PowerPlex(R)16HS试剂盒在陈旧血样DNA检验中的应用

PowerPlex 16 HS系统是对16个STR基因座进行联合扩增试剂盒,对PCR抑制物的耐受性较强,适于直接扩增。本文作者在公安部的打拐专项行动中,采用该试剂盒,对保存近10年的300份陈旧血样进行DNA检验,取得了较好的效果。1材料与方法1.1主要仪器与试剂PowerPlex(16 HS试剂盒(Promega公司,美国),BSD 600半自动取样机(BSD公司,澳大利亚),9700扩增仪、3130XL遗传分析仪(ABI公司,美国)。     

D8S1179基因座等位基因“丢失”1例

作者报道1例D8S1179基因座基因丢失现象：采用ProfilerPlus试剂盒扩增系统对1例血痕D8S1179基因座进行基因分型时，等位基因16丢失；改用Identifiler试剂盒扩增系统对其进行基因分型时，等位基因16正常出现。     

多手段联合亲子鉴定1例

1案例 某地公安机关送检一案件中可疑父母血样和死者（男性）肋软骨,要求进行亲子鉴定：用Chelex-100法提取可疑父母血样和死者肋软骨DNA．分别用美国AB公司Identifile^TM。试剂盒、Yfile^TM试剂盒和北京基点认知技术有限公司Goldeneye^TM 16BTDNA身份鉴定试剂盒复合扩增,扩增产物用3100遗传分析仪进行电泳分离,得到STR分型结果：     

三等位基因的遗传关系分析1例

1案例资料 魏某（疑父）、妻子卢某（母）和儿子（子）因出国公证要求进行亲子鉴定,确定父子亲子关系。1.1 DNA分型检验采用Chelex-100法分别提取上述3人新鲜血液、疑父与子的头发和口腔拭子的DNA,采用Identifiler复合扩增试剂盒（ABI公司,美国）、PowerplexTM16system（Promega公司,美国）荧光标记复合扩增试剂盒和STR-Typer 10G（科登公司,珠海）荧光复合扩增试剂盒进行检测。     

3种国产化试剂盒与Identifiler^TM试剂盒检验结果比较

目的比较3种常用国产化PCR扩增试剂盒与IdentifilerTM试剂盒的检验结果。方法对455份中国汉族无关个体血样,分别用IdentifilerTM、DNA TyperTM15、GoldenEye 16BT、AGCU17＋1 4种试剂盒进行检测,对其中共有的11个基因座位分型结果进行比较,并对有差异的样本进行测序分析。结果 3种国产化试剂盒在455份样本中,发现4例样本的分型结果有差异,差异率为0.88%。其中,DNA TyperTM15试剂盒CSF1PO基因座发现1例等位基因丢失,AGCU17＋1试剂盒D18S51基因座发现1例等位基因扩增不平衡,测序结果表明,2例均系点突变导致;GoldenEye16BT试剂盒D21S11基因座发现2例假3峰型,其中1例测序未发现碱基突变,分析3峰原因可能是stutter滑脱峰所致。结论与IdentifilerTM试剂盒比较,3种国产化试剂盒均有分型差异现象,成因不同,在实践中应给予注意。     

AmpFlSTR Identifiler~(TM)和Powerplex~(TM)16 system在DNA检验中应用比较

在DNA检验中,AmpFlSTRIdentifilerTM和Pow鄄erplexTM16system两种荧光标记复合扩增系统由于增加了几个鉴别率较高的基因座,因此比ProfilerPlusKit具有更高的识别率,越来越多的应用于各类法医DNA检验当中。在刑事案件的DNA检验中,由于检材条件差异较大,对扩增系统的要求更高。为了更好的将这两种扩增系统应用于检案当中,笔者对上述两种系统的应用进行了比较。1材料和方法1.1实验材料AmpFlSTRIdentifilerTM荧光标记复合扩增试剂盒,PowerPlexTM16system荧光标记复合扩增试剂盒。采用controlDNA9947A(ng·μL-1)(Promega公司)…     

AGCU免提取STR荧光检测试剂盒的验证

目的考察AGCU免提取STR荧光检测试剂盒．对保存在滤纸片或FTA卡上血液样本的直接扩增检测情况。方法使用人GCU免提取STR荧光检测试剂盒,对未经提取的滤纸片血液样本、FTA卡血液样本675份进行直接扩增和18个基因座的DNA分型,并对结果的可靠性进行研究。结果18个基因座检测结果与PP16和ID试剂盒分型结果一致,2000年数据库样本成功率92．3％,2001年数据库样本成功率92．6％,2004以后年数据样本及案件样本、亲子鉴定样本成功率在99％以上。结论AGCU试剂盒可以成功地对滤纸片、FTA卡样本的18个STR基因座进行直接扩增检测,检验结果稳定,分型准确。     

