4种固相颗粒吸附法提取滤纸血痕DNA效果的比较

目的探讨4种固相颗粒吸附法提取滤纸血痕样本DNA的效果。方法含有1μL静脉血的滤纸血痕180份,分为4组,每组45份。分别采用4种固相颗粒吸附法(DNAIQ~(TM)系统、D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规的硅珠法)对上述样本进行DNA提取,对比各组DNA溶液的浓度及STR分型检验结果。结果 D盾超敏DNA提取试剂盒[(3.764±1.790)μg/mL]、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒(3.634±1.112)及常规硅珠法(3.350±1.250)提取到DNA溶液的浓度无统计学差异(P0.05),但均高于DNA IQ~(TM)系统(1.864±1.207)(P0.001);D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒及常规硅珠法样本图谱峰高大于DNA IQ~(TM)系统(P0.001),超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规硅珠法样本图谱峰高大于D盾超敏DNA提取试剂盒(P0.01)。结论 D盾超敏DNA提取试剂盒、超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒及常规硅珠法对于滤纸血痕的DNA提取效率高于DNA IQ~(TM)系统;超高效硅珠纯化DNA提取试剂盒和常规硅珠提取到的DNA溶液可能具有更高的质量。     

硅珠法在纯化污染检材中的应用

目的改进硅珠法在纯化污染DNA样本中的应用方法。方法对硅珠法中的具体步骤进行改进,直接纯化、浓缩Chelex法获得的不纯DNA,采用IdentifilerTM试剂盒进行复合扩增,产物经ABI3100测序仪分型检测。结果纯化后的DNA获得了满意的DNA分型。结论硅珠法能够有效地去除DNA样本中的污染物,直接用于纯化Chelex-100法提取的DNA。     

改良硅珠法提取DNA的灵敏性及稳定性评价初探

目的通过比较对改良硅珠法提取DNA的灵敏性和稳定性进行评价。方法样本模板使用9947A(0.1ng/μL),以30pg为等差,配置10~700pg共24种不同浓度的DNA模板,分别采用常规硅珠法与改良硅珠法提取并纯化模板DNA,在Gene Amp PCR System 9700上进行PCR扩增,ABI 3500XL型荧光分析仪进行电泳检测。结果与9947A标准品阳性对照比较,采用常规硅珠法检验,24份样本均未获得成功分型;采用改良硅珠法检验,当模板量达到550pg时,即可得到所有基因座的成功分型;模板量达到580pg及以上时,16个基因座图谱峰值均可超过200RFU,分型稳定准确。结论改良硅珠法提取DNA易于操作,稳定性较好,灵敏度优于常规硅珠法,可在法医微量物证DNA检验中应用。     

室外毛巾上腐败血痕STR分析1例报道

1材料与方法1.1案例2006年某日,深圳市某山顶发现一具高度腐败女尸,现场提取一块方形小毛巾(有灰黑色可疑血痕),送检做DNA检测。1.2方法1.2.1提取DNA方法一:常规Chelex-100法[1]提取方形小毛巾上可疑血痕。方法二:应用德国QIAGEN公司生产的BioRo-bot EZ1全自动核酸纯化仪[2](以下简称BioRobotEZ1)提取方形小毛巾上可疑血痕。(1)剪取适量检材,置0.5 ml Eppendorf管中,加入EZ1试剂盒(EZ1 DNA Tissue Kit(48)(Cat.No.953034))中试剂BufferG2 190μl,PK 10μl,56℃裂解30 min,去载体将裂解液转移置2.0 ml样本管中。(2)在BioRobo…     

关于血缘关系鉴定中基因突变判断的探讨

利用十几个STR系统的基因座进行血缘关系鉴定时,如果仅有一个基因座不符合遗传定律,是否判断为基因突变,由于没有直接的论证手段,历来是个难解的问题[1-2]。本文通过两个案例对血缘关系鉴定中基因突变的判断进行探讨。1材料和方法1.1检材案例1:碎尸案,采集失踪者韩某的母亲及三个姐姐的血样。案例2:贩毒案,采集犯罪嫌疑人及携带的男婴的血样。1.2方法1.2.1DNA提取血样用Chelex-100提取法(总体积200μl)提取模板DNA。1.2.2STR分型[3]上述血样采用ProfilerPlus试剂盒(ABI公司)和Cofiler试剂盒(ABI公司),或Identifiler试剂盒(ABI公…     

