武汉汉族人群MICA基因第5外显子STR遗传多态性

本文对武汉汉族群体M ICA-STR基因座遗传多态性进行了调查,现报道如下。1材料与方法1.1样品武汉地区235例汉族无关健康个体EDTA抗凝血由武汉同济医院血库提供。所有样品采用Chelex-100法提取DNA[1]。1.2引物M ICA-STR分型采用M izuki等[2]报道的引物,其中上游引物5′端用6-FAM荧光染料标记,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。1.3 PCR扩增及产物检测M ICA-STR扩增反应总体积为10μl,内含200μmol/L dNTPs,50mmol/L KC l,10mmol/L Tris-HC l(pH8.3),1.5mmol/LMgCl2,5~10ng模板DNA,0.2μmol/L每条引物,0.5U Ampl…     

河北汉族人群X染色体3个STR基因座遗传多态性

本文调查了X染色体3个STR基因座在河北汉族人群中的遗传多态性,现报道如下。1材料与方法1.1材料血液样本来自河北汉族无关个体,男114名,女118名。1.2方法血液样本用酚-氯仿法提取DNA。3个基因座的引物序列参照基因组数据库(www.gdb.org),由北京赛百盛生物工程有限公司合成。扩增采用20μl反应体系,其中包括:10×buffer 2.0μl,DXS6801、DXS7424、DXS9902引物浓度分别为1pmol/μl、0.5pmol/μl、1pmol/μl,模板20ng,25mmol/L MgC l21.2μl~1.6μl,TaqDNA聚合酶1U,10mmmol/L dNTP 0.2~0.4μl。热循环参数参考Edelmann等[1,2]人的…     

河南汉族群体D4Satt、D5Saat miniSTR基因座遗传多态性

在法医学实践中,严重降解或者微量的生物检材采用STR分型,结果常不理想,而miniSTR技术是有效的一种检测方法[1]。本文从人类基因组DNA序列中查找并对D4Satt、D5Saat2个miniSTR基因座进行分型检测,希望可在日常法医学鉴定中作为核心STR基因座的补充[2]。1材料与方法1.1样本和DNA的提取134例河南汉族健康无关个体枸橼酸钠抗凝血样取自郑州市中心血站。采用酚-氯仿法提取DNA。1.2引物设计从GeneBank上下载4、5号染色体DNA序列,用Tandem repeats finder软件在距常用STR基因座较远的区域(50Mb以外)查找重复单位为3bp,连续重复12次以上的STR基因座。用Primer3软件设计引物,使扩增片段在150bp以内。引物由上海生工生物工程技术服务公司合成(表1)。1.3 PCR扩增及产物检测PCR扩增体系总体积20μL,包括1ng模板DNA,10×Buffer(含Mg2+1.5mmol/L)2μL,10mmol/LdNTPs 0.4μL,100μmol/L正反向引物各0.1μL,Taq表1 2个MiniSTR基因座一般信息基因座引物序列(5′-3′)重复区结...     

3个X—STR基因座复合扩增

X染色体由于其特殊的遗传方式,已受到了法医DNA工作者的重视,研究X-STR的多态性和分型已成法医学上研究内容之一。为了发掘和利用X-STR的多态性,本研究用复合扩增和银染法对3个X-STR基因座的多态性进行了研究并调查了广东汉族群体遗传学数据。1材料和方法血液标本来自本室日常检案样本和附属一院妇产科样本,用Chelex-100法提取DNA。DXS7132,DXS6789和GATA172D053个基因座引物序列参照文献[1],均由上海生物工程有限公司合成。PCR扩增总体积12.5μL,内含dNTP200μmol/L,MgCl21.5mmol/L,KCl50mmol/L,10mmol/L Tris-HCl(pH=…     

X染色体DXS101、HumDXS6807基因座初步研究

本文对200名浙江汉族无关女性个体分别进行DXS101和HumDXS6807基因座检测,为X染色体在法医学中的应用提供基础数据。1材料与方法1.1实验材料200名无关汉族女性个体的血样均来自浙江全省各地,系本实验室日常检案积累。1.2实验方法采用Chelex-100快速法[1]提取DNA。DXS101和HumDXS6807基因座引物,由上海生工生物工程公司合成[3,4];PCR扩增按参考文献[2],其中DXS101和HumDXS6807引物浓度分别为0.5mmol/L和0.3mmol/L。构,并按国际法医血液遗传学会DNA委员会推荐的命名原则进行命名[5]。产物检测方法参照文献[2],在ABI3100型基因…     

