应用mtDNA16S rRNA基因测序鉴定肉产品种属

目的 应用mtDNA 16S rRNA基因测序方法进行肉产品种属鉴定.方法 15份有关部门送检的未知动物肌肉样本,3份市购猪、牛和羊的肌肉为对照样本.常规酚-氯仿法提取模板DNA,分别用通用引物和特异性引物扩增mtDNA的16S rRNA基因片段,产物用1.5％琼脂糖电泳检测,扩增的基因片段由上海生物工程公司进行序列测...     

应用mtDNA 16S rRNA基因鉴定动物组织种属

目的应用线粒体DNA 16S rRNA基因PCR测序方法进行动物组织种属鉴定。方法未知动物内脏样本8份,已知马鹿、北山羊、绵羊和鹅喉羚肌肉样本各1份作为对照。采用用常规酚-氯仿法提取模板DNA,分别用哺乳动物通用引物和4种已知对照特异性引物扩增16S rRNA基因片段,产物用2.0%琼脂糖电泳检测,并进行序列测定及与基因库已有的序列同源性比对。结果 8份未知样本经哺乳动物16S rRNA通用引物扩增,均检测出阳性条带;用鹅喉羚特异性引物扩增,均检测出阳性特异性条带;用其他3种特异性引物扩增,均未检出阳性条带;未知样本扩增的基因片段经测序及同源性比对,与鹅喉羚的同源性为96%~100%。结论本文未知动物样本均为鹅喉羚内脏组织。本文方法可在动物检材种属鉴定中选用。     

基于12s rRNA的犀牛角制品DNA条形码鉴定分析

目的通过对几种涉案犀牛角制品的12s rRNA条形码序列比对分析,探析12s rRNA在犀牛角制品种属鉴定中的应用可行性。方法以3个案件中的涉案犀牛角制品为材料,采用改良的基因组DNA提取方法,PCR扩增DNA条形码片段12s rRNA。结果通过序列比对与分析,表明12s rRNA可将涉案犀牛角制品鉴定到种的水平。结论 DNA条形码12s rRNA可以作为一个新手段对形态上无法鉴别的犀牛角制品进行准确的种属鉴定,为案件的定性与量刑提供可靠的依据。     

一种简便的DNA提取方法在动物毛发检验中的应用

目的建立一种简便的DNA提取方法,用于动物毛干的DNA抽提。方法利用PCR缓冲液及蛋白酶K在PCR仪上对毛发进行消化,以此DNA为模板,扩增mtDNA 12S rRNA基因的部分片段并进行序列测定,测序结果在GenBank上进行BLAST搜索,再利用DNAMAN软件进行同源性分析。结果利用这种新DNA抽提法能从无毛囊毛发中获得后续PCR扩增所需的线粒体DNA。结论该法在无毛囊毛发样本鉴定中具有较高的应用价值。     

微滴式数字PCR技术用于生物样品种属鉴定和绝对定量

目的 运用微滴式数字PCR技术进行生物样品的种属鉴定和绝对定量.方法 选择人mtDNA两个编码基因ND4和16S rRNA,设计特异性引物与探针,用人来源及常见动物样本验证种属特异性,再用重组质粒和2组共16份人来源生物检材,倍比稀释.使用微滴式数字PCR技术进行种属检验和绝对定量,验证其灵敏度和稳定性.结果 人重组质粒FAM （ND4）可进行人来源样品的检测,其检测结果与各级稀释梯度基本吻合,微滴式数字PCR技术可以检测出反应体系中低至单拷贝的DNA.结论 微滴式数字PCR技术可以进行生物样品的种属鉴定和绝对定量,并具有很高的灵敏度和特异性,可应用于日常法医物证检验.     