应用硅珠法提取陈旧骨骼DNA

骨骼相对于人体其他的组织脏器腐败降解慢,是进行高度腐败及白骨化样本DNA检验的唯一检材。但骨骼DNA的提取比较困难,本文运用传统的硅珠法提取骨骼DNA取得了很好的效果。1材料与方法1.1样本1~4年水浸泡、土埋的股骨、肱骨等样本,来自本实验室日常检案检材。1.2方法1.2.1骨骼DNA提取用水洗净骨骼表面,晾干。锯成小块,用锉打磨内外表面。去离子水、乙醇和5%bleach浸泡、晾干,磨成粉末。取骨粉5g;加入0.5mon/L EDTA(pH8.0)溶液,搅拌均匀置于摇床上脱钙12h,去离子水洗两遍,去上清,重复4次[1];沉渣中加入适量裂解液(6mon/L GuSCN,20mo…     

泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响

目的 研究泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。方法 泥浆悬液和稀释血混合,制成混有灰尘、泥土的生物样本以模拟现场生物物证,分别用加热裂解和胍盐化学裂解的方式进行细胞裂解,硅珠法提取DNA后用Identifiler Plus试剂盒进行PCR扩增及毛细管电泳检测,并对电泳结果进行比较;用泥浆悬液代替硅珠提取稀释血DNA,反向验证泥土中二氧化硅对硅珠法提取现场生物物证DNA的影响。结果 混有泥浆悬液的4μL、20μL稀释血加热裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 969.7±376.9 RFU、9 706.7±349.8 RFU;混有泥浆悬液的4μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后无法获得完整STR分型;混有泥浆悬液的20μL稀释血胍盐化学裂解,提取扩增后得到完整STR分型,平均峰高1 899.8±801.3 RFU;泥浆悬液代替硅珠提取20μL稀释血得到完整STR分型。结论 泥土中的二氧化硅在胍盐存在条件下会与DNA结合,导致硅珠法提取现场生物物证DNA的回收效率降低。     

进行PCR时发生中断的补救方法

在进行PCR检验时被中断,常有发生,一般的补救办法就是重新建立反应体系,重加模板,重新扩增。本文在PCR的各个阶段人为地制造PCR中断,研究中断发生时所处阶段以及中断状态持续时间长短对继续PCR的影响。1材料与方法1.1试剂仪器与环境以硅珠法提取人血DNA作为扩增模板。AmpFl-STR PROFILER PLUS(以下简写为PP)和IDENTI-FILER(以下简写为ID)试剂盒(ABI)。2700、9700型PCR扩增仪(PE公司),3100基因分析仪(ABI)。环境室温在18℃~22℃间波动。1.2方法根据ABI AmpFlSTR PROFILER PLUS用户手册推荐,本文将热循环的条…     

两种DNA提取法对签字笔上脱落细胞STR分型比较

目的比较Chelex-100法和硅珠法两种DNA提取法,在签字笔上附着微量脱落上皮细胞分型中的应用效果。方法 17名志愿者每人使用14支签字笔,每支笔每天使用20min,为期1个月,平均分为两组,分别保存1、3、5、7、14、21和28d,同时运用Chelex-100法和硅珠法两种方法提取签字笔上遗留微量脱落细胞中的DNA,用Identifiler复合扩增系统在AB I 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型,同时采集上述17名志愿者口腔拭子作为对照。结果以基因座检出个数为指标,使用后签字笔保存1、3、5、7、14、21和28d后,采用Chelex-100法和硅珠法两种方法提取DNA并进行分型检出的基因座个数相比差异均有统计学意义(P0.01);口腔拭子保存1、3、5、7、14、21和28d后,采用Chelex-100法和硅珠法两种方法提取DNA并进行分型检出的基因座个数相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论对于微量检材,应用硅珠法提取的DNA分型效果明显优于Chelex-100法,具有较高的应用价值,而在检材量比较多时区别不明显。     