TKM法提取血液DNA调查山西地区人群的HUMTPOX基因座多态性

采用TKM法提取DNA模板,进行PCR扩增,对山西地区汉族人群的HUMTPOX基因座[1]进行了群体遗传学调查,获得山西地区HUMTPOX基因座的群体遗传学数据。所用方法,结果显示较佳,现报告如下。1材料与方法1．1材料TKM1溶液：10mmol／L,Tris－HCI（pH7．4）;10mmoVLKCI;10mmol／LMgC12;Zmmol／LEDTAoTKMZ溶液：TKMI溶液中加0．4mol／LN。CI．10％SDS及NP－40。互．2DNAM取0．sml抗凝血加入0．smlTKMI溶液和12．splNP－40,混匀,室温下离心10min（30O0r／min）,奔上清,细胞沉淀中再加TKMI溶液,混匀后再离…     

河南汉族人群12个X-STR基因座遗传多态性

正采用AGCU X-12荧光标记复合扩增系统,对河南汉族群体12个X-STR基因座的遗传多态性进行调查,旨在为法医学应用及群体遗传学研究提供基础数据。1材料与方法1.1样本538例河南汉族无关个体纸质血样取自作者实验室日常建库积累,男性269名,女性269名。1.2 X-STR扩增及分型检测采用AGCU X-12免提系统(无锡中德美联生物技术有限公司)进行复合扩增,反应体系为10μL,内含反应混合物4μL,引物2μL,C-Taq(2.5U/μL)DNA聚合酶0.25μL。热循环参数为:95℃2min;94℃1min,58℃1min,72℃1min,30个循环;60℃60min;4℃保温。取1μL扩增产物与0.5μL内标Siz-500和10μL去离子甲酰胺混合,95℃变性3min后,冰浴     

福建汉族人群12个Y-STR基因座遗传多态性

本文应用PCR技术对福建汉族群体189名无关男性个体12个Y-STR基因座遗传多态性进行调查,现报道如下。1材料与方法1.1实验方法福建省各地189名汉族男性无关个体的血样,系本实验室日常检案积累。Chelex-100法[1]提取DNA。采用12.5μl扩增反应体系,其中包括:引物、PCR缓冲液各1.25μl;Taq Gold DNA聚合酶0.3μl;模板DNA 1μl;无菌去离子水补足体系。热循环参数参照PowerPlex Y System试剂盒推荐方法。1.2统计学分析[2]用直接计数法计算各基因座等位基因和单倍型频率。基因差异性(gene d iversity,GD)的计算公式:GD=n(1-∑X i2)/(n-…     

贵州汉族19个STR基因座多态性及法医学应用

目的调查19个常染色体STR基因座在贵州汉族人群中的等位基因分布,评估其在法医学中的应用价值。方法应用Goldeneye~(TM) DNA身份鉴定系统20A试剂盒,研究贵州520名汉族无关健康个体19个常染色体STR基因座多态性。用310型遗传分析仪进行毛细管电泳,Gene Mapper~ID v3.1进行基因分型。结果 19个常染色体STR基因座的杂合度为0.603 8~0.916 4,个体识别率为0.790 0~0.985 6,非父排除率为0.295 5~0.826 9,多态信息含量为0.553 5~0.908 9,累积个体识别率为1-1.230 0×10~(-22),累积非父排除率为0.999 999 99。贵州汉族和其他五个地域的汉族两两之间等位基因频率比较,仅贵州汉族与山东汉族、辽宁汉族、山西汉族之间存在基因频率差异具有统计学意义。结论 D19S433等19个常染色体STR基因座在贵州汉族人群中具有良好的遗传多态性,对群体遗传学和法医物证学研究有应用价值。     

Y染色体A10 STR基因座在中国汉族群体中的多态性

目的获得A10基因座在中国汉族人群的多态性资料.方法用Chelex100方法提取100名无关个体汉族男性血痕DNA,利用荧光标记引物进行PCR扩增结合ABD377测序仪检测扩增产物.结果在A10基因座中国汉族人群发现6个等位基因,等位基因频率为0.01～0.48,GD值为0.6505.     