STR基因座荧光标记复合扩增检测及其法医学应用

目的建立荧光标记复合扩增检测4个STR基因座的方法,应用于法医学亲权鉴定与个人识别。方法用6-FAM标记D3S1754引物,HEX标记D4S2366和D12S375引物,TMR标记D1S549引物,PCR复合扩增,310基因分析仪电泳自动收集电泳结果数据,GeneScanAnalysisSoftware3.7NT计算扩增产物片段相对大小,Genotyper誖3.7NT软件进行样本基因型分型。将该方法应用于法医学亲权鉴定与个人识别。结果建立了荧光标记复合扩增检测4个STR基因座基因型的方法,具有良好的稳定性和较好的灵敏度,分型结果准确。结论研究建立的方法操作简便,分型结果稳定可靠,可用于遗传多态性研究和法医学亲权鉴定与个人识别。     

北京地区汉族人群16个非CODIS STR基因座的遗传多态性

目的调查16个非CODIS STR基因座(D6S477、D22-GATA198B05、D15S659、D8S1132、D3S3045、D17S1290、D14S608、D2S441、D18S535、D13S325、D10S1435、D11S2368、D1S1656、D7S3048、D10S1248和D19S253)在北京地区汉族人群的遗传多态性。方法应用GoldeneyeTMDNA身份鉴定系统18NC试剂盒,对北京地区300名汉族无关个体DNA进行PCR扩增,3130XL遗传分析仪电泳分析,GeneMapper v3.2分析等位基因片段大小。结果 16个非CODIS STR基因座在北京地区汉族群体基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡,杂合度在0.677～0.873,个体识别率在0.890～0.967,非父排除率在0.393～0.741,多态信息含量在0.706～0.853。结论这16个非CODIS STR基因座在北京地区汉族群体中具有较好的多态性,对群体遗传学研究和法医学应用具有重要意义。     

3个miniSTR基因座四色荧光复合分型体系的构建及应用

目的建立D3S3053、D6S474、D20S482（扩增片段〈150bp）3个miniSTR基因座四色荧光复合分型体系,用于高度降解DNA样本的基因分型。方法采用6-FAM、HEX、TAMRA荧光染料标记D20S482、D3S3053、D6S474基因座上游引物,构建并优化复合扩增体系,在ABI310遗传分析仪上对扩增产物进行电泳分析,Genemapper3．2软件分析产物片段大小并进行分型。采用上述体系对120份河北汉族健康无关个体血样进行检测,并计算群体遗传学参数。比较该体系与ID试剂盒用于高度降解检材的成功率及灵敏度。结果D3S3053、D6S474、D20S4823个miniSTR基因座荧光标记复合扩增分型体系稳定可靠,灵敏度达50pg,用于高度降解检材分析的成功率明显高于ID试剂盒。3个基因座在河北汉族人群中的累积个人识别能力为0．998,累积非父排除率为0．84。结论该系统可用于分析高度降解DNA样本的基因分型,进行法医学个人识别和亲权鉴定。     

利用唾液斑DNA上12S rRNA基因片段进行动物种属鉴定

目的通过检测唾液斑DNA确定案件所涉及动物的种属。方法通过提取动物唾液斑DNA,扩增其线粒体DNA上的12S rRNA基因片段,并进行DNA测序,测序结果在GenBank上进行BLAST搜索,再利用DNA MAN软件进行同源性分析。结果从唾液斑中成功地提取到了基因组总DNA,并成功扩增出了用于动物种属鉴定的12SrRNA基因片段。结论所报道的方法能用于动物种属鉴定。     

浮游生物16S rDNA检测在大鼠溺死鉴定中的价值

目的建立浮游生物16S rDNA PCR检脸法应用于溺死的鉴定。方法将15只SD大鼠随机分为溺死组、死后抛尸组和正常对照组,死后分别取脑、肝、肾和肺等脏器,提取DNA.用特异性引物扩增浮游生物16S rDNA第三和第四可变区特异片段。结果溺死组5例,肺全部检出(100%)浮游生物16S rDNA;肝、肾分别检出4例(80%);脑检出3例(75%)。死后抛尸组仅1例在肺中检出浮游生物(20%)。正常对照组均未检出。苗论浮游生物16S rDNA PCR检验法可用于溺死的鉴定。     

辽宁汉族人群D6S1043和D12S391基因座遗传多态性

D6S1043染色体定位6q16.1,重复序列为（ATCT）n[1];D12S391基因座染色体定位12p13.2,重复序列为（AGAT）8-17（AGAC）6-10（AGAT）0-1[2]。本文应用PCR和PAGE等技术对D6S1043和D12S391基因座在辽宁地区汉族人群中的遗传多态性进行调查,为法医学应用提供基础数据。     