5种免提取试剂盒检验滤纸血痕结果的比较

目的探讨5种免提取试剂盒对滤纸血痕样本检验的效果。方法陈旧滤纸血痕(存放时间12～14个月)及新鲜滤纸血痕(存放时间小于1个月)各920份,分别随机分为5组。应用AGCU 17+1、Goldeneye 20A、Powerplex16HS、Identifiler Plus、Identifiler Direct 5种免提取试剂盒进行检验,对比各组检验结果。结果陈旧滤纸血痕5种试剂盒的检验成功率为98.91%～100%,各组间无差异(P>0.05);新鲜滤纸血痕,Identifiler Plus和Identifiler Direct试剂盒检验成功率高于AGCU17+1、Goldeneye 20A及Powerplex 16HS试剂盒(P<0.01);将样本做陈旧化处理后再用成功率较低的3种试剂盒进行检验,成功率分别升至100%、99.46%、99.46%;Identifiler Plus试剂盒扩增循环27次效果优于28次。结论本文5种试剂盒均可用于滤纸血痕的直接扩增检验,但使用AGCU17+1、Goldeneye 20A及Powerplex 16HS试剂盒需将新鲜血痕做陈旧化处理;Identifiler Plus试剂盒需将循环次数降为27次。     

国产试剂盒Goldeneye~(TM)20A在亲权鉴定中的应用评估

目的评估GoldeneyeTM20A试剂盒在亲权鉴定中的应用价值。方法应用GoldeneyeTM20A试剂盒对289宗亲权鉴定案例中的FTA卡血样本基因组DNA进行PCR扩增,扩增产物用ABI 3130xl遗传分析仪进行毛细管电泳,GeneMapper v3.2和GeneMarker HID软件进行基因分型及统计学分析,并与IdentifilerTM、SinofilerTM、PowerPlex16 3种试剂盒进行比较。结果采用GoldeneyeTM20A试剂盒,累积非父排除概率(CPE)为0.999 999 996,累积个人识别能力(CPD)达0.999 999 999 999 999 999 999 932 44,与目前常用的3种试剂盒相比较,GoldeneyeTM20A试剂盒在不排除的案例中具有更高的CPI值;在排除的案例中具有更多的排除指标。结论国产GoldeneyeTM20A试剂盒在亲权鉴定中有较高的应用价值。     

河北地区汉族群体19个STR基因座的遗传多态性

本文对D3S1358、D8S1179等19个STR基因座在河北汉族人群中的遗传学数据进行了调查研究。1材料和方法来源于本实验室保存的河北地区251个无关个体的血样。采用Chelex-100法提取样本DNA,采用ABI公司的Sino filer试剂盒和Promega公司的PP16试剂盒进行扩增,扩增产物用ABI-3130XL型基因分析仪进行毛细管电泳分离,应用ABI Genemapper IDX软件分析结果。     

3种常用PCR扩增试剂盒检验血样DNA的结果比较

目的探讨常用的ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒检验血样DNA的差异。方法510名无关中国汉族个体血样,分别用ProfilerPlusTM与Powerplex(16试剂盒进行DNA检验,然后对有不同检验结果的同一样本,再用ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16等三种试剂盒进行检验,并比较其结果。结果在510名个体血样的DNA检测结果中,发现同一样本有不同结果的有7例,其差异率为1.3725%;ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16各有1例在D13S317或FGA基因座上出现等位基因缺失现象,缺失率为0.1961%;ProfilerPlusTM有5例在D8S1179基因座上出现扩增严重不平衡现象,相应的IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒的检验结果为正常杂合子。结论ProfilerPlusTM、IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒检验血样DNA均会出现扩增不平衡和/或基因丢失现象,其发生几率IdentifilerTM与Powerplex(16试剂盒较ProfilerPlusTM少。     

Goldeneye~(TM) 16C系统在批量血样DNA检验中的应用

正法医物证检案中,中速定性滤纸、采集卡以及FTA卡是常用的样本载体,但因其各有优缺点,批量血样扩增步骤繁琐、成功率不高,本实验采用GoldeneyeTM 16C试剂盒对这几种常用载体进行直接扩增,以提高分型成功率。     

河北秦皇岛地区汉族人群16个Y-STR基因座遗传多态性

本文对中国秦皇岛地区汉族216名健康无关男性个体进行16个Y-STR基因座复核扩增荧光检测。采用Chelex-100法提取样本DNA,用Life公司Y-filer反应试剂盒进行扩增及检测,结果在16个Y-STR基因座共检出216个单倍型,累计GD值达0.998 968,适合于单亲鉴定、混合样本的个体识别和Y-STR家系排查。     