指甲末端微量物证的DNA检验

1材料与方法1.1材料检材取自近两年35例刑事案件,其中受害人指甲31例(男11例,女20例),嫌疑人指甲4例(均为男性)。1.2方法用0.5cm×0.5cm滤纸两步擦拭法[1]转移指甲末端微量物证,加入5%Chelex-100和蛋白酶K,震荡混匀后置56℃保温1h,99℃8min,提取的DNA用Microcon-100柱纯化处理。用Amp FlSTR(ProfilerPlusTM系统复合扩增试剂盒进行STR基因座复合扩增,扩增产物经ABI 3100或ABI 3130X1型基因分析仪荧光检测分型。2结果与讨论在送检的35例检材中,检出含有他人DNA的案例15例,其中受害人为女性的13例,其中婴幼儿1例;男性2例。具体见表…     

洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA

目的考察洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA的应用价值。方法收集200枚刑事案件中受害人指甲,采用洗涤法结合硅珠法提取指甲垢DNA;用Identifiler试剂盒进行PCR扩增,3030xl遗传分析仪进行分型检测。结果应用洗涤法结合硅珠法在200枚指甲中有64枚(32%)检出异体DNA,其中52枚为混合型,12枚为单一异体DNA;另有104枚检出受害人单一DNA。结论洗涤法结合硅珠法可应用于指甲垢DNA的提取。     

DNA IQ^TM系统在混合斑精子DNA检验中的应用

笔者在强奸案件混合斑精子的DNA检验中,以差异裂解法第一步消化去除女性细胞得到精子沉淀后,采用DNA IQTM系统直接提取混合斑中精子DNA,在200余份检材的检验中获得较满意结果。现将方法报告如下:1材料与方法1.1材料取自本实验室日常检案积累的混合斑样本216份。主要仪器和试剂采用9700PCR扩增仪(美国ABI公司)、ABI3100型遗传分析仪(美国ABI公司)、DNA IQTM系统(Promega公司)、AmpF1STRIdentifiler试剂盒((美国ABI公司)。1.2方法1.2.1 DNA提取参照差异裂解法,经过套管离心去除女性细胞后,得到沉淀精子,加入100~200ulDNA …     

联苯胺试验对血痕DNA检验的影响

目的探讨联苯胺试验及相关试剂对血痕DNA检验的影响。方法制作含1μL静脉血的滤纸血痕970份,其中10份为对照样本,960份经联苯胺试验及相关试剂分别处理后,采用Chelex-100法和硅珠法提取DNA,Amp F詛STR~(TM)Identifiler~(TM)Plus PCR扩增试剂盒进行复合扩增,对比各组STR分型结果。结果联苯胺试验后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(3.80±1.34)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;联苯胺试验后干燥处理,硅珠法有13例(21.7%)获得全部STR基因座分型结果,且STR基因座检出数[(12.90±1.49)个]远高于Chelex-100法[(4.70±1.96)个](P0.05);加入冰醋酸后立即提取DNA,硅珠法的STR基因座检出数为(9.40±2.09)个,而Chelex-100法均未获得STR分型结果;只加冰醋酸后干燥处理以及只加四甲基联苯胺乙醇饱和溶液或3%过氧化氢溶液,两种方法均获得完整15个STR基因座分型结果。结论联苯胺试验对血痕的后续DNA检验有很大的影响,Chelex-100法不适合联苯胺试验后血痕的DNA检验,联苯胺试验后干燥处理及采用硅珠纯化的方法可有效提升联苯胺试验后血痕的STR基因座检出数。     

3种提取胶带粘面汗潜指印中DNA的方法比较

目的比较胶带粘面汗潜指印中DNA提取的方法。方法分别采用硅珠法、QIAMicrokit法、硅珠-QIAMicrokit法提取胶带粘面的汗潜指印中DNA,STR复合扩增,荧光电泳检测。结果用QIAMicrokit法、硅珠-QIAMicrokit法提取胶带粘面汗潜指印中DNA,检测成功率分别为21%和36%。硅珠法检测未获成功。结论硅珠-QIAMicrokit法提取胶带粘面汗潜指印中的DNA比QIAMicrokit法,检验时间更短,检测成功率更高。     

硅珠法提取生物检材DNA的影响因素

正在酚-氯仿有机法、Chelex-100法、磁珠法及硅珠法几种DNA提取方法中,硅珠法在脱落细胞等微量生物检材以及骨骼、牙齿等疑难生物检材中的成功应用得到了很多学者的认可[1-3]。随着硅珠法的不断推广应用,有学者对传统的硅珠法进行了改良以提高其提取模板DNA的灵敏度[4],也有人通过实验证实加大检材量能够提高硅珠法在脱落细胞DNA中的提取浓度[5]。本研究系统地比较了硅珠量、硅珠悬浮时间以及     

