩增(多重置换扩增)精子细胞DNA。结果对10管精斑检材的全基因组扩增,获得了高产、保真的产物。使用50μL体系对20个精子细胞直接进行全基因组扩增,省去了对起始模板的纯化过程,DNA扩增倍数达30000倍以上,片段长度大多在15 kb以上,其STRs复合扩增分型结果有可参照性。结论显微操作法可以有效捕获精子细胞,排除干扰,多重置换扩增可以提供足够量的产物用于法医DNA分析,该方法具有可行性。     

荧光原位杂交技术在法庭科学DNA检验中的应用

目的运用荧光原位杂交技术结合激光显微切割技术,分离法医物证男女混合样本中的男性细胞和女性细胞,并进行DNA分型。方法通过双色荧光原位杂交,Y染色体标记上绿色信号,X染色体标记上红色信号,在荧光显微镜下识别男性细胞和女性细胞,并通过激光显微切割技术分别获得男性细胞和女性细胞进行DNA分型。结果运用荧光原位杂交技术,能够分别标记法医物证男女混合样本中的男性细胞和女性细胞,并通过激光显微切割技术获得各自的DNA分型。结论荧光原位杂交技术结合激光显微切割技术,可应用于法医物证男女混合样本的检验,提高个体识别能力。     

不同保存时间和不同精子数量精斑样本DNA分型比较

目的比较不同保存时间和不同精子数量精斑样本DNA分型的效果。方法制备精斑样本,保存10d的样本采用激光显微捕获30、20、15、10、5、1个精子,用于不同数量精子分型比较;保存10d、214d、375d的样本分别捕获30、20、10个精子,用于不同保存时间分型比较。比较各组检出率、等位基因丢失率和非特异性扩增率,采用χ2检验进行差异比较。结果①不同精子数量分型：捕获10个精子即可得到完整的DNA分型,且随着精子数增多,检出率逐渐提高而等位基因丢失率逐渐降低,30个精子等位基因丢失率为0%,1个精子则可达58.89%;②不同保存时间分型：总趋势是保存时间越短,捕获精子越多检出率越高,10个精子与20、30个精子组比较,均有显著性差异（P〈0.05）;等位基因丢失率及非特异性扩增率则随保存时间的延长而增加,相同保存时间的不同精子数量组之间和相同的精子数量的不同保存时间组之间比较,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论激光显微捕获精子数目和检材保存时间对DNA分型结果有直接影响。     

PALM结合低体积扩增技术在混合斑检验中的应用

目的PALM系统联合应用低体积扩增技术,建立一种提取混合斑中精子DNA的分型方法。方法利用PALM切割捕获理想检材的精子细胞,将捕获的细胞直接放置到低体积扩增玻片的反应位点上,裂解细胞之后进行PCR扩增。结果20个精子细胞8次分型中,7次分型结果完全正确。10个精子细胞8次分型中,4次分型结果完全正确。1个精子细胞8次分型中,出现位点的基因座均在10个以上。将该方法应用于两例实际案例的混合斑检材,取得了满意效果。结论联合运用PALM系统和低体积扩增技术对混合斑检材中的精子细胞检验具有重要意义。     

PALM结合低体积扩增技术在混合斑检验中的应用

目的PALM系统联合应用低体积扩增技术,建立一种提取混合斑中精子DNA的分型方法。方法利用PALM切割捕获理想检材的精子细胞,将捕获的细胞直接放置到低体积扩增玻片的反应位点上,裂解细胞之后进行PCR扩增。结果20个精子细胞8次分型中,7次分型结果完全正确。10个精子细胞8次分型中,4次分型结果完全正确。1个精子细胞8次分型中,出现位点的基因座均在10个以上。将该方法应用于两例实际案例的混合斑检材,取得了满意效果。结论联合运用PALM系统和低体积扩增技术对混合斑检材中的精子细胞检验具有重要意义。     

激光捕获显微分离技术在DNA检验中的应用研究

目的建立一套显微细胞捕获技术用于法医学生物检材DNA检验方法。方法使用VeritasTM LCM激光捕获仪,采用紫外加红外的捕获方式,对框架覆膜玻片上经苏木素染色口腔上皮细胞进行捕获,采用改良硅珠法提取细胞DNA,使用Identifiler TM试剂盒在5μL体系中进行PCR扩增。结果成功获得20个口腔上皮细胞的13个以上完整STR基因座分型谱带。结论本研究建立的方法适合法医学生物检材制成的染色涂片上细胞的DNA检验。     

