尼龙膜套管分离技术对混合斑中精子细胞DNA的提取

目的建立新型的混合斑中精子细胞分离的方法,并评价其应用价值。方法收集性侵案件中的40份混合斑检材,分别采用常规差异裂解法和尼龙膜套管分离技术进行精子细胞分离,使用硅膜试剂盒(Forensic DNA Extraction Kit for Soft Tissues)提取精子细胞DNA,Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus PCR扩增试剂盒进行PCR扩增,3500x L基因分析仪进行电泳检测,并对两种分离方法的结果进行对比。结果 40份混合斑检材中,采用尼龙膜套管分离技术的检材仅3份有女性成分微弱残留,余均获得了完整的单一男性分型。而采用常规差异裂解法分离的检材中,有25份完全未检出男性精子细胞STR分型,15份检出男性精子细胞STR分型(7份不完整男性精子细胞STR分型,6份有女性成分残留,2份单一的男性精子细胞STR分型)。结论本研究建立的尼龙膜套管分离技术适用于混合斑中精子细胞的分离,特别是对含有大量女性细胞而精子细胞较少的检材提取效果明显,整个提取实验成本低廉、快速简便。     

差异提取试剂盒在混合斑DNA提取中的应用

目的评估差异提取试剂盒对混合斑样本中的精子和上皮细胞DNA分离提取的有效性。方法采用差异提取试剂盒,选择性裂解精细胞和上皮细胞,结合磁珠法分别对人为控制条件下制备的模拟混合样本和案件中的混合斑检材进行精细胞DNA和上皮细胞DNA的分离提取。对所提取的DNA进行定量分析和STR分型。结果该试剂盒能从精子和上皮细胞不同比例的混合斑中提取出高纯度的精细胞和上皮细胞DNA。结论该差异提取试剂盒适用于性侵害案件中混合斑检材的DNA提取。     

显微操作法提取混合斑中精子细胞方法的探讨

目的尝试建立一种提取混合斑中精子细胞的检测方法。方法在人为控制条件下,制备精液—阴道液混合斑,分别使用显微操作法与差异裂解法分离精子细胞,提取DNA,进行STR基因型检测。结果采用显微操作法检测成功率11/12,差异裂解法成功率1/12,两者有显著性差异。结论显微操作法可有效获取精子细胞,排除女性物质和其它杂质的干扰,STR分型成功率优于差异裂解法。     

免疫磁珠法分离混合样本中血液成分的探究

目的 基于免疫磁珠法分离脱落上皮细胞中的白细胞，消除或减弱混合检材中血液来源STR分型对结果分析的干扰。方法 分别取两名不同个体的血液和口腔脱落上皮细胞，按不同比例制备成混合样本作为实验组，并同时制备细胞量相等的对照组。应用免疫磁珠法分离实验组样本中白细胞，并与对照组以相同条件进行DNA提取、扩增、分型，对比两组STR分型结果。结果 当血液量较少时，对照组为混合STR分型，经免疫磁珠法分离混合检材中白细胞后，实验组为单一来源STR分型；当血液量较多时，此时对照组为混合STR分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带峰高较低甚至丢失，经免疫磁珠法后，实验组仍为STR混合分型，但口腔脱落上皮细胞来源的STR分型谱带成为主峰；当混合样本中口腔脱落上皮细胞微量，血液占比极大时，此时对照组为血液来源的单一STR分型结果，经免疫磁珠法后，实验组为STR混合分型，包含口腔脱落上皮细胞来源的所有等位基因分型。结论 该方法可用于分离脱落上皮细胞中血液成分，降低血液来源的DNA比例，能够改善此类混合检材中目的细胞的STR分型结果，为刑事案件中含有血迹浸染的混合生物检材的检验提供了一种新思路。     

3种分离提取混合斑精子DNA的方法比较

性犯罪案件中最常见的生物学检材为精液与阴道分泌液混合斑,其精子DNA的提取通常情况下采用常规的差异裂解细胞法结合酚、氯仿抽提[1],但由于检材条件各不相同,有些混合斑中精子细胞极少,核酸得率和纯度较低,有检测失败的可能或致使精子STR分型困难[2]。文献曾报道过多种改良方法[3,4],但其成功与否很大程度上受到检验人员的经验、水平等主观因素以及检材的具体条件影响。本文作者应用差异裂解法、Phase lock GelTM法[5]和D ifferexTM法[6]对三组不同条件的混合斑样品分离提取精子DNA,使用Powerplex16TM试剂盒分型,对3种方法进行比…     