利用STR分型方法进行同胞关系鉴定

本文运用人类短串联重复序列(shorttandemrepeats,STR)分型方法对1案例进行了同胞血缘关系鉴定,通过这一案例的分析得出了一些数据,供同行们参考。1案情2004年,应委托人王某之要求,对5位已知同胞兄弟姐妹与另一位可疑个体之间是否存在同父同母之同胞关系进行鉴定。2材料和方法2.1DNA抽提取5名同胞兄妹的血样(1,2,3,5,6号)和可疑个体血样(4号),用Chelex-100快速提取法[1]提取DNA。2.2PCR反应用ABI公司荧光标记扩增试剂盒(AmpFlSTRTCofilerPCRAmplificationKit、AmpFlSTRTMProfilerPluPCRAmplificationKit)对DNA进行PCR扩…     

GC/MS法测定血液中的米氮平

目的采用液液提取-GC/MS法检测血液中米氮平。方法用0.1mol/L NaOH溶液调节血液pH值为8～9,以二氯甲烷∶环己烷(4∶6)混合溶剂作为提取溶剂,液液提取法提取血液中米氮平,外标法气相色谱/质谱联用仪定性定量分析。在2mL血中分别添加标准米氮平1、0.5、0.1μg,进行回收率测定。结果血液中添加米氮平的平均回收率为91.5%,方法的工作曲线为Y=1E+06X-16206,相关系数r=0.999 7,线性范围0.5～10μg/mL,最小检出限0.1μg/mL(S/N=46)。结论本文方法操作简便,适合于血液中米氮平的定性、定量分析,可在实际捡案中选择使用。     

江苏地区汉族人群15个STR基因座频率调查

采用五色荧光标记引物复合扩增技术 ,对江苏地区 12 0名汉族无关个体进行了 15个STR基因座的基因分型 ,旨在为法医学应用提供基础资料。1　材料和方法12 0例无关汉族个体的血样均系本实验室日常检案积累 ;所有样本的DNA均用硅珠法[2 ] 或Chelex[1]法提取后 ,参照AmpF1STRIdentifiler试剂盒 (PE公司 )及ABI310型遗传分析仪的使用说明书进行扩增和检测 ,并分别计算 15个基因座的基因频率、杂合度(H)、个体识别率 (Dp)及多态信息量 (PIC)。2　结果和讨论12 0例无关个体的 15个STR基因座的等位基因频率见表 1。对每个基因座进行 χ2 …     

盐城地区汉族人群15个STR基因座的遗传多态性

本文利用复合STR技术,应用PowerPlex(16System试剂盒对213名盐城地区汉族无关个体进行15个基因座的遗传多态性调查。现报道如下:1材料与方法213名盐城地区汉族无关个体血样,全部为本实验室办案积累。chelex法[1]或硅珠法[2]提取血样DNA,应用PowerPlex(16System试剂盒复合扩增,扩增体系10μl,热循环参数和电泳体系各组份配比按试剂盒所附操作手册设置。主要仪器:ABI9700扩增仪、ABI3100-Avant基因分析仪。对基因型数据作χ2检验。利用PowerStats分析软件对群体数据进行处理,得到15个STR基因座的杂合度(H)、个体识别能力(DP值)、偶…     

山西汉族人群DYS460基因座遗传多态性

本文对山西地区汉族群体的DYS460基因座遗传多态性进行了调查,现报道如下。1材料与方法1.1样品100名无关男性个体和20名女性个体来自山西汉族人群,取外周血1ml,用EDTA抗凝,DNA提取采用TKM法[1]并做相应调整:TKM破坏红细胞,白细胞用2×蛋白酶K消化液(20 mmol/L Tris-HCl,pH7.6;20 mmol/L EDTA,pH8.0;300 mmol/L NaCl;1%SDS)和蛋白酶K(100μg/ml)55℃水浴3~5h。酚-氯仿抽提,无水乙醇沉淀,最后溶于无菌去离子水中。1.2方法引物引物序列参照基因库GDB,由大连TaKa-La公司合成。PCR扩增及电泳检测50μl反应体系,含50~100ng基因…