激光显微切割技术与低体系扩增方法的法医学应用探索

目的建立减少DNA低体积扩增过程中产生气泡的方法。方法采用激光显微切割技术、PALM系统收集目标细胞,并在1μL～1.5μL低体积扩增样本,加入扩增液0.7μL～0.8μL。结果低体积扩增反应中的失败位点比例为2.3%,比常规反应位点时常会产生气泡导致该位点样本扩增失败且达30%以上的比例显著降低。结论低体积扩增方法可以减少或克服扩增过程中气泡的产生,提高扩增成功率。     

激光捕获显微切割技术在法医学中的应用

本文主要介绍了激光捕获显微切割技术及其在国内外法医学领域应用的研究进展,并对LCM技术解决法医学难题的应用前景进行探讨。     

龙胆紫染色法在显微捕获单细胞分离技术中的应用

目的建立用于显微捕获单细胞技术的龙胆紫染色法并评价其应用效果。方法制作20枚口腔拭子脱落细包悬液,配制0．05g／mL龙胆紫染液。取100μL口腔细胞悬液加入0．15、0．25、0．5、1．0、2．0μL染色液,考察最佳染色浓度;争别染色5、10、30、60min,考察最佳染色时间;用最佳条件染色后抓捕3个细胞,采用联合LV-PCR技术扩增并进行DNA分驯佥测,进行重复试验20次,并对同一检材未经染色的抓捕细胞进行检测,用于比对STR分型成功率。将龙胆紫染色法用于案例检材的口腔上皮细胞分离检验。结果1001μL细胞悬液加入0．5止0．05g／mL龙胆紫染液,染色5min,胞核呈紫工色,与胞浆对比明显;染色时间延长不影响染色效果及细胞分离检验结果。优化后的龙胆紫染色法对低体积扩增无归显抑制（P〉0．05）。应用此染色法于案例检材,胞核标识清晰,STR分型结果达同一认定标准。结论龙胆紫染色法刚于细胞核的发现,有助于提高显微捕获单细胞技术的检测效能。     

激光捕获显微切割技术在法医学中的应用

本文主要介绍了激光捕获显微切割技术及其在国内外法医学领域应用的研究进展．并对LCM技术解决法医学难题的应用前景进行探讨。     

wizard clean up在混合斑DNA检验中的应用

目的建立一种快速、简单、有效的混合斑DNA检验方法。方法在100例检案中,利用wizardcleanup直接对精子消化液进行纯化浓缩。采用profilerplus试剂盒进行复合扩增,产物经ABI310基因分析仪检测。结果从混合斑中成功获得精斑10个STR位点的DNA分型。结论wizardcleanup处理混合斑,能有效去除女性成份,得到精斑DNA进行分型。     

免疫磁珠法分离混合样本中血液成分的探究

目的 基于免疫磁珠法分离脱落上皮细胞中的白细胞，消除或减弱混合检材中血液来源STR分型对结果分析的干扰。方法 分别取两名不同个体的血液和口腔脱落上皮细胞，按不同比例制备成混合样本作为实验组，并同时制备细胞量相等的对照组。应用免疫磁珠法分离实验组样本中白细胞，并与对照组以相同条件进行DNA提取、扩增、分型，对比两组STR分型结果。结果 当血液量较少时，对照组为混合STR分型，经免疫磁珠法分离混合检材中白细胞后，实验组为单一来源STR分型；当血液量较多时，此时对照组为混合STR分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带峰高较低甚至丢失，经免疫磁珠法后，实验组仍为STR混合分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带成为主峰；当混合样本中口腔脱落上皮细胞微量，血液占比极大时，此时对照组为血液来源的单一STR分型结果，经免疫磁珠法后，实验组为STR混合分型，包含口腔脱落上皮细胞来源的所有等位基因分型。结论 该方法可用于分离脱落上皮细胞中血液成分，降低血液来源的DNA比例，能够改善此类混合检材中目的细胞的STR分型结果，为刑事案件中含有血迹浸染的混合生物检材的检验提供了一种新思路。     

wiazrd clean up在混合斑DNA检验中的应用

目的 建立一种快速、简单、有效的混合斑DNA检验方法。方法 在100例检案中，利用wizard clean up直接对于精子消化液进行纯化浓缩。采用profiler plus试剂盒进行复合扩增，产物经ABI310基因分析仪检测。结果 从混合斑中成功获得精斑10个STR位点的DNA分型。结论 wizard clean up处理混合斑，能有效去除女性成份，得到精斑DNA进行分型。