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目的 研究建立法医DNA标准物质备选细胞基因组STR基因座等位基因片段长度标准定值的方法.方法 利用有机法提取HPF和HSSM细胞基因组DNA并进行STR复合扩增,将产物进行电泳检测.利用Gene Mapper软件分析电泳结果,记录STR基因座等位基因的数值,并对目前我国公安系统应用较为广泛的DNATyperTM15、IdentifilerTM两种试剂盒扩增产物进行相应的DNA片段长度(bp)统计以及定值.结果 HPF为男性个体细胞,HSSM为女性个体细胞.HPF和HSSM细胞DNATyperTM15系统等位基因片段长度范围分别为126.26±0.05~367.53±0.20bp和125.33±0.07~370.08±0.17bp,IdentifilerTM系统等位基因片段长度范围分别为117.22±0.04~340.02±0.08bp和117.21±0.03~323.86±0.09bp.结论 对STR基因座等位基因片段长度进行标准定值,可为法医DNA标准物质提供有效的溯源途径. 相似文献
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法医常染色体STR分型 总被引:11,自引:2,他引:9
短串联重复序列 (STR)是广泛存在于人类基因组中的一类具有长度多态性的DNA序列。它由 2~ 6个碱基对构成核心序列 ,呈串联重复排列 ,其长度多态性主要由核心序列拷贝数目的变化而产生。一般认为 ,人类基因组平均每 6~ 10kb就有 1个STR基因座 ,为法医个人识别和亲子鉴定提供了高信息基因座的丰富来源。与限制性片段长度多态性产生的DNA指纹相比 ,用聚合酶链反应技术 (PCR)扩增STR基因座产生的DNA纹印具有更高的灵敏度。STR扩增片段较短 (10 0~ 30 0bp) ,对于常见含部分降解DNA的陈旧斑痕 ,PCR扩增ST… 相似文献
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线粒体16srRNA和ND4基因在种属鉴定中的应用研究 总被引:2,自引:1,他引:1
目的构建一种用于种属鉴定的线粒体DNA(m tDNA)16 srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增检测体系。方法利用引物设计软件(Prim er 5)对两个m tDNA序列ND4基因和16 srRNA基因设计两对引物,每对引物中的一条在5’端标记荧光素(6-FAM)。按传统复合扩增技术建立复合扩增体系,用AB I PR ISM 310基因分析仪对产物进行分析。结果人类DNA扩增产物出现两个峰,片段大小分别为110bp的人类特异片段和149bp的人与动物共有片段,而动物DNA扩增产物出现一个峰,片段大小为149bp。对30个实验室存放5~15年的陈旧人血痕也能明确判断其种属来源。结论该体系可以明确区分人源性生物检材与其它常见动物样本,对实验室长期存放的陈旧检材也具有较好的检测能力。 相似文献
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最常用的DNA分析方法是测DNA的限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP).此法需要微克量的未降解大分子DNA,一般难以从案例检材中获得.聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)能使DNA的特异区域扩增,供序列分析,鉴定生物性检材的性别.酶促扩增法可使 相似文献
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80年代中期建立的聚合酶链反应(PCR)技术,以基因组DNA为模板在DNA聚合酶催化作用下,由一对寡核苷酸引物引导,在体外扩增靶DNA片段。经过约30个循环反应,靶DNA片段可扩增100万个拷贝。PCR技术使法医物证检验的灵敏度大为提高,达到纳克级DNA的超微量水平。近10年来,PCR技术在法医界迅速得以推广与使用,被称为第二代DNA分型技术。人类基因组内可变数目串联重复序列(VNTR)位点具有极高多态性,VNTR位点和片段长度等位基因多达数十,甚至数百。运用PCR技术扩增VNTR位点并经片段长度多态 相似文献
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目的为了获得引物3'端存在SNP点突变的插入缺失遗传标记rs10644346所有等位基因片段。方法基于等位基因特异性PCR原理,设计一条共用上游引物,二条3’端倒数第二个位置特异性碱基的下游引物。运用该三条引物检测150个无关个体及10例亲子关系已确定的三联体,同时运用其中二条引物(共同上游引物和其中一条下游引物)扩增9例样本。结果三条引物扩增150个无关个体均有清晰扩增片段;10例三联体案例亲代与子代扩增片段均符合孟德尔遗传定律;二条引物扩增9例样本后发现特定片段丢失。结论本次研究设计的三条引物PCR,证明特异性碱基位置除了通常的3'末端,理想条件下3'端的其他位置(如倒数第二个位置)也可以成为有效选择,该三条引物设计方法为检测引物侧翼存在点突变的遗传标记提供了一种新的参考。 相似文献
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<正> 人类基因组由约30亿个碱基对组成,其中短串联重复序列(Short tandem repeat STR)一般由2~7bp为单位组成核心序列重复排列[1]。人类基因组中每15~20kb就出现1个STR基因座。 聚合酶链式反应分析时,STR等位基因片段大小一般为100~500bp。由于扩增的片段短,可多基因座复合扩增,不仅灵敏度高,而且方便快捷,已广泛应用于个体识别、亲权鉴定、考古、基因诊断等方面,是目前最理想的DNA遗传标记[2]。本研究选择的D3S1358、vWA、FGA、,TH01、TPOX、CSF1P0、D5S818、D13S317、D7S820基因座,个体识别率高,均为美国法庭科学PCR检验金标准位点[3]。本文作 相似文献