两无关个体单亲亲子鉴定不排除1例

1案例资料2004年4月5日,黄埔分局送来在某医院提取的两名涉嫌被拐卖男童(均约6个月大)的口腔拭子,要求进行DNA检验,以确定是否有血缘关系。用Chelex-100法提取该两名儿童的口腔拭子DNA。先后用Identifiler试剂盒、PowerPlex 16试剂盒、FFFL试剂盒和PowerPlex Y试剂盒进行扩增。扩增产物用AB I 3100型遗传分析仪检测分型,并进行m tDNA L15997~L16401片段序列测定。经Identifiler系统15个常染色体STR基因座检验,两男孩的基因型不同,但每个基因座均至少有1个相同的等位基因,见表1。再使用Power Plex16和FFFL试剂盒检验,在增加的…     

荧光标记3个miniSTR基因座复合扩增系统的建立

目的建立扩增片段<135bp,包括D5S818,D8S1179,D16S539 3个miniSTR基因座复合扩增系统。方法采用不同荧光染料标记引物,通过PCR扩增,利用ABI 3100遗传分析仪进行片段长度分析,对100份无关个体血样,10个家系样本以及30份高度降解检材进行检测。结果本系统DNA分型结果与AmpFLSTR Identifiler试剂盒完全一致,且灵敏度高于AmpFLSTR Identifiler试剂盒。结论本系统可以应用于个人识别和亲权鉴定,为降解DNA样本分型提供了新的方法。     

天津汉族6个STR基因座的基因频率调查

<正> 采用PowerPlex~(TM)16 System荧光标记复合扩增试剂盒,ABI-310型DNA序列分析仪,对219名天津汉族无关个体血样进行TH01、PENT E、     

盐城地区汉族人群15个STR基因座的遗传多态性

本文利用复合STR技术,应用PowerPlex(16System试剂盒对213名盐城地区汉族无关个体进行15个基因座的遗传多态性调查。现报道如下:1材料与方法213名盐城地区汉族无关个体血样,全部为本实验室办案积累。chelex法[1]或硅珠法[2]提取血样DNA,应用PowerPlex(16System试剂盒复合扩增,扩增体系10μl,热循环参数和电泳体系各组份配比按试剂盒所附操作手册设置。主要仪器:ABI9700扩增仪、ABI3100-Avant基因分析仪。对基因型数据作χ2检验。利用PowerStats分析软件对群体数据进行处理,得到15个STR基因座的杂合度(H)、个体识别能力(DP值)、偶…     

EX16+10Y试剂盒检测新疆维吾尔族人群的效能

目的检验EX16+10Y试剂盒在新疆维吾尔族人群中的法医学检测效能。方法采集4 620个新疆地区维吾尔族男性个体血样,用EX16+10Y试剂盒进行扩增,用3130xl基因分析仪对扩增产物进行分型。结果获得4 620个新疆维吾尔族男性个体的15个常染色体STR基因座和10个Y染色体STR基因座的完整分型图谱。15个常染色体STR基因座分布均符合Hardy-Weinberg平衡,STR基因座的杂合度为0.637~0.838,多态信息含量为0.580~0.860,个体识别率为0.811~0.978。10个Y染色体STR基因座有766种单倍型。结论 EX16+10Y试剂盒检测结果准确可靠,可用于实际工作中同时完成个体识别和男性家系排查。     

FTA卡血样快速直接PCR扩增方法比较初探

目的探索FTA卡血样快速直接PCR扩增方法,比较相关方法的应用价值。方法将DNA TyperTM19试剂盒分别与3种快速试剂(Roche、TaKaRa、Fermentas)组合,以FTA卡血样为模板构建扩增体系,按照经优化的循环参数进行快速直接扩增,并与Typer19试剂盒常规方法相比较,对方法进行评价。结果 Typer19试剂盒分别与3种快速PCR检验试剂进行组合,均可实现快速直接扩增,STR分型结果均与常规方法一致,扩增用时60min,较常规扩增所需的215min缩短了约70%,但Typer19试剂盒与Roche试剂组合基因座间峰高有部分不平衡;与TaKaRa试剂组合扩增个别基因座出现双肩锋;与Fermentas试剂组合扩增峰高明显不平衡,且个别基因座存在双肩峰。结论应用DNA TyperTM19试剂盒与快速试剂组合直接PCR扩增方法,可有效缩短扩增时间,可根据效果在相关实践中选择使用。     

全基因组扩增法应用于低拷贝数DNA检测

目的建立基于多重置换扩增(MDA)技术的全基因组扩增(WGA)方法,实现对低拷贝数(LCN)DNA样品进行分析。方法采用REPLI-g试剂盒对样本进行等温全基因组扩增,扩增产物采用ProfilerPlus试剂盒确定样本的十个STR基因座的等位基因型。结果10pgDNA模板经全基因组扩增后,能够进行DNA分型。结论全基因组扩增可以用于LCN的DNA分析,帮助提高微量物证的检出成功率。