毛干mtDNA单倍型母系家系排查法侦破命案

笔者在实践工作中遇到利用受害者指尖粘附微量毛干线粒体DNA(m tDNA)测序的多态信息,最终成功侦破一起命案,现报道如下。1材料与方法1.1简要案件及样本DNA的提取2008年9月某市发生一命案,现场提取死者(杨某,女)指尖粘附约1cm长毛干及胸部、膝关节上毛发各1份;杨某丈夫(王某)和杨某血痕,编号1~5。按母系遗传关系排查的杨、金、何、刘姓嫌疑人血痕各1份,编号6~9。参照张纯斌等人[1]的方法提取毛干m tDNA;有机法提取血痕m tDNA。1.2巢式PCR扩增m tDNA高变区I(HVRI)15996-16401区域长片段的PCR扩增,上、下游引物序列为L15996:5-′CTCCAC-CATTAGCACCCAAAGC-3;′H16401:5-′TGTTTCACG-GAGGATGGTG-3′。15μL反应体系包括含镁离子10×PCR缓冲液1.5μL,5mmol/L dNTP1μL,1μmol/L正反向引物各1μL,0·2μL(5U/μL)TaqDNA聚合酶,0·5μLDNA(50ng/μL),余量用水补足。PCR反应条件:95°C变性2m in,94°C变性20s,58°C退火20m in,72°C...     

乙醇与乌头碱联合染毒对大鼠心肌细胞RYR2的影响

目的研究不同浓度乙醇与乌头碱联合染毒对大鼠心室肌细胞RYR~2蛋白表达的影响。方法用优化的方法进行新生大鼠心室肌细胞原代培养,设置4组实验组,分别为A、B、C、D组,即分别用1μmol/L乌头碱、5mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱、50mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱以及100mmol/L乙醇+1μmol/L乌头碱进行染毒,同时设立对照组(E组)。染毒1h后,用Western blot技术检测RYR~2蛋白含量,重复实验,将对所得数据进行统计分析。结果 1μmol/L乌头碱作用1h,使培养的大鼠心肌细胞RYR~2蛋白量增加;5mmol/L乙醇、50mmol/L乙醇分别与乌头碱联合染毒组中RYR~2蛋白表达量均较单独乌头碱染毒组低;100mmol/L乙醇-乌头碱联合染毒组RYR~2蛋白量与单独乌头碱染毒组相较未见明显差异。结论乙醇-乌头碱联合染毒对RYR~2的蛋白量有明显影响,不同浓度乙醇与乌头碱联合染毒对RYR~2的影响效果不一致,低浓度乙醇能拮抗乌头碱引起的RYR~2含量增加,随着乙醇浓度逐渐升高,拮抗作用逐渐减弱,且有向协同作用转化的趋势。     

瓜子壳上人体脱落细胞DNA检验

<正>1案例资料1.1简要案情2012年12月13日,某镇一村民家被盗,经调查和现场勘验确认遗留在现场的大板瓜子壳为嫌疑人所留,提取该检材要求进行DNA检验。1.2 DNA检验送检瓜子壳多呈两瓣前端张开状态,分析应为进食者以手卡住大板瓜子用门牙所嗑。挑选状态基本一致的瓜子壳数个,剪取尖端,加入5%Chelex-100 120μL及蛋白酶K(20mg/m L)10μL;振荡后56℃孵育1h,     

261例山东汉族人D6S1043、D12S391基因频率调查

本文应用STR复合扩增技术扩增,调查了261份山东汉族人群D6S1043、D12S391基因座的分布,获得相关遗传学数据,报道如下。1材料和方法261份无关个体血样,系本实验室日常办案积累。所有血样均采用chelex-100法提取DNA。按Sinofiler（AB公司,美国）试剂盒说明书进行复合扩增,反应体系为10μL,其中混合液4μL,引物2.2μL,金标Taq酶0.2μL,模板DNA适量,加去离子水至l0μL,置于9700扩增仪中扩增。     