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中国人p33.6位点的扩增片段长度多态性 总被引:3,自引:1,他引:3
用PCR、小型聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法对小卫星区域p33.6(D1S111)位点的扩增片段长度多态性(Amp—FLP)进行分析和对100例无关中国人p33.6位点的等位基因频率进行调查及数据处理,发现该位点核心序列重复数从9到22之间的全部14个等位基因,片段长度分布于435~925bp之间,基因频率为0.5~35.5%,杂合度为76%。对6个家系共22名相关个体进行分析,符合孟德尔遗传定律;对人体各种不同组织DNA进行该位点的分析,显示出高度的一致性。该位点适用于法医学上的个人识别以及亲子鉴定。 相似文献
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北京地区汉族人群PentaE、PentaD遗传多态性 总被引:3,自引:0,他引:3
PentaE、PentaD基因座分别位于人类第 15号和第 2 1号染色体长臂上 ;核心序列均为AAAGA。目前国内尚未报道。本文作者运用扩增片段长度多态性分析技术 ,对北京地区汉族 2 0 1份无关个体血样(取自本实验室日常案件的样本 )进行上述两个基因座多态性调查 ,现报道如下。2 0 1份血样 ,按Promega公司powerPlexTM16System试剂盒的方法进行检验 ,其中PentaE基因座片段大小分布于 379~ 4 74bp之间 ,检出等位基因 19个 ( 5~ 2 4 ,其中 9等位基因未检出 ) ,基因型 2 10个 ,基因频率分布在 0 0 0 … 相似文献
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目的以线粒体DNA为目标序列,探讨生物检材的种属来源问题。方法复合扩增线粒体DNA细胞色素b基因(Cb)片段和D-环HVI上人源特异性DNA片段,2%琼脂糖凝胶电泳检测复合扩增产物谱带;用常规测序技术获得种属来源不明的检材Cytb基因序列,登陆美国国家生物信息中心网站主页(http://www.ncbi.nlm.nih.gov),将Cytb序列的测序结果用BLAST2.2.9[2004.5.1]进行匹配查询,查询数据库中存在的与其相匹配的物种条目。结果检材经复合扩增后电泳检测可区分人源性检材和非人源性检材;用生物信息法可确定检材种属来源结论检测线粒体DNA细胞色素b基因和D-环HVI的有关序列可在DNA分子水平上鉴别人源性检材和非人源性检材,结合测序的分子生物信息学方法,可对检材进行种属鉴定。 相似文献
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mtDNA—HVⅠ和细胞色素b片段的复合扩增及其法医学应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨复合扩增mtDNA D环HV I和细胞色素b片段进行种属鉴定和个体识别的方法及mtDNA-HV I多态性。方法用两对引物同步扩增HV I片段与细胞色素b片段,银染显带检测扩增产物,ABI377测序仪及荧光测序技术分析扩增产物序列多态性。结果人类有279bp,358bp两条带,动物只有358bp一条带。通过对131例随机广东汉族人群个体进行mtDNA控制区(15997~16236))序列测定统计,得出此区域的序列多态性。共发现69个位点变异,平均每个个体存在2.679个碱基突变,检出67个单倍型,基因多样性为97.92%。结论mtDNA控制区(15997—16236)具有较高的序列多态性。为良好的个体识别标记。复合扩增mtDNA D环HV I与细胞色素b片段进行测序分析可以同步进行种属鉴定和个体识别。 相似文献
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目的 探索可应用于法医实践的快速直接PCR扩增方法,以缩短扩增时间,提高STR分型速率.方法 联合运用AmpF(l)STR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒与TaKaRa快速PCR检测试剂构建快速直接PCR体系,以FTA血卡为模板,采用优化后的扩增程序在快速PCR仪上进行扩增,分型结果与常规直接扩增方法相比较.结果 AmpF(l)fSTR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒与TaKaRa的快速PCR检测试剂针对血卡的联合扩增,所得STR分型结果与常规方法一致,扩增用时由常规直接扩增所需的175 min缩短为55 min.结论 采用快速直接PCR方法进行扩增,可得到与常规直接扩增一致的DNA分型,扩增时间明显缩短,DNA分型速率大幅提高. 相似文献
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目的建立一种简便、经济、高效的SNP复合扩增体系,为法医学应用打下方法学基础。方法选择5个Y-SNP位点——IMS-JST164520、IMS-JST021354、IMS-JST003305、M119和M134,针对每一位点设计5′端带有通用报告引物(universal reporter primer,URP)的等位基因特异性引物,先利用等位基因特异性PCR技术扩增不同位点的等位基因片段,再利用荧光标记的URP扩增检测所有位点的等位基因。结果成功构建了5个Y-SNP荧光复合扩增体系,分型结果显示:同一SNP位点的两个不同等位基因表现为不同颜色的产物峰,不同SNP位点间等位基因片段长度不同。5个Y-SNP在武汉汉族群体中的单倍型多样性为0.8655。结论基于URP的SNP复合扩增体系具有简便、经济、高效的特点,具有较高的法医学应用价值。 相似文献