PALM结合低体积扩增技术在混合斑检验中的应用

目的PALM系统联合应用低体积扩增技术,建立一种提取混合斑中精子DNA的分型方法。方法利用PALM切割捕获理想检材的精子细胞,将捕获的细胞直接放置到低体积扩增玻片的反应位点上,裂解细胞之后进行PCR扩增。结果20个精子细胞8次分型中,7次分型结果完全正确。10个精子细胞8次分型中,4次分型结果完全正确。1个精子细胞8次分型中,出现位点的基因座均在10个以上。将该方法应用于两例实际案例的混合斑检材,取得了满意效果。结论联合运用PALM系统和低体积扩增技术对混合斑检材中的精子细胞检验具有重要意义。     

PALM结合低体积扩增技术在混合斑检验中的应用

目的PALM系统联合应用低体积扩增技术,建立一种提取混合斑中精子DNA的分型方法。方法利用PALM切割捕获理想检材的精子细胞,将捕获的细胞直接放置到低体积扩增玻片的反应位点上,裂解细胞之后进行PCR扩增。结果20个精子细胞8次分型中,7次分型结果完全正确。10个精子细胞8次分型中,4次分型结果完全正确。1个精子细胞8次分型中,出现位点的基因座均在10个以上。将该方法应用于两例实际案例的混合斑检材,取得了满意效果。结论联合运用PALM系统和低体积扩增技术对混合斑检材中的精子细胞检验具有重要意义。     

FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验

目的建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法。方法收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEPX SpectrumOrangeTMY SpectrumGreenTM试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光捕获显微分离系统分离男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒结合低体积扩增技术分别对男女成分进行STR扩增。结果荧光原位杂交后,可清晰分辨混合斑中的男女细胞。捕获20个精子细胞可以得到完整的STR分型,检出率为80%。随着精子数目增多,检出率提高而等位基因丢失率降低。30个精子检出率最高,为95%。结论激光捕获显微分离联用FISH技术可用于混合斑中男女细胞DNA的分离检验。     

激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞

目的 评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection.LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值.方法 配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液.分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用IdentifilerTM试剂盒进行STR基因型检测.结果 LC...     

DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

微流控芯片技术应用于精阴混合斑分离的研究进展

在性侵案件中，精阴混合斑检材是常见且具有重要证据价值的物证，如何从中分离出嫌疑人精子细胞并检出其STR分型，是破案的关键，更是法医DNA实验室必须解决的问题。目前，国内实验室主流应用的差异裂解法以及基于此原理的改良方法，都存在难以克服的缺点。微流控技术的不断发展为混合斑中精子细胞的分离带来了新思路，基于不同原理并不断演进的微流控芯片被研制出来以尝试解决此难题。本文从研究和应用进展角度对机械操控法、流体动力和捏流分选融合法、声波差异提取法、介电泳法、SLeX糖芯片法等5种用于精阴混合斑分离的不同类型微流控芯片进行了概述与简要比较。随着相关技术的不断发展和完善，推出具有体积小、速度快、效果稳定等优点，可以广泛适用于各级法医DNA实验室进行案件混合斑分离的芯片将指日可待。     

DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA

目的研究脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用。方法收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-I纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果。结果应用DNase-I纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉。结论DNase-I纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定。     

尿液及尿斑DNA分型的研究

目的研究尿液及尿斑的DNA提取及其检验。方法用Chelex100法及QIAampMiniKit提取尿液及尿斑样本中的DNA,进行PCR扩增及STR检验。结果新鲜的及存放时间在12h以内的尿液样本能得到较好的分型结果;存放2d左右的尿液样本有50%能检出基因型;存放7d及更长时间的尿液样本全部不能检出基因型;尿斑样本的分型成功率很低。结论较新鲜的尿液样本均能进行DNA分型,在法医检案中具有应用价值。     

混合斑中精子DNA抽提方法的改进

目的改善混合斑中精子DNA的抽提效率。方法对不同条件下的混合斑采用不同方法提取精子DNA,进行PCR扩增及STR分型。结果联合运用Chelex法和商品化试剂盒进行精子DNA抽提,可比普通Chelex法快速、准确。结论Chelex法与商品化试剂盒的联合运用可提高混合斑DNA分型的成功率。     