ABO基因分型的等位基因特异性引物消耗法

目的建立一种新的ABO基因型分型的等位基因特异性引物消耗法(CASPA)。方法根据ABO基因碱基序列中的第261、297、803nt3处多态性位点设计6条特异性引物及1条公用引物,采用CASPA法鉴定146名中国汉族无关个体血液斑样品的ABO基因型。结果146名中国汉族无关个体血液斑样品中检出AAb、AB、AO1、BOv、O1Ov、AA、BB、O1O1、BO1等9种基因型,结果明确,其基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论ABO基因型CASPA分型方法为ABO血型的鉴定提供了一个新的检测方法。     

FAM羧基荧光素修饰引物检测D1S80基因座遗传多态性

目的建立用FAM羧基荧光素修饰引物检测DIS80基因座的方法。方法采用5-FAM修饰引物,通过PCR扩增,DNA全自动遗传分析仪进行片段长度分析,检测129名黑龙江汉族无关个体DIS80基因座遗传多态性。结果在所调查的129名黑龙江汉族无关个体样本中,DIS80基因座有21个等位基因,56个基因型,基因频率在0.0039-0.1667之间。杂合度(H)为0.9097,个人识别机率(PD)为0.9691,非父排除概率(PE)为0.8113,多态性信息总量(PIC)为0.8988。群体内基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论FAM羧基荧光素修饰引物检测DIS80基因座的方法,简便、灵敏、稳定性好,DIS80基因座用于个体识别及亲权鉴定具有很高的实用价值。     

山东沂源县汉族人群18个STR基因座遗传多态性

正本文应用DNA TyperTM15 plus试剂盒(公安部物证鉴定中心)对山东省沂源县1012名汉族无关个体18个STR基因座遗传多态性进行调查,为法医学及相关研究与实践提供遗传学资料。1材料与方法1012名常住沂源县汉族无关个体血样(男性741例,女性271例)均系本实验室日常工作积累。采用DNA TyperTM15 plus试剂盒10μL反应体系免提取直接扩增[1]。扩增产物应用ABI 3500基因分析仪检     

5个Y-STR基因座复合扩增及其单倍型

多个Y STR基因座复合扩增在国内外已得到应用[1、2 ] 。本文作者报道用银染法复合扩增DYS389II、DYS389I、DYS390、GATA A7 2和DYS393等 5个Y STR基因座 ,并对广东汉族 4 15名无关男性个体进行基因分型调查。1　材料和方法1 1　材料4 15份广东汉族无关男性个体血样来自本室日常检案标本 ,用Chelex 10 0法提取DNA。1 2　引物序列DYS389Ⅱ、DYS389Ⅰ、DYS390、GATA A7 2和DYS393等 5个基因座引物序列见文献 [3、 4 ],由上海生物工程有限公司合成。1 3　PCR扩增条件总体积 2 5 μl,内含dNTP 4 2 0 μmol/L ,MgCl23 0mm…     

江苏地区汉族人群15个STR基因座频率调查

采用五色荧光标记引物复合扩增技术 ,对江苏地区 12 0名汉族无关个体进行了 15个STR基因座的基因分型 ,旨在为法医学应用提供基础资料。1　材料和方法12 0例无关汉族个体的血样均系本实验室日常检案积累 ;所有样本的DNA均用硅珠法[2 ] 或Chelex[1]法提取后 ,参照AmpF1STRIdentifiler试剂盒 (PE公司 )及ABI310型遗传分析仪的使用说明书进行扩增和检测 ,并分别计算 15个基因座的基因频率、杂合度(H)、个体识别率 (Dp)及多态信息量 (PIC)。2　结果和讨论12 0例无关个体的 15个STR基因座的等位基因频率见表 1。对每个基因座进行 χ2 …     

全血中苯骈二氮杂类药物的胶束电动色谱法分析

目的建立用固相萃取胶束电动毛细管色谱法测定人体全血中苯骈二氮杂艹卓类药物的方法。方法全血以Oasis小柱提取,以克仑特罗为内标,采用未涂层毛细管(75μmID×50.2cm,有效分离长度为40cm),缓冲液为30mmol/LSDS→15mmol/L硼砂→15mmol/L磷酸盐(pH8.2)→18%甲醇。进样条件:压力进样0.5psi×10s,分离电压为25kV,柱温25℃,检测波长为230nm。结果本法分离效率高,9种苯骈二氮杂艹卓类药物的最低检测浓度为5～50ng/ml;血药浓度的线性范围为0.02～1.6μg/ml,日内、日间精密度<12%。结论本法简便、高效、可靠。