植物DNA条形码技术用于交通命案的调查

目的以rDNA-ITS序列片段为植物DNA条形码,对涉及一例交通命案的植物检材进行种属鉴定,判断三轮车左侧车体上提取的树皮样物质与农用车所运的树木是否为同一树种。方法采用改良CTAB法提取植物DNA,先将DNA纯化,再进行rDNA-ITS的PCR扩增,然后对PCR产物切胶、回收,克隆、测序,对测序结果进行BLAST分析,并构建系统发育树。结果三轮车上粘附的树皮来源于柑橘（Citrus sunki）,农用车所运的树木为界山三角槭（Acer buergerianum）,两者非同一种属。结论用rDNA-ITS序列片段用作植物DNA条形码对植物种属进行鉴定,可获得可靠的鉴定意见。     

陈旧骨骼及牙齿的性别检验

为分析陈旧骨骼及牙齿的性别，建立了从陈旧人骨骼和牙齿中提出DNA的方法。通过PCR技术扩增，得到X－Y染色体上的单拷贝同源基因片断（AmelogeninGene）。结果显示，从死亡后2年、4年、7年和10年的4个骨骼和牙齿样品中，均成功地获得了特异的PCR扩增片段。女性为单一的106bp条带，男性为106bp和112bp两条谱带。其快速、简单、可靠，为陈旧骨骼和牙齿的性别鉴定提供了方法。     

利用DNA条形码技术鉴别植物

目的研究利用DNA条形码技术鉴定上海地区常见植物叶片种类,在物种鉴定水平的基础上,进一步讨论利用分子标记技术对该类物证进行同一认定可行性。方法随机选取上海地区常见的9种植物,在其非新鲜的状态下利用高盐法提取植物组织的DNA,PCR扩增叶绿体rbcL和matK基因片段并且回收测序,通过数据库比对确定植物的物种。结果利用双基因鉴定分析系统,在随机收集的9份样品中,均达到物种水平的鉴定。结论利用DNA条形码技术,可以在物种水平准确地鉴定植物叶片类物证。     

皖南地区汉族人群15个STR基因座遗传多态性

目前,短串联重复序列（short tandem repeat,STR）分型检测已被广泛应用于国内外法医学个人识别和亲权鉴定中。本文采用Identifiler荧光标记复合扩增系统对皖南地区汉族人群15个STR基因座（D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818和FGA）遗传多态性进行调查,为法医学个体识别、     

硅藻硝酸消化法与浮游生物16S rDNA PCR法在溺死鉴定中的比较

目的比较和探讨硅藻硝酸消化法与浮游生物16S rDNA PCR法在溺死鉴定中的应用价值。方法收集40例温州医科大学法医学系2010—2011年受理并证实溺死的鉴定案件,每例案件标本包括肺、肾、肝及现场水样4份样本,分别运用硅藻硝酸消化法与浮游生物16S rDNA PCR法对标本进行检验,硅藻硝酸消化法和浮游生物16S rDNA PCR法所需各器官检材量分别为约20g和2g,现场水样分别为15mL和1.5mL,从所需检验时间以及检出率等方面进行比较分析。结果硅藻硝酸消化法检出硅藻主要为中心硅藻纲和羽纹硅藻纲,浮游生物16S rDNA PCR法可扩增出一条162 bp的条带。平均检验每例案件所需的检验时间,硅藻硝酸消化法为(95.30±2.78)min,少于浮游生物16S rDNA PCR法(325.33±14.18)min(P0.05)。两种方法对现场水样及肺样本的检出率均为100%,而对肝及肾样本的检出率,浮游生物16S rDNA PCR法均为80%,高于硅藻硝酸消化法40%和30%(P0.05)。结论在溺死的法医学鉴定中,应根据具体情况来挑选合适的实验室检验方法。与硅藻硝酸消化法相比,浮游生物16S rDNA PCR法具有检材用量少、信息量大、特异性高等特点,有一定的推广和实践价值。     