运用酚-氯仿法结合磁珠法提取蝇蛆体内人类DNA

目的建立运用酚-氯仿法结合磁珠法从蝇蛆嗉囊内提取人类DNA的方法,从而提高STR分型检验的灵敏度。方法采用酚-氯仿法对蝇蛆嗉囊内容物中的人类DNA进行提取,提取产物经磁珠法纯化浓缩后用QuantifilerTM人类DNA定量试剂盒在7500型实时荧光定量PCR仪上进行PCR定量,再用AmpF■STR IndentifilerTM试剂盒在3130XL-Avant遗传分析仪上对这些DNA样本进行STR分型。结果本研究建立的方法可增加模板DNA浓度约为单独使用酚-氯仿法的2倍。用此方法提取到的DNA浓度[（0.218±0.041）ng/μL]可获得全部16个STR分型结果。结论酚-氯仿法结合磁珠法可以有效地提高提取到的人类DNA样本STR分型检验的灵敏度,对于从事法医昆虫学方面研究的工作者有较好的实用价值。     

免疫磁珠法与差异裂解法检验混合样本的效果观察

目的分析应用免疫磁珠分离技术和差异裂解法对混合样本的DNA检验效果,评价其在法医学应用中的价值。方法制备含有不同数量精细胞与阴道上皮细胞混合悬液和植绒混合斑拭子,分别采用MOSPD3抗体、SPAG8抗体免疫磁珠法及差异裂解法对样本进行检验,观察分析不同比例的混合细胞悬液,以及不同保存时间植绒混合斑拭子DNA分型的正确率。结果当混合细胞悬液内精细胞与阴道上皮细胞比例约1∶10时,免疫磁珠法的正确率明显高于差异裂解法(P0.01);当比例等于或高于1∶1时,两种方法正确率的差异无显著性意义(P0.05)。植绒拭子混合斑的免疫磁珠法正确率明显低于差异裂解法(P0.01);随混合斑保存时间的延长,差异裂解法正确率无明显下降(P0.05)。结论免疫磁珠法适用于新鲜混合样本中精细胞的分离检验,且在精细胞含量较低时优势更明显,差异裂解法较适合陈旧混合斑的分离检验。     

葡萄胎的DNA检验

目的探讨一例强奸案中的葡萄胎样本的DNA检验及结果分析。方法用Identifiler试剂盒对葡萄胎样本和受害人血样进行荧光复合STR基因座扩增并分型。结果该例的葡萄胎在15个STR基因座上分型均为纯合子,应属于单精子受精的完全性葡萄胎。结论葡萄胎类型多种,对应着不同的DNA分型,在实际案件的检验中应引起注意。     

单细胞检验技术用于混合上皮细胞的分离和检验

目的建立单细胞显微捕获联合低体积扩增技术,用于混合上皮细胞检材分离检验。方法取5名男性口腔上皮细胞拭子浸泡液30μL,分别滴加到5份含同一女性皮肤表皮细胞拭子上,制成5份混合上皮细胞样本为实验组,同时制备同样的5份样本为对照组。实验组样本采用显微捕获单个口腔上皮细胞,并使用低体积扩增技术进行扩增;对照组用M48纯化试剂盒提取DNA,Identifiler试剂盒复合扩增,扩增体系为10μL。所有产物均用ABI 3130遗传分析仪进行STR分型。结果 5份实验组样本均得到男性STR分型结果,5份对照组样本则均仅得到混合分型结果。将该方法应用于1例强奸杀人案例检验,取得了满意效果。结论单细胞显微捕获联合低体积扩增技术可用于混合上皮细胞样本的分离检验。     

烟蒂DNA分型的研究

目的 研究烟蒂中DNA提取及其检验。方法 用Chelex-100法提取170枚烟蒂样本的DNA,进行PCR扩增及STR检验。结果 除1名志愿者提供的21枚烟蒂外层纸未能检出STR基因分型外,其余烟蒂外层纸均得到分型结果。加入少许烟丝的样本未能检出STR分型,与口唇接触的海绵有时可检出基因型,6个月内的烟蒂可检出小片段基因座。结论 烟蒂能进行DNA分型,在法医检案中具有应用价值。     

改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑精子DNA

目的采用改良差异裂解法结合硅珠法提取混合斑中精子DNA,并评价其应用价值。方法收集52例经常规差异裂解法检验含有女性分型的混合斑检材,采用改良差异裂解法结合硅珠法提取精子细胞DNA,IdentifilerTM试剂盒进行PCR扩增检验。并将常规差异裂解法结果作为对照。结果52例混合斑检材中,采用改良差异裂解法结合硅珠法检出单一男性精子成分有38例,男性分型检出率达到98．08％。结论改良差异裂解法结合硅珠法适合提取混合斑中精子DNA。