ABO位点限制性扩增片段长度多态性的研究

建立了PCR扩增、限制性酶切、8％（T）、5％（C）聚丙烯酸胺凝胶垂直电泳和银染检测ABO位点的限制性片段长度多态性的方法体系。应用Amp-RFLP技术对185名中国人（哈尔滨）ABO位点的基因频率和基因型分布进行了调查和统计分析。ABO位点特异片段长度为140～200bp，基因频率为0．2000～0．5568。6种基因型频率为0．973～0．3135，杂合度0．5838，Dp值0．7146。经H－W平衡吻合度检测，完全符合群体遗传多态分布。通过对11个家庭33名相关个体的分析，证明完全符合孟德尔遗传定律。ABO基因型检验适用于法庭科学的个体识别和亲权鉴定。     

6个新的STR基因座复合扩增体系的建立及应用

目的构建6个常染色体STR基因座的荧光复合扩增体系,应用于法医学DNA检验。方法筛选6个STR基因座D4S2366、D3S3045、D18S1002、D20S481、D22S689、D4S2639,根据复合扩增要求设计引物并采用不同荧光染料进行标记,经过反复调整和优化,建立6基因座荧光复合扩增体系,并用该复合扩增体系对224名华东汉族无关个体进行分型,计算出常用法医遗传学参数。结果使用该荧光复合扩增体系,在224名华东汉族无关个体中,6个STR基因座D4S2366、D3S3045、D18S1002、D20S481、D22S689、D4S2639分别检出7、8、9、10、9、9个等位基因和21、26、21、23、28、32种基因型,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。杂合度（H）分布为0.714～0.808,个体识别率（DP）为0.874～0.934,二联体非父排除率（PED）为0.310～0.453,三联体非父排除率（PET）为0.485～0.628,多态信息含量（PIC）为0.672～0.784,二联体累积非父排除率（CPED）为0.947689,三联体累积非父排除率（CPET）为0.993345,累积个人识别能力（CDP）为0.999999543。结论构建的荧光复合扩增体系具有较高的法医学应用价值,D4S2366等6个常染色体STR基因座在华东汉族群体中均具有高度多态性,可作为常规商品化试剂盒的有效补充,用于突变情形的亲权鉴定以及依据亲权指数值不能明确鉴定意见的亲权鉴定。     

用RT-PCR法区别生前与死后伤

12只SD大鼠随机分为生前伤、死后伤、麻醉伤和正常对照四组，损伤时间为15min，取创缘皮肤为检材；IL－6引物为寡聚核着酸引物（27hP），内对照引物为Tx基因（20hP），用TRIZOLTMTotalRNA提取试剂盒抽据总RNA，AMV逆转录酶使mRNA逆转录成cDNA，PCR扩增得出：在生前伤、麻醉伤以及正常皮肤中均能扩增出IL－6cDNA片段（590hp）和内对照Tx基因片段（188b），在死后伤组只能扩增出Tx基因片段；图像分析凝胶灰度扫描；生前损伤组与麻醉组无显著性差异，而二者与正常皮肤组有统计学差异。藉此，运用RT－PCR法可以准确区别大鼠实验性损伤的生前伤与死后伤。     

成都汉族群体10个STR基因座的遗传多态性

目的获得成都汉族群体10个短串联重复序列（short tandem repeat,STR）基因座的群体遗传学数据,评估其法医学应用价值。并对其种属特异性进行研究。方法Chelex法提取100名无亲缘关系的成都汉族个体血液样本的DNA,PCR扩增,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银显色分型。选择10种常见的动物样本进行种属特异性研究,对上述10个基因座的种属特异性进行评价。结果D1S2145、D3S2433、D5S1507、D5S2502、D8S2319、D9S926、D16S767、D17S2181、GATA140E03和GATA196B10基因座在成都汉族群体中等位基因个数分别为6、5、8、5、6、7、7、5、7和7,基因型个数分别为17、14、28、15、16、18、15、14、19和21;等位基因和基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。经与10种动物样本比较,D3S2433、D5S1507、D5S2502、D8S2319和CATA196B10有较好的种属特异性,其余基因座分型区内少部分动物有扩增产物。结论上述10个STR基因座在成都汉族群体中具有较好的遗传多态性,在个体识别和亲权鉴定中具有一定的